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GABARITO | Avaliação I - Individual (Cod.:823741) Peso da Avaliação 1,50 Prova 67096224 Qtd. de Questões 10 Acertos/Erros 9/1 Nota 9,00 Para detecção do DNA em bibliotecas de DNA, uma membrana é colocada em contato com as colônias na placa logo após o crescimento das colônias bacterianas em placas de cultivo contendo meio sólido. Algumas células irão se aderir à membrana, formando uma impressão das colônias presentes na placa. Em seguida, as células aderidas sofrem lise celular, a fim de liberar o DNA, que permanece aderido à membrana. Por fim, a membrana é incubada com sondas de hibridização marcadas, complementares à porção do gene de interesse, permitindo a visualização da posição dos clones que contêm o fragmento de interesse. Sobre a técnica exposta, assinale a alternativa CORRETA: A Northen-blot. B Hibridização in situ. C Hibridização em colônia. D Southern-blot. A clonagem de DNA se refere à produção, dentro de uma célula, de diversas cópias de uma sequência específica de um fragmento de DNA. Sobre o exposto, avalie as asserções a seguir e a relação proposta entre elas: I- A clonagem de DNA depende da utilização de um vetor, do fragmento de DNA e, posteriormente, de um organismo hospedeiro. PORQUE II- O fragmento de DNA de interesse, será inserido em uma molécula de DNA genômico com capacidade de autorreplicação (DNA do vetor), originando o DNA recombinante. Essa inserção se dá através de enzimas de restrição e enzimas de ligação. Assinale a alternativa CORRETA: A A asserção I é uma proposição falsa, e a II é uma proposição verdadeira. B As asserções I e II são proposições falsas. C As asserções I e II são proposições verdadeiras, mas a II não é uma justificativa da I. D As asserções I e II são proposições verdadeiras, e a II é uma justificativa da I. As endonucleases de restrição são produzidas naturalmente por diversas bactérias. De acordo com essas enzimas, classifique V para as sentenças verdadeiras e F para as falsas: ( ) As enzimas de restrição são utilizadas para fragmentar o DNA em regiões específicas, permitindo a manipulação do DNA. ( ) Cada bactéria produz uma enzima de restrição específica, que pode ser isolada e purificada a partir de colônias dessas bactérias. ( ) As enzimas de restrição não reconhecem sequências específicas, apresentando regiões de clivagem aleatórias de 4 a 8 nucleotídeos. Assinale a alternativa que apresenta a sequência CORRETA: VOLTAR A+ Alterar modo de visualização 1 2 3 Julyelle de Medeiros Spíndola Farmácia (4782952) 0 Semestres Meu Curso Estágio e emprego Biblioteca Comunicação Atendimento Financeiro Indicação Premiada Extensão https://ava2.uniasselvi.com.br/home https://ava2.uniasselvi.com.br/my-course https://ava2.uniasselvi.com.br/internships-and-jobs https://ava2.uniasselvi.com.br/communication https://ava2.uniasselvi.com.br/attendance https://ava2.uniasselvi.com.br/financial https://ava2.uniasselvi.com.br/award-indication https://ava2.uniasselvi.com.br/extension A F - F - V. B V - F - F. C V - V - F. D F - V - F. As bibliotecas de DNA e cDNA são essenciais para manter e replicar um fragmento clonado por tempo indeterminado. Sobre essas técnicas, associe os itens, utilizando o código a seguir: I- Biblioteca de cDNA. II- Biblioteca de DNA. III- Hibridização em colônia. ( ) Técnica que detecta os fragmentos do DNA de interesse com sondas específicas em meio de cultivo sólido. ( ) Clonagem de fragmentos aleatórios do DNA, permitindo a sua identificação, isolamento e sequenciamento do genoma. ( ) Clonagem de mRNAs, em que cada célula/tecido pode originar uma biblioteca diferente, considerando o padrão de expressão gênica específico, relacionado sempre a sua função. Assinale a alternativa que apresenta a sequência CORRETA: A III - II - I. B I - II - III. C I - III - II. D II - I - III. [Laboratório Virtual - Extração e Purificação de DNA e RNA] Conforme o sumário da prática, os ácidos nucleicos apresentam características estruturais específicas, que permitem que sejam isolados e manipulados para diversos tipos de aplicações. A técnica de hibridização in situ, por exemplo, baseia-se na complementaridade das fitas de DNA ou RNA, utilizando sondas fluorescentes para a detecção da fita complementar em uma determinada