APRESENTAÇÃO DE ARTIGO - E COLI

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MICROBIOLOGIA DE ALIMENTOS
Sobrevivência de E. coli em morangueiros 
cultivados em estufa
Qualis Periódicos
1 Introdução
Escherichia coli O157: H7
❖ Causam a maioria dos surtos graves de doenças gastrointestinais 
relacionadas a infecções (diarreia leve, sangrenta e colite 
hemorrágica).
❖ Indústria dos EUA
1 Introdução
Escherichia coli O157: H7
❖ Água de irrigação
❖ Vida selvagem* - Veado - Solo contaminado
❖ Adubo
❖ ↓ Morangos e outras bagas Baga é o tipo 
mais comum de 
fruto carnudo 
simples
Objetivo
Determinar por quanto tempo a E. coli pode sobreviver em plantações de 
morango contaminados, durante as etapas do seu crescimento.
Justificativa
Poucos estudos, se for determinada a persistência de E. coli em pé de 
morangos contaminados durante o seu crescimento, isso torna essencial 
enfatizar as recomendações de boas práticas agrícolas na âmbito da 
indústria.
2 Materiais e Métodos
2.1 Culturas bacterianas e condições de cultura
Culturas de estoque foram 
mantidas congeladas à -70°C em 
caldo de infusão (BHI; Disco, Becton 
Dickinson, Sparks, Md) misturado 
com 10% de glicerol.
3 cepas de substitutos de E. coli (P1, 
P8 e P14) foram obtidas da coleção de 
cultura do Laboratório de Pesquisa em 
Segurança Alimentar. Cepas 
substitutas foram escolhidas 
(parecidas com cepas de E. coli O157: 
H7) (Marshall et al., 2005).
2 Materiais e Métodos
❖ Frascos selados de culturas de estoque congelados, descongelados 
sob água corrente fria, foram ativados em caldo soja tríptica (TSB; 
EMD, Gibbstown, NJ) e incubou-se a 35°C/24h.
❖ Antes de cada experimento, duas transferências consecutivas de 24h 
foram preparadas em TSB (35°C) antes de as células serem utilizadas 
para inoculação.
2 Materiais e Métodos
2.2 Preparação de inóculo
Volumes iguais (10 mL por 
cultura) de cada cultura 
foram combinados num 
tubo de centrifugação 
estéril.
Células eram colhida por 
centrifugação (4000 vel., 10 
min., 4°C) e lavado uma vez 
em 0,85% de NaCl.
Obteve-se uma 
concentração final de 
células de 
aproximadamente 
109 UFC/mL.
As suspensões de células lavadas 
foram diluídas em série (10 vezes) 
em Peptona a 0,1% (Becton 
Dickinson, Sparks, MD).
Em seguida foi realizado o 
plaqueamento superficial em ágar 
de soja tríptico (EMD, Gibbstown, NJ) 
para determinar a concentração 
celular.
2 Materiais e Métodos
2.3 Gestão de plantas de morango
Todas as plantas 
foram mantidas em 
estufa.
O solo e as plantas 
foram testados 
para a presença de
E. coli antes do 
início do plantio.
Os corredores foram 
removidos às 4 
semanas plantio e 8 
semanas após o 
plantio.
Morangos de dia 
neutro (cultivar: 
tribute) foram 
plantados em 
potes de 15 cm de 
profundidade.
Corredores de morango são caules
que crescem horizontalmente 
acima do solo e, eventualmente, 
produzir novas plantas de morango 
nos nós.
2 Materiais e Métodos
❖ No estudo, corredores foram removidos para evitar o crescimento de 
novas plantas e facilitar pesquisa envolvendo apenas as plantas que 
foram inoculadas com E. coli O157:H7.
❖ Aplicação de fertilizantes, herbicidas, inseticidas e rega quando 
necessário.
❖ Sistema de irrigação por gotejamento para minimizar o contato da 
água com folhas e frutas.
2 Materiais e Métodos
2.4 Inoculação de plantas de morango
❖ O inóculo das 3 cepas foi distribuído na plantas:
➔ Plantio;
➔ Remoção do 1 ° corredor (em 4 semanas);
➔ Remoção do 2 ° corredor (com 8 semanas);
➔ Uma semana antes da colheita (às 15 semanas).
❖ Antes da inoculação, uma folha plástica foi colocado sobre o solo no 
vaso para evitar a contaminação do solo com inóculo.
