BIG prova 2

Prévia do material em texto

BIG prova 2º Kelly e Márcia
Plasmídeos
• Plasmídeos são replicons: elementos de DNA extracromossômico se replicam de forma 
autônoma (Ori) e autocontrolada
• Genoma circular: plasmídeo circular ( E.coli)
• Genoma lineares: plasmídeo linear ( Streptomyces)
• Alguns se replicam em um amplo espectro de hospedeiro (vai e vem ou shuttle vectors)
• Regra Geral: plasmídeo de Gram positivas não se replicam em Gram negativas e vive e 
versa
• Genes não essenciais: vantagens adaptativas
• Resistencia, Metabolismo energético, Patogenicidade e simbiose, Disseminação e 
perpetuação
• Replicação: se inicia pela oriV e depende das proteínas que se ligam a oriV
• 1- Replicação do tipo teta
• 2- Replicação por círculo rolante
1- Replicação do tipo teta
- Ligação de DNA (baixo numero de copias)
- ou ligação de Rep: ligam-se a seq. Repetidas de 17 a 
22nt: iterons
- Alguns: DnaA + Rep
2- Replicação por círculo rolante
Controle do número de cópias: OriV
• Replicação intensa: fardo para 
células
• Replicação de menos: 
compromete distribuição para 
células filhas
Sistema Toxina-Antitoxina
Incompatibilidade
• Dois plasmídeos não se 
propagam estável na mesma 
linhagem
• Interferência no sistema de 
repartição ou replicação um 
do outro 
• Se não podem coexistir: 
pertencem ao mesmo Grupo 
de incompatibilidade (Inc)
• Classificação experimental
Vetor de 
Clonagem
Transformação, 
capacitação do 
DNA
• Um dos processo de troca de DNA entre 2 bactérias
• Dna liberado por uma bactéria no ambiente
• Este Dna é incorporado por uma bactéria receptora
• Essa capacidade de caprturar: Competencia: Bac 
Natural/e Competente
Competência Natural: transitória
• 1- Condições alteradas de crescimento
• 2- acesso a nutrientes
• 3- densidade celular (11quórum sensing’’)
• 4- carência nutricional
• 5- agente mutagênicos e antibióticos
• 6- alguns Gram negativas depende de seq. No DNA genomico
Regulação da transformação/ Relevância para 
as células
• Regulado por diferentes fatores que variam entre espécies
• É induzida pela presença de feromônios
• Ao captar o DNA externo→ vantagem adaptativa
• Risco de genes defeituosos ou prejudiciais ao genomas
• Teoria 1: Função nutricional ( porem secreção de DNAses seria + 
inteligente) 
• Teoria 2: reparo de lesões do DNA por rec. Homóloga
• Teoria 3: variabilidade genética ( resistência, fatores de virulência, 
proteção – ex canibalismo: a lise celular é vista apenas na população 
não competente)
Cap 
Estudando 
genes
- Endonulceases de restrição: atuam como tesouras moleculares reconhecendo sequencias 
especificas no DNA e clivando-o em fragmento menores
- Clonagem copia identica: 5 etapas
- 1- corte do DNA em locais precisos pela endonuclease de restrição
- 2- Seleção de uma pequena molécula de DNA capaz de autorreplicação: soa chamado 
vetores de clonagem, normalmente em lab esse vetores são modificaçãos de pequenas 
moléculas de DNA que ocorrem naturalmente encontradas em bac ou vírus
- 3 Ligação de dois fragmentos de DNA covalentemente: a enzima DNA-ligase liga o vetor 
de clonagem com o fragmento de DNA a ser clonado. Moléculas de DNA compostas 
desse tipo, compreendendo segmentos ligados covalentemente a partir de duas ou 
mais fonte soa chamados de DNA recombinantes
- 4 Deslocamento do DNA recombinante do tubo de ensaio para um organismo 
hospedeiro: o organismo hospedeitos fornce a maquinaria enzimática para a replicação 
do DNA
- 5 Seleção ou identificação de células hospedeitas que contem DNA recombinante: o 
vetor de clonagem em geral possui características que permitem que as células 
hospedeiras sobrevivam em um meio onde as células que não possuem o vetor 
morreriam, por tanto as células contendo o vetor são selecionáveis nesse meio
Clonagem
- Copia idêntica: 5 etapas
- 1- corte do DNA em locais precisos pela endonuclease de restrição
- 2- Seleção de uma pequena molécula de DNA capaz de autorreplicação: vetores de clonagem
- 3 Ligação de dois fragmentos de DNA covalentemente: a enzima DNA-ligase liga o vetor de 
clonagem com o fragmento de DNA a ser clonado. Moléculas de DNA compostas desse tipo, 
compreendendo segmentos ligados covalentemente a partir de duas ou mais fonte soa chamados 
de DNA recombinantes
- 4 Deslocamento do DNA recombinante do tubo de ensaio para um organismo hospedeiro: o 
organismo hospedeiros fornece a maquinaria enzimática para a replicação do DNA
- 5 Seleção ou identificação de células hospedeiras que contem DNA recombinante: o vetor de 
clonagem em geral possui características que permitem que as células hospedeiras sobrevivam 
em um meio onde as células que não possuem o vetor morreriam, por tanto as células contendo 
o vetor são selecionáveis nesse meio
Sitio de poli 
clonagem
• Podem ser criadas sequencias de 
DNA pela inserção de fragmentos 
de DNA sintéticos, os 
adaptadores, entre as 
extremidade a serem unidas. Os 
fragmentos de DNA inserido, 
contendo múltiplas sequencias 
de reconhecimento para 
endonucleases de restrição são 
conhecido como região de 
policlonagem