amostra. Essa técnica permite o estudo da expressão gênica. Outra técnica, que também tem o mesmo princípio e finalidade, é a reação em cadeia da polimerase transcriptase reversa (RT-PCR), muito utilizada no diagnóstico de algumas infecções e doenças. Considerando esses aspectos, o primeiro passo para a maioria das técnicas citadas é o isolamento e a purificação das moléculas de DNA e RNA. O processo de extração do DNA pode ser dividido em etapas. Com relação às etapas visualizadas na aula prática, assinale a alternativa CORRETA: A A primeira etapa é a Etapa de Ligação, em que adicionamos 250 µl de Proteinase K, 20 µl da amostra e 20 µl do tampão de lise S. B O principal composto adicionado na Etapa de Ligação é a Proteinase K. C Na Etapa de Lavagem, são adicionados 210 µl de álcool 96%. D A segunda etapa é denominada como Etapa de Ligação, em que é adicionado álcool 96% no eppendorf, homogeneizado, e 640 µl são transferidos para o tubo spin. O uso de bibliotecas de DNA ou cDNA permitem a manutenção e replicação do material genético em grandes coleções mantidas em colônias de bactérias, nas quais um fragmento específico de DNA ou um gene podem ser procurados. Sobre as bibliotecas de DNA e cDNA, avalie as asserções a seguir e a relação proposta entre elas: I- A bactéria E. coli é a principal célula hospedeira utilizada no processo de clonagem em vetores, inclusive na construção de bibliotecas de DNA e cDNA, em que cada bactéria irá internalizar apenas um vetor. PORQUE II- Assim que o vetor é inserido, em condições adequadas de diluição e meio de cultivo, em poucas horas corre a formação de diversos clones dos fragmentos inseridos, sendo cada um encontrado em uma colônia diferente de crescimento bacteriano. 4 5 6 Julyelle de Medeiros Spíndola Farmácia (4782952) 0 Semestres Meu Curso Estágio e emprego Biblioteca Comunicação Atendimento Financeiro Indicação Premiada Extensão https://ava2.uniasselvi.com.br/home https://ava2.uniasselvi.com.br/my-course https://ava2.uniasselvi.com.br/internships-and-jobs https://ava2.uniasselvi.com.br/communication https://ava2.uniasselvi.com.br/attendance https://ava2.uniasselvi.com.br/financial https://ava2.uniasselvi.com.br/award-indication https://ava2.uniasselvi.com.br/extension Assinale a alternativa CORRETA: A As asserções I e II são proposições verdadeiras, mas a II não é uma justificativa da I. B A asserção I é uma proposição falsa, e a II é uma proposição verdadeira. C As asserções I e II são proposições falsas. D As asserções I e II são proposições verdadeiras, e a II é uma justificativa da I. A técnica de eletroforese consiste na separação de moléculas de DNA, RNA ou proteínas em gel de agarose ou poliacrilamida. Essa separação se dá de acordo com o tamanho da molécula. Com base no processo de eletroforese em gel, analise as sentenças a seguir: I- Uma corrente elétrica é transmitida através do gel do polo negativo ao polo positivo. II- As moléculas de DNA são carregadas negativamente e são carregas por afinidade para o polo positivo. III- Moléculas menores tendem a migrar com maior dificuldade no gel. Já as moléculas maiores, tendem a migrar mais facilmente. Assinale a alternativa CORRETA: A As sentenças I e III estão corretas. B Somente a sentença III está correta. C As sentenças I e II estão corretas. D Somente a sentença II está correta. O advento das técnicas de biologia molecular possibilitou o estudo genético de diversos organismos, incluindo os seres humanos. Esses estudos têm trazido ganhos significativos no entendimento de doenças, síndromes e mecanismos de ação de substâncias.De acordo com a importância das técnicas de clonagem do DNA e construção de bibliotecas genômicas, classifique V para as sentenças verdadeiras e F para as falsas: ( ) As enzimas de restrição são utilizadas na construção de bibliotecas de DNA, com o objetivo de fragmentar o DNA genômico, já que podem ser conhecidas como tesouras moleculares. ( ) Os vetores são essenciais na técnica de clonagem e são utilizados tanto na construção de bibliotecas de DNA, quanto de cDNA, uma vez que carregam os fragmentos de DNA ou o cDNA extraído. ( ) As bibliotecas de cDNA são construídas a partir da extração do DNA de células ou tecidos, que posteriormente é submetido à clonagem do DNA. ( ) O mRNA