DOENÇAS INFECTO-CONTAGIOSAS

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CENTRO DE EDUCAÇÃO PROFISSIONAL PROF. GRAZIELA REIS DE SOUZA 
DISCIPLINA: ANALISES IMUNOLOGICA II
PROFSSOR: WALDEIR LEÃO
TÉCNICO EM ANÁLISES CLÍNICAS - TAC
Analises imunológica II
Macapá-Ap
2015
CENTRO DE EDUCAÇÃO PROFISSIONAL PROF. GRAZIELA REIS DE SOUZA 
DISCIPLINA: ANALISES IMUNOLOGICA II
PROFSSOR: WALDEIR LEÃO
TÉCNICO EM ANÁLISES CLÍNICAS - TAC
Aplicação das provas sorológicas na elucidação de doenças infectocontagiosas
ALUNOS: 
ADNY 
LIZANDRA LEAL
NIELSON BEMJAMIM
PAULO ZAGALO
TARLIANE TELES 
Macapá-Ap
2015
1. INTRODUÇÃO
As doenças infecciosas podem ser causadas por vírus (como a hepatite, a rubéola e o sarampo) ou por bactérias (como o tétano, a tosse convulsa e a meningite).
 	Contra os vírus, o único tratamento, na maioria dos casos, é a vacina. Se esta não existir, o organismo ou vence a infecção com os seus próprios anticorpos ou entra em sofrimento. Se o responsável for uma bactéria, no caso de não ter sido efetuada uma prevenção com uma vacina, ou de esta não existir, a infecção pode ser combatida com antibióticos. Às vezes, porém, a doença consegue provocar lesões graves ou completamente irreparáveis, antes que se consiga intervir com o antibiótico, como é o caso, por exemplo, do tétano.
 Doenças infecciosas são contagiosas quando podem ser transmitidas de uma pessoa para outra.
 As mesmas podem ser transmitidas por contato com a pele, através de fluidos corporais, em alimentos ou bebidas contaminados; pelo sangue ou plasma sanguíneo – em transfusões de sangue –, ou ainda por gotículas de muco e saliva expelidas pela pessoa infectada ao tossir, espirrar e falar; ou por partículas do ar que contenham micro-organismos, embora vale lembrar que os caminhos e facilidade de transmissão variem de uma doença para outra.
Além disso, picadas de insetos ou mordidas de animais são outra forma de transmissão. Se um inseto, por exemplo, picar uma pessoa infectada, ele pode transportar o micro-organismo e passar a doença para outra por meio de uma picada (dengue). Os dois tipos mais comuns de doenças infecciosas são as infecções bacterianas e as virais.
Para aumentar a segurança no diagnostico, exige-se que os testes utilizados na triagem laboratorial apresentem alta sensibilidade. Define-se como sensibilidade de um teste diagnóstico a habilidade de detectar a doença em indivíduos realmente doentes e a especificidade pela capacidade de identificar corretamente a ausência de doença.
Os testes chamados de primeira geração, em que o antígeno é obtido por intermédio do lisado do patógeno, utilizados especialmente nas últimas décadas de 80/90.
Nos últimos 30 anos, novos testes de triagem sorológica foram sendo introduzidos, na medida em que os agentes patógenos eram identificados e reagentes disponibilizados. Atualmente, o método Enzyme Linked Immunosorbent Assay (Elisa) é o mais utilizado por permitir boa reprodutibilidade, fácil execução e possibilidade de automação. Os testes Elisa de segunda e terceira geração utilizam antígenos recombinantes e peptídeos sintéticos, respectivamente. 
O emprego dos testes de amplificação e detecção de ácidos nucléicos (NAT) é importante para o esclarecimento de reações indeterminadas nos testes de triagem sorológica, em virtude da elevada sensibilidade e especificidade que os mesmos apresentam. 
Desse modo os testes sorológicos têm como objetivo auxiliar nos diagnósticos de doenças infectocontagiosas por sua sensibilidade e alto grau de especificidade.
2. PRINCIPAIS DOENÇAS INFECTOCONTAGIOSAS:
2.1 SÍFILIS 
A sífilis é doença infecciosa crônica, que desafia há séculos a humanidade. Acomete praticamente todos os órgão e sistemas, e, apesar de ter tratamento eficaz e de baixo custo, vem-se mantendo como problema de saúde pública até os dias atuais.
A sífilis é causada por uma bactéria chamada Treponema pallidum, gênero Treponema, da família dos Treponemataceae, que inclui ainda dois outros gêneros: Leptospira e Borrelia.
