Trifolium repens

Prévia do material em texto

Trifolium repens: um estudo 
fitoquímico
GEORGIA WOZNIKA, JAMILE CRISTINA, VITÓRIA GONÇALVES
Fabaceae é a terceira maior família de plantas
presença de isoflavonas, cumarinas, antraquinonas, 
glicosídeos cianogênicos, glucosinolatos, terpenóides e 
alcalóides. 
* Subfamílias contêm moléculas restritas, isoflavonas 
(fitoestrógenos)
Trifolium repens (trevo braco) tem raiz pivotante e um ramo 
principal, as folhas são elípticas a obovais ou quase 
obcordadas, pontiagudas ou entalhadas no ápice.
Possíveis usos farmacológicos
Trifolium pratense (mesmo gênero) 
Fonte de isoflavonas, empregado como agente terapêutico para infecções e nos sintomas 
climatéricos. 
Tem glicosídeos cianogênicos e derivados cumarínicos que diminuem a coagulação sanguínea. 
Trifolium repens: 
Flavonóides: atividade antimicrobiana e antioxidante
Taninos: propriedade adstringente que por via interna exercem efeito antidiarréico e anti-séptico, e 
impermeabiliza as camadas mais expostas da pele e mucosas por via externa, protegendo assim as 
camadas subjacentes. E efeito antimicrobiano e antifúngico.
Objetivos
● Avaliar os constituintes das flores de Trifolium repens.
Identificar Extrair
PurificarCaracterizar
Materiais e Métodos
Coleta
● A seleção da planta foi realizada seguindo os princípios da coleta 
quimiotaxonômica.
● Coletadas suas flores no dia 21 de fevereiro de 2021, Ponta Grossa.
● Após foi realizada a identificação taxonômica através da exsicata e secagem 
em estufa à 35°C.
Análises de Screening Fitoquímico 
● Foram realizadas de acordo com a Farmacopeia Brasileira 5ª Ed.
Materiais e Métodos
Análises Controle de Qualidade
● Foram realizadas de acordo com a Farmacopeia Brasileira 5ª Ed.
Extração
● Percolação: solução hidroalcoólica 70%, sem agitação ou adição de 
temperatura, durante cinco dias, sendo realizada a coleta a cada 2 horas.
● Extração líquido-líquido: hexano, diclorometano e acetato de etila.
Materiais e Métodos
Cromatografia em Camada Delgada
● Fração hexânica: 
○ Hex/AE 9:1
○ Anisaldeído
● Fração diclorometano:
○ Hex/AE 9:1
○ ClFe3 3%
● Fração AE:
○ AE:Acetona:Etanol 8:1:1
○ ClFe3 3%
Materiais e Métodos
● Cromatografia em Coluna
○ empacotamento da sílica;
○ extrato sólido da fração AE;
○ escala eluotrópica.
● Purificação
○ empacotamento da sílica;
○ cristais solubilizados em AE;
○ escala eluotrópica.
Solvente Diluição (%)
Hexano 100
Hexano:DCM 90:10, 80:20, 70:30, 60:40, 50:50
DCM 100
DCM:AE 90:10, 80:20, 70:30, 60:40, 50:50
AE 100
AE:Etanol 90:10, 80:20, 70:30, 60:40, 50:50
Etanol 100
Quadro 1 – solventes e suas diluições. 
Fonte: o autor. 
Resultados e Discussões
● Teor de umidade
Média: 9%
Desvio Padrão: 0,4690
Limite de aceitação: 8 à 14%
● Determinação de matéria estranha
Resultado: 1% de impurezas
Limite de aceitação: 2% (p/p)
Resultados e Discussões
● Determinação de cinzas totais
Média: 1,8% 
Desvio Padrão: 0,3386
Limite de aceitação: 2%
● Determinação da densidade relativa
Média: 0,357 g/cm³
Resultados e Discussões
● Determinação do Índice de 
Intumescência
Resultado: 0,13 mL 
Teor de umidades 9% (9,4690% - 8,5310%) Aprovado
Matéria Estranha 1% Aprovado
Cinzas Totais 1,8% (2,1386 - 1,4614) Reprovado
Densidade Relativa x: 0,357 ----------------
Índice de Intumescencia x: 0,13mL ---------------
Resumo
Screening 
Fitoquímico
Pesquisa de antraderivados
Reação de Borntraeger
 Reação de O- heterosídeos Reação de C- heterosídeos 
Reação específica para identificar antraderivados livres com 
solventes orgânicos; 
Ligação heterosídica é com o oxigênio ou com o 
carbono 
+ antraderivado livre = rósea a vermelha (antraquinonas)
 amarelo (antronas)
 - resultado negativo = sem coloração
Pesquisa de alcalóide 
Espera-se que forme precipitados nos tubos se houver presença de alcalóides. 
No reativo de Dragendorff cor alaranjada, no Meyer branco e no Bourchardart marrom.
Reação de Dragendorf Reação de Meyer Reação de Bouchardat
Pesquisa de Flavonóides
Reação de Shinoda
+ coloração rosa a vermelho
Reação AlCl3
+ fluorescência
Pesquisa de Flavonóides
Reação de PEW Reação de Taubouk HCl conc e hidróxido alcalino
+ coloração amarela a vermelha
adiciona o HCl conc, se a coloração 
(amarela) voltar a cor original do 
extrato é positivo para flavonoides.