é convertido em cDNA pela transcrição reversa, para então serem introduzidos em vetores e submetidos ao processo de clonagem para originar as bibliotecas de cDNA. Assinale a alternativa que apresenta a sequência CORRETA: A F - F - V - F. B V - F - V - V. C V - V - F - V. D V - F - F - V. [Laboratório Virtual - Extração e Purificação de DNA e RNA] Segundo o sumário da aula prática, as amostras contendo o DNA ou RNA purificados devem ser: 1) ressuspensas em um tampão e armazenadas em tubos, ambos “livres” de enzimas que possam degradá-las (como DNAse ou RNAse – nucleases); e 2) mantidas em baixas temperaturas (-20 ºC ou - 80 ºC). Todos os procedimentos devem ser realizados com luvas para evitar a degradação das amostras, devido à presença de nucleases nos fluidos corporais das mãos. De acordo com o processo de extração de DNA e RNA identificado na prática, associe os itens, utilizando o código a seguir: I- Etapa de Lise. II- Etapa de Ligação. III- Etapa de Lavagem. 7 8 9 Julyelle de Medeiros Spíndola Farmácia (4782952) 0 Semestres Meu Curso Estágio e emprego Biblioteca Comunicação Atendimento Financeiro Indicação Premiada Extensão https://ava2.uniasselvi.com.br/home https://ava2.uniasselvi.com.br/my-course https://ava2.uniasselvi.com.br/internships-and-jobs https://ava2.uniasselvi.com.br/communication https://ava2.uniasselvi.com.br/attendance https://ava2.uniasselvi.com.br/financial https://ava2.uniasselvi.com.br/award-indication https://ava2.uniasselvi.com.br/extension IV- Etapa de Eluição. ( ) Pipete 25 µl da Proteinase K no tubo Eppendorf. Em seguida, pipete 200 µl da amostra de sangue no mesmo tubo e, por último, pipete 200 µl do tampão lise S no tubo. Tampe o Eppendorf e homogeneíze no Vórtex por 20 segundos. Após esse tempo, incube o Eppendorf por 15 min. ( ) Pipete 210 µl de álcool 96% no Eppendorf e homogeneíze de novo no Vórtex. Em seguida, pipete 640 µl do Eppendorf para o tubo spin e centrifugue a 11.000 rpm por 1 minuto. ( ) Retire o Eppendorf da centrífuga, descarte o tubo de coleta e coloque o tubo spin em um novo tubo de coleta. Em seguida, pipete 500 µl do tampão de lavagem SI no tubo spin e centrifugue novamente. Repita o mesmo processo de troca de tubo de coleta, porém a lavagem utilizará 600 µl do tampão de lavagem SII, e centrifugue novamente. Por fim, repita o mesmo processo da troca do tubo de coleta e centrifugue novamente. ( ) Retire o Eppendorf da centrífuga, descarte o tubo de coleta e coloque o tubo spin em um novo tubo de coleta. Em seguida, pipete 200 µl do tampão de eluição S no tubo spin, espere 1 minuto e centrifugue a amostra. Assinale a alternativa que apresenta a sequência CORRETA: A II - III - IV - I. B I - II - IV - III. C I - II - III - IV. D IV - III - II - I. O sequenciamento de DNA permite a identificação de qual nucleotídeo ocupa cada posição na fita de uma molécula ou fragmento de DNA. As primeiras técnicas que permitiram sequenciar o DNA começaram a ser desenvolvidas na década de 70, com o método desenvolvido por Sanger. Sobre o método de Sanger, assinale a alternativa CORRETA: A A técnica de Sanger, utiliza terminadores de sequência em réplicas de DNA de uma fita molde diferenciada. B São utilizados iniciadores (primers), fitas de DNA réplicas da mesma fita molde, ou seja, com a mesma extremidade 5' e diferentes terminações 3', devido à inserção dos didesoxinucleotídeos, que são nucleotídeos terminadores de cadeia (ddNTP: ddATP, ddTTP, ddCTP e ddGTP). C Os didesoxinucleotídeos são ineficazes para a técnicas de Sanger, sendo utilizados somente os primers e diversas fitas de DNA réplicas da mesma fita molde, com a mesma extremidade 5'. D Os didesoxinucleotídeos são similares aos primers ou iniciadores, já que iniciam a reação em diferentes terminações 3'. 10 Imprimir Julyelle de Medeiros Spíndola Farmácia (4782952) 0 Semestres Meu Curso Estágio e emprego Biblioteca Comunicação Atendimento Financeiro Indicação Premiada Extensão https://ava2.uniasselvi.com.br/home https://ava2.uniasselvi.com.br/my-course https://ava2.uniasselvi.com.br/internships-and-jobs https://ava2.uniasselvi.com.br/communication https://ava2.uniasselvi.com.br/attendance https://ava2.uniasselvi.com.br/financial https://ava2.uniasselvi.com.br/award-indication https://ava2.uniasselvi.com.br/extension