2.1.1 DIAGNÓSTICO LABORATORIAL
 O diagnóstico laboratorial da sífilis e a escolha dos exames laboratoriais mais adequados deverão considerar a fase evolutiva da doença. Na sífilis primária e em algumas lesões da fase secundária, o diagnóstico poderá ser direto, isto é, feito pela demonstração do treponema. A utilização da sorologia poderá ser feita a partir da segunda ou terceira semana após o aparecimento do cancro, quando os anticorpos começam a ser detectados. 
2.1.2 Provas Sorológicas 
O T. pallidum no organismo promove o desenvolvimento de dois tipos de anticorpos: as reaginas (anticorpos inespecíficos IgM e IgG contra cardiolipina), dando origem aos testes não treponêmicos, e anticorpos específicos contra o T. pallidum, que originaram os testes treponêmicos. Os testes não treponêmicos são úteis para triagem em grupos populacionais e monitorização do tratamento, enquanto os treponêmicos são utilizados para confirmação do diagnóstico. 
· Testes não Treponêmicos
 Os primeiros testes para diagnóstico da sífilis foram reações de fixação de complemento. As reações de Wassermann e Khan utilizavam material extraído de tecidos de difícil estandardização e acabaram cedendo lugar aos antígenos mais purificados, como o VDRL (Venereal Disease Research Laboratory) que utiliza um antígeno constituído de lecitina, colesterol e cardiolipina purificada. A cardiolipina é um componente da membrana plasmática das células dos mamíferos liberado após dano celular e encontra-se presente também na parede do T. pallidum. A prova do VDRL positiva-se entre cinco e seis semanas após a infecção e entre duas e três semanas após o surgimento do cancro. Portanto, pode estar negativa na sífilis primária. Na sífilis secundária apresenta sensibilidade alta, e nas formas tardias a sensibilidade diminui. A reação não é específica, podendo estar positiva em outras treponematoses e em várias outras situações. Essas reações falso-positivas podem ser divididas em transitórias e persistentes. As transitórias negativam em seis meses (malária, gravidez, mononucleose infecciosa, viroses, tuberculose e outras). As reações persistentes permanecem positivas além de seis meses (hanseníase virchowiana e doenças autoimunes, como lúpus).
· Testes Treponêmicos 
Os testes treponêmicos utilizam o T. pallidum como antígeno e são usados para confirmar a reatividade de testes não treponêmicos e nos casos em que os testes não treponêmicos têm pouca sensibilidade, como na sífilis tardia. Positivam-se um pouco mais cedo que os testes não treponêmicos. Em 85% das pessoas tratadas com sucesso, os resultados permanecem reativos por anos ou até mesmo por toda a vida. O TPI (prova de imobilização dos treponemas) foi o primeiro teste treponêmico desenvolvido. Utiliza como antígeno treponemas virulentos vivos obtidos de sifilomas testiculares do coelho. A reação, apesar de específica, é de difícil execução e dispendiosa, com utilização restrita a laboratórios de pesquisa.
 O teste com anticorpo treponêmico fluorescente (FTA) veio sofrendo modificações na diluição e melhorando sensibilidade e especificidade até chegar ao FTA-ABS. Apresenta rápida execução e baixo custo, mas necessita de um microscópio fluorescente. Em doenças autoimunes e outras treponematoses pode apresentar resultados falso-positivos.
2.2 HIV/AIDS
O vírus da imunodeficiência humana (HIV) é o agente etiológico da síndrome de imunodeficiência adquirida (Sida/Aids), doença que se caracteriza por uma progressiva e importante deterioração do sistema imune. Associadas a ela, ocorrem infecções oportunistas (pneumocistose, toxoplasmose, candidíase), neoplasias (sarcoma de Kaposi, linfomas B) e complexo demencial. O HIV é transmitido por via sexual, através do sangue contaminado e da transmissão perinatal, incluindo o aleitamento materno. O vírus penetra no organismo na forma livre ou através de células infectadas, dando início ao processo patogênico que resultará a longo prazo na destruição do sistema imunológico do paciente.
Atualmente, são conhecidos doissubtipos de vírus da imunodeficiência humana: HIV-1 e HIV-2. A homologia genômica entre os dois subtipos é de 40%, e a similaridade entre o HIV-2 e o vírus da imunodeficiência do símio (SIV) é maior do que quando se compara HIV-1 e HIV-2 entre si. O HIV possui tropismo por linfócitos T CD4+ (helper ou auxiliares), ligando-se aos receptores CD4 da superfície celular através da glicoproteína do envelope, gp120, levando à progressiva queda no número de linfócitos helper ou auxiliares. Também infecta linfócito B, macrófagos/monócitos, células da glia e células do cólon, que apresentam número variável de receptores CD4.