2 Materiais e Métodos
❖ As plantas foram contaminadas por inoculação pontual onde foi 10 mL 
(106 UFC/mL) do inóculo de E. coli foi colocado em gotículas de 1 mL.
❖ Essas plantas não foram tratados quimicamente nem regadas durante 
as primeiras 48h para que desse tempo para a E. coli penetrar nas 
superfícies da planta.
❖ Após 48h, para garantir que as plantas recebessem quantidade 
adequada de nutrientes e água para um crescimento ideal, foram 
regadas normalmente.
2 Materiais e Métodos
2.5 Análise microbiológica
❖ Na colheita (às 15 semanas), 5 morangos foram recolhidos de cada 
planta.
❖ Foram retirados 25 g de solo e 5 folhas aleatórias de cada planta de 
morango e colocadas em sacos estéreis.
❖ Com base no peso da amostra (morango, terra ou folhas), a 
quantidade apropriada de diluente (peptona tamponada estéril) foi 
adicionada para uma diluição de 10 vezes.
2 Materiais e Métodos
❖ O conteúdo dos sacos foram homogeneizados por 60s em laboratório 
(Seward 400C Stomacher) operando a 230 RPM.
❖ Alíquotas (1,0 ml ou 0,1 ml) do homogeneizado foram inoculadas 
superficialmente em ágar MacConkey (em duplicata) (MAC; Difco, 
Becton Dickinson, Sparks, Md.), foram incubadas a 35±2°C/4h.
❖ As colônias bacterianas rosadas foram contadas e registradas como 
UFC de E. coli morango, solo ou folhas.
2 Materiais e Métodos
2.6 Análise estatística
❖ Delineamento randomizado e os dados foram analisados utilizando 
PROC MIXED com programas adicionais.
❖ Números de E. coli viáveis foram analisados estatisticamente e médias 
foram avaliadas quanto a diferenças estatisticamente o teste de 
WallereDuncan.
❖ Diferenças significativas foram definidas em P <0,05 para todos os 
dados experimentais.
3 Resultados
3 Resultados
❖ 3.1 Sobrevivência de E. coli em morangos
- Populações menores no plantio e na quarta semana (morangos ainda não 
estavam presentes);
- Números mais altos na oitava semana e uma semana antes da colheita;
- Variação de 2,15 a 4,68 log10 UFC de acordo com o tempo de contaminação.
3 Resultados
❖ 3.2 Sobrevivência de E. coli no solo
- Solo e plantas estavam livres de E. coli no momento do plantio;
- Variação de 2,46 a 4,27 log10 UFC;
- Números maiores foram encontrados no solo contaminado no plantio.
3 Resultados
❖ 3.3 Sobrevivência de E. coli em folhas de morango
- Populações de E. coli menores no plantio e na quarta semana (pequeno número 
de folhas);
- Números mais altos na oitava semana e uma semana antes da colheita.
- Variação de 1,75 a 3,53 log10 UFC de acordo com o tempo de contaminação.
4 Discussão
❖ Água e solo são vetores comuns em contaminação por E. Coli O157:H7;
❖ Estudos comprovam que a E. coli O157:H7 sobrevive por várias semanas 
em águas deionizadas e lagoas, dependendo da temperatura;
❖ Segundo estudo de de Solomon (2002,2003), alfaces regadas com água
contendo o patógeno 102 UFC/mL, a população aumentou a cada ciclo de 
rega;
❖ No presente estudo plantas de morango foram contaminadas por E. coli,
via água e o patógeno sobreviveu no solo, folhas e frutas até a colheita (15 
semanas);
❖ Observou-se indicativo de contaminação cruzada no processo de
crescimento através da rega da planta.
4 Discussão
❖ Foi apresentada a questão: na fase do plantio e da remoção do 
primeiro corredor, não havia folhas ou frutos na planta, portanto, na 
colheita não deveria haver E. coli nas amostras;
❖ Gagliard e Karns (2000) demonstraram em um estudo, que o esterco 
inoculado com E. coli O157:H7 foi positivo para o patógeno em 
diferentes níveis, dependendo do tipo de solo;
❖ Os mesmos autores afirmaram que o microrganismo pode viajar 
abaixo do solo por mais de 2 meses após a aplicação inicial, devido a 
obstrução dos poros do solo ocasionado pela chuva;
❖ O presente estudo mostrou que a maior presença do patógeno no solo 
se deu 15 semanas antes da colheita.
