PRATICA 2 Efeito pH e temperatura DA ATIVIDADE DE -AMILASE FÚNGICA COMERCIAL

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DETERMINAÇÃO DOS VALORES DE PH E TEMPERATURA ÓTIMOS DE ATIVIDADE DE α-AMILASE FÚNGICA COMERCIAL
1. OBJETIVO
Determinar os valores de pH e temperatura ótimos de atividade de α-amilase fúngica
2. DETERMINAÇÃO DO PH ÓTIMO DE ATIVIDADE DE α-AMILASE FÚNGICA (Grupos ímpares)
Para a determinação do pH ótimo de atividade de α-amilase fúngica, uma solução de amido foi tratada com uma solução desta enzima em solução tampão com diferentes valores de pH (4,0 – 10,0). O princípio está baseado pela diminuição da capacidade de ligação entre o amido e o iodo. Se ao aplicar uma solução de iodo houver a formação de mancha azul/negro, há uma presença forte de amido, o que significa que a enzima foi afetada negativamente pelo pH do meio, caso contrário, uma coloração amarelo/pálida, indica que o amido presente foi hidrolisado de forma eficiente pela enzima, conforme mostrado na Tabela 1 y Figura 1.
Tabela 1 – Efeito do pH na atividade de α-amilase fúngica
	pH
	Absorbância 620 nm
	Atividade enzimática (U/mL)
	Atividade relativa (%)
	4,0
	0,064
	163,73
	98,08
	5,0
	0,521
	102,80
	61,58
	6,0
	0,094
	159,73
	95,69
	7,0
	0,040
	166,93
	100,00
	8,0
	0,082
	161,33
	96,65
	9,0
	0,764
	70,40
	42,17
	10,0
	0,676
	82,13
	49,20
	Tubo controle
	1,292
	-
	-
Figura 1. Reação colorimétrica pelo método amido-iodo para determinação do pH ótimo de atividade de α-amilase fúngica
 
Figura 2. Efeito do pH na atividade da α-amilase fúngica
.
3. AVALIAÇÃO E DISCUSSÃO DOS RESULTADOS
A α-amilase (1,4-α-D-glucano-glucanohidrolase, E.C. 3.2.1.1) ocorre naturalmente em bactérias, fungos, plantas e animais, entretanto, não necessariamente com a mesma estrutura e padrão de ação sobre o amido. Esta enzima quebra as ligações glicosídicas α-1,4 presentes na parte interna das cadeias de amilose ou amilopectina. Desta maneira, qualquer ligação α- 1,4 na molécula de amido (exceto aquelas ligações α-1,6) pode sofrer hidrólise. Os produtos finais, da hidrólise por α-amilase fúngica, são maltose, maltotriose e outros malto-oligossacarídeos, dessa forma a α-amilase fúngica também tem uma ação sacarificante sobre o amido.
De acordo com a literatura, o pH ótimo para α-amilase fúngica está entre 5,0 e 7,0, possui caráter ácido e é solúvel em água. Em um estudo se determino que α-amilase de Penicillium commune reteve 95% de sua atividade em pH 5,0 e 98,8% em pH 7,0. Nossos resultados mostram proximidade com o que foi relatado por esses autores, conforme mostrado na Figura 2. Pode-se notar um pico de atividade (100%) quando o pH de incubação foi igual a 7,0, além disso, a enzima demostro a capacidade de manter uma alta atividade enzimática em uma estreita faixa de pH (6,0 e 8,0).
Também, se observa que em pH 5,0 a atividade enzimática diminui e acima do pH 8,0 também há redução grande da atividade. Podemos dizer então que em pH extremo (ou seja, muito ácido ou muito básico) atividade enzimática diminui significativamente. A maioria das amilases conhecidas apresentam maior atividade em valores de pH neutro ou levemente ácido, além disso que a atividade diminui rapidamente em pH alcalino. Uma provável explicação para este comportamento parece estar relacionada ao grau de ionização das moléculas e às mudanças conformacionais que podem ocorrer na estrutura proteica da enzima em meios extremos.
Por outro lado, estudos mostram que α-amilase de origem vegetal (cereais) são geralmente estáveis em pHs entre 5,5 e 8,0; enquanto, α-amilase de origem bacteriana (Bacillus subtilis) tem uma maior atividade em pH 7,0 e uma atividade estável em pHs entre 6,0 e 8,5. Em general, as enzimas com valores de pH ideal próximos a neutralidade são interessantes para a utilização em detergentes, fibras têxteis (desengomagen), na indústria do papel (eliminação de tinta de impressão para reciclagem de papel), produção de etanol, panificação e produção de xaropes.
Amostra obtido no pH 4,0 foi desconsiderado já que o resultado não está dentro do esperado por conta da coloração. Isso provavelmente devido a uma má prática de manipulação ao pesar ou transferir para os tubos de ensaio.
 
5	6	7	8	9	10	61.58146964856229	95.686900958466452	100	96.645367412140587	42.172523961661348	49.201277955271564	pH
Atividade relativa (%)