2022_Tecnicas_para_Contagem_Microbiana

Prévia do material em texto

1
Tópicos:
- Técnicas de contagem de micro-organismos.
- Contagem de células viáveis por plaqueamento.
- Técnicas de Spread plate e Pour plate
Contagem microbiana
2
Coleta, acondicionamento e 
transporte de amostras
3
Amostragem
Volume – Exp. Água
Homogeneização - Líquidos diluentes 
Sol. Sal., Água Pept., Tween
Líquida
Não líquida
1. Nº CÉLULAS
2. MASSA
1.1 TOTAIS
1.2 VIÁVEIS
2.1 DIRETA
2. 2 INDIRETA
1.1.1 MICROSCOPIA
1.2.1 DILUIÇÃO E PLAQUEAMENTO
2.1.1 MASSA SECA
2.2.1 DENSIDADE ÓTICA
2.2.2 ATIVIDADE METABÓLICA
Técnicas de contagem de micro-organismos
MÉTODOS
1.2.2 FILTRAÇÃO E PLAQUEAMENTO
(concentração da amostra)
1. Nº CÉLULAS
Farmacopeia Brasileira - Anvisa
•Farmacopeia Brasileira, 6ª edição. Volume 1. Volume 2.
•RDC nº 298, de 12 de agosto de 2019 (aprovação) 
•http://antigo.anvisa.gov.br/en/farmacopeia-brasileira
1.2 VIÁVEIS
1.2.1 DILUIÇÃO E PLAQUEAMENTO
Técnicas de contagem de micro-organismos
MÉTODOS
1.2.2 FILTRAÇÃO E PLAQUEAMENTO
(concentração da amostra)
https://www.gov.br/anvisa/pt-br/assuntos/farmacopeia/farmacopeia-brasileira
Contagem microscópica direta
Detalhe da região central da 
lâmina.
Câmara de Neubauer: lâmina escavada. 
7
1. Nº CÉLULAS
2. MASSA
1.1 TOTAIS
1.2 VIÁVEIS
2.1 DIRETA
2. 2 INDIRETA
2.2.1 DENSIDADE ÓTICA
8
Densidade Ótica
9
1. Nº CÉLULAS
2. MASSA
1.1 TOTAIS
1.2 VIÁVEIS
2.1 DIRETA
2. 2 INDIRETA
2.1.1 MASSA SECA
10
MASSA SECA
11
1. Nº CÉLULAS
2. MASSA
1.1 TOTAIS
1.2 VIÁVEIS
2.1 DIRETA
2. 2 INDIRETA
2.2.2 ATIVIDADE METABÓLICA
12
DOSAGEM ENZIMÁTICA
13
1. Nº CÉLULAS
2. MASSA
1.1 TOTAIS
1.2 VIÁVEIS
2.1 DIRETA
2. 2 INDIRETA
1.2.1 DILUIÇÃO E PLAQUEAMENTO
1.2.2 FILTRAÇÃO E PLAQUEAMENTO
(concentração da amostra)
14
Contagem de células viáveis por plaqueamento
Diluição seriada e plaqueamento
Spread plate colônias crescem 
somente na superfície do Agar. 
Incubação
Plaqueamento :Método de semeadura por espalhamento – “Spread plate”. 
Inóculo 1ml: UFC/ml amostra = Nº Colônias x Diluição (+)
0,1ml: UFC/ml amostra = Nº Colônias x Diluição (+) x 10
17
0,1 ou 1,0 ml da diluição 
preparada 
Verte-se o meio de cultura a 
50°C sobre a diluição em Placa 
de Petri estéril.
Homogeneizar
a placa com
movimentos
em forma de
Encubar
CONTAR AS COLÔNIAS
Contagem de células viáveis por plaqueamento:
Cálculo da Contagem
Unidade Formadora de Colônia por ml da amostra (UFC/ml)
Se usou inoculo de 1 ml:
Número de colônias x Diluição (sinal +).
Ex: 150 colônias x 10-5 , UFC/ml = 150 x 105 , UFC/ml = 15 x 106 , 
UFC/ml = 15.000.000.
Se usou inoculo de 0,1 ml:
Número de colônias x Diluição (sinal +) x 10.
Ex: 49 colônias x 10-3 , UFC/ml = 49 x 103 x 10 , UFC/ml = 49 x 104 , 
UFC/ml = 490.000
Os sistemas Quanti-Tray e Quanti-Tray/2000 (NMP) são usados para a 
quantificação de coliformes, E. coli, Enterococcus, Pseudomonas 
aeruginosa e contagens de placas heterotróficas. (95%)
20
21