O aparecimento de anticorpos contra o HIV está associado à supressão da viremia. Anticorpos neutralizantes são capazes de bloquear a interação entre a gp120 viral e o receptor CD4. O período de tempo entre a infecção inicial e o aparecimento destes anticorpos é chamado de janela imunológica, em que os testes sorológicos para o HIV podem ser negativos, embora o paciente esteja infectado e possa transmitir o vírus. Os linfócitos T CD4+ têm um papel central na resposta imune, sendo responsáveis pela ativação tanto da resposta humoral quanto da celular, através de um complexo mecanismo que envolve receptores celulares e produção de interleucinas.
2.2.1 DIAGNÓSTICO LABORATÓRIAL 
· Método de Ensaio Imunoenzimático.
Mas apesar da elevada sensibilidade e especificidade, os percentuais de resultados falso-positivos ainda são relevantes, principalmente em populações com baixa prevalência da infecção. Isso, em parte, se deve ao fato de tratar-se de um exame de triagem e como tal apresentar sensibilidade apurada, buscando evitar a possibilidade de falso-negativos. Há relatos de reações cruzadas com outros retrovírus e com diversas patologias, como infecções virais, como a hepatite; doenças parasitárias; doenças neoplásicas e doenças auto-imunes.
Durante a gravidez, a taxa de falsa-positividade é maior do que na população em geral, fato que também ocorre em outros testes laboratoriais para pesquisa de anticorpos. Por se tratar de um método de triagem, todas as amostras de soro repetidamente reativas na pesquisa de anticorpos anti-HIV por EIA devem ser avaliadas através do método confirmatório de Western Blot.
Antes do aparecimento dos anticorpos ou durante a soroconversão, o método de reação em cadeia da polimerase (PCR) qualitativo, que pesquisa o DNA viral integrado ao genoma humano, permite o diagnóstico preciso da infecção pelo HIV logo após a infecção. O PCR qualitativo é de grande utilidade, especialmente no período neonatal, em que a presença de anticorpos anti-HIV da classe IgG em crianças de até aproximadamente dois anos, nascidas de mães soropositivas, pode representar apenas a expressão da passagem placentária de anticorpos maternos, tornando difícil o diagnóstico pelos métodos sorológicos tradicionais. Conhecimento dos padrões de mutação, selecionados por drogas anti-retrovirais através da técnica da genotipagem do HIV, pode facilitar a escolha racional de esquemas terapêuticos adequados, assim como participar da decisão pelo tratamento inicial a ser adotado nos pacientes recém-diagnosticados.
· ANTÍGENO P24 (AG-P24)
Como todo retrovírus, o HIV tem um genoma RNA com seqüências de genes codificantes para as proteínas internas (gag), enzimas virais (pol) e proteínas do envoltório (env). As proteínas codificadas pelo gene gag são p55, p24 e p17. O antígeno p24 é uma proteína da partícula viral que circunda e protege o ácido nucléico e as enzimas de replicação do vírus, que ganha importância clínica por seu valor no diagnóstico, antes da soroconversão. Após a exposição inicial ao HIV, há replicação viral e o antígeno p24 pode ser detectado no sangue periférico de poucas semanas a vários meses até que haja a soroconversão. Depois disso, a formação de complexos antígeno p24 com anticorpo anti-p24 dificulta a detecção dos níveis de antígeno circulante. A identificação do antígeno p24 é baixa em indivíduos infectados assintomáticos e os resultados positivos exigem confirmação por testes com anticorpos neutralizantes. Com a evolução do quadro clínico, detecta-se novamente o antígeno p24, à medida que evolui a falência imunológica.
O antígeno p24 é detectado por testes de ensaio imunoenzimático (EIA), utilizando anticorpos monoclonais anti-p24, em que a intensidade da reação é proporcional à quantidade de antígeno. A presença de antígeno p24 no soro ou no plasma indica infecção ativa, podendo auxiliar no diagnóstico antes da soroconversão, na avaliação do prognóstico e acompanhamento do tratamento. A grande desvantagem do antígeno p24 é sua baixa sensibilidade e o fato de não ser possível sua detecção quando há títulos altos de anticorpos contra p