+ fluorescência esverdeada+ Coloração vermelha 
Pesquisa de saponinas
Após agitação marcar altura da espuma e 
observar se persiste por 15 minutos.
+ SE PERSISTIR A ESPUMA
No caso das saponinas, não observou-se 
persistência da espuma no tubo de ensaio, então 
resulta negativo.
Pesquisa de Taninos
Reação com gelatina Reação com acetato de cobre Reação acetato básico de Chumbo
+ precipitado
- sem precipitado
Pesquisa de Taninos
Reação acetato ácido de chumbo Reação com FeCl3 Reação com alcalóides
+ precipitado
- sem precipitado
Pesquisa de Cumarinas
Usa-se reativos que ao reagir com a cumarina e 
submetido a luz ultravioleta apresenta uma coloração 
fluorescente esverdeada.
+ coloração fluorescente esverdeada
Screening Fitoquímico
GRUPOS RESULTADOS
ANTRADERIVADOS NEGATIVO
ALCALÓIDES NEGATIVO
FLAVONOIDES POSITIVO 
SAPONINAS NEGATIVO
TANINOS POSITIVO 
CUMARINAS POSITIVO
Resultados e Discussões
● Cromatografia em Camada Delgada (CCD)
○ Identificação dos compostos nos extratos de Trifolium repens.
Fração AE - 
flav. e flav. glicosilados
Fração DCM - 
flav. metoxilados
Fração HEX
Resultados e discussões
● Cromatografia em coluna
○ Fração AE (flavonóides);
○ Formação de cristais
○ CCD AE:acetona: etanol (8:1:1)
○ Revelador FeCl3
Resultados e Discussões
● Pesquisa de flavonóides
○ Cristais previamente agrupados
○ Estrutura semelhante à quercetina
Resultados e Discussões
● Cromatografia em Camada Delgada Comparativa (CCD Comparativa)
○ Purificação dos cristais;
○ Comparação com padrões de isoflavona, quercetina e rutina;
○ Principal atividade biológica da T. pratense não se aplica a T. repens
Conclusão
● Trifolium repens apresenta semelhanças gerais com seu gênero;
● Embora a Trifolium pratense seja utilizada para tratar sintomas da menopausa, 
a Trifolium repens não possui essa aplicabilidade;
● Presença de flavonóides e taninos confirmados: antimicrobiano e antioxidante/ 
antidiarreico e antisséptico;
● Necessidade de estudos futuros sobre atividades biológicas.
REFERÊNCIAS
ANVISA (Agência Nacional de Vigilância Sanitária) Farmacopeia Brasileira, vol. I. 5ª Ed. Brasília, 2010.
BLANCO, M. M.; LUCENA, E. P.; CASTRO, A. G. G. Isoflavonas estrogenica en especies espontaneas del género Trifolium. Archivos de zootecnia, v. 31, n. 121, p. 269 – 
280, 1982.
COSTA, A.F. Farmacognosia. v. III. 5 ed. Portugal: Fundação Calouste Gulbenkian, 1996.
GOMES, C. M. R.; GOTTLIEB, O. R.; GOTTLIEB, R. G.; SALATINO, A. Phytochemistry in perspective; Chemosystematics of the Papilionoideae, p. 465-488 in: POLHILL, R. 
M.; RAVEN, P. H. Advances in Legume Systematics. p 2. Royal Botanic Gardens, 1981.
GIORNO, Cecília del et al. Efeitos do Trifolium pratense nos sintomas climatéricos e sexuais na pós-menopausa. Revista da Associação Médica Brasileira, [S.L.], v. 56, n. 
5, p. 558-562, 2010. Elsevier BV.
MACIEL, Maria Aparecida M. et al. Plantas medicinais: a necessidade de estudos multidisciplinares. Química Nova, Rio de Janeiro, v. 25, n. 3, p. 429-438, maio de 
2002.
MATOS, F.J. Abreu. Introdução a fitoquímica experimental. 2. ed. Fortaleza, CE: Editora UFC, 1997.
MONTEIRO, Julio Marcelino et al. Taninos: uma abordagem da química à ecologia. Química Nova, [S.L.], v. 28, n. 5, p. 892-896, out. 2005.
REIS, A. Metabolismo de alcaloides e flavonoides em culturas de Rhodophiala bifida (Amaryllidaceae) e Trifolium pratense (Fabaceae). Monografia para obtenção do 
título de doutorado. Porto Alegre (Universidade Federal do Rio Grande do Sul), 2017.
SCHNEIDER, Raquel. Avaliação Agronômica, Morfológica e Molecular de PROGÊNIES de POLICRUZAMENTO DE TREVO BRANCO(Trifolium repens L.) em dois locais 
do Rio Grande do Sul. 2010. 136 f. Dissertação (Mestrado) - Curso de Zootecnia, Universidade Federal do Rio Grande do Sul, Porto Alegre, 2010. 
WINK, M. Evolution of secondary metabolites in legumes (Fabaceae). South African Journal of Botany, v. 89, p. 164–175, 2013.