4 Discussão
❖ Os dados fornecem evidências de que, se o morango e/ou folhas estão 
contaminados com E. coli, o solo também será contaminado.
❖ A população de E. coli foi maior nos morangos e nas folhas das plantas 
próximo da época da colheita;
❖ Baseado nesses resultados é provável que tenha havido diminuição de 
patógenos em plantas contaminadas mais cedo, pelo fato de ambos 
competem pelos nutrientes presentesno solo nessa fase de 
crescimento;
❖ A importância do teste do solo e uso de água potável antes da colheita 
são suportados pelos resultados do presente estudo.
4 Discussão
❖ Apesar dos estudos terem sido realizados em estufa sob condições 
controláveis, foi possível revelar o potencial da E. coli O157:H7 em 
contaminação cruzada através do solo, água, animais e manipuladores;
❖ O estudo não pode replicar as condições reais do campo, pois existem
fatores como irradiação solar, flutuações de temperatura, disponibilidade 
de água, circulação de ar, que podem influenciar diretamente nos 
resultados do presente estudo;
❖ A manutenção de boas práticas agrícolas durante a fase de crescimento
dos morangos é fundamental para garantir a segurança e integridade dos 
morangos e sustentar a viabilidade econômica da indústria do fruto.
1.Tema
❖ Inovador? Muito, apresenta uma lacuna de conhecimento sobre 
essa temática.
❖ De interesse na Indústria de Alimentos? Sim
❖ De interesse em Saúde Pública? Sim
2.Título
❖ Há coerência entre objetivo e conclusão da pesquisa? Sim
❖ Está bem elaborado (na forma e na escrita)? Sim
Análise Crítica
3.Introdução
❖ Foi construída com citações voltadas para o objetivo do estudo? 
Sim, porém por ser um tema inovador, não foram encontrados 
muitos estudos para uma introdução mais detalhada.
❖ Justifica a elaboração da pesquisa? Poucos estudos, se for 
determinada a persistência de E. coli em pé de morangos 
contaminados durante o seu crescimento, isso torna essencial 
enfatizar as recomendações de Boas práticas agrícolas na âmbito 
da indústria.
Análise Crítica
4.Objetivo
❖ Viável, atual, repetitivo, criativo, de importância para a 
sociedade, para a Indústria ou para a Saúde Pública, etc.? Mais 
importante para a indústria que trabalha com a matéria prima 
de morangos e frutas parecidas.
5.Materiais e métodos
❖ Metodologia aceita internacionalmente? Sim
❖ Descrição compreensiva? Não
Análise Crítica
6.Resultados e Discussão
❖ Resultados apresentados de forma clara e compreensível? Não
❖ Tabelas/gráficos de fácil interpretação? Não
❖ Os achados foram bem discutidos? Sim
❖ Discussão com base na literatura? Sim
❖ Se o trabalho fosse nosso, o que seria eliminado ou 
acrescentado? Tabelas mais objetivas e gráficos para uma 
melhor compreensão.
Análise Crítica
SHAM, A. L.; SVOBODA, A.; JIE, B.; NONNECKE, G.; MENDONCA, A. Survival
of Escherichia coli on strawberries grown under greenhouse conditions.
Food Microbiology, v. 46, p. 200-203, 2015.
Referência
	Slide 1
	Slide 2
	Slide 3: Qualis Periódicos
	Slide 4: 1 Introdução
	Slide 5: 1 Introdução
	Slide 6
	Slide 7: 2 Materiais e Métodos
	Slide 8: 2 Materiais e Métodos
	Slide 9: 2 Materiais e Métodos
	Slide 10
	Slide 11: 2 Materiais e Métodos
	Slide 12: 2 Materiais e Métodos
	Slide 13: 2 Materiais e Métodos
	Slide 14: 2 Materiais e Métodos
	Slide 15: 2 Materiais e Métodos
	Slide 16: 2 Materiais e Métodos
	Slide 17: 3 Resultados
	Slide 18: 3 Resultados
	Slide 19: 3 Resultados
	Slide 20: 3 Resultados
	Slide 21: 4 Discussão
	Slide 22: 4 Discussão
	Slide 23: 4 Discussão
	Slide 24: 4 Discussão
	Slide 25: Análise Crítica
	Slide 26: Análise Crítica
	Slide 27: Análise Crítica
	Slide 28: Análise Crítica
	Slide 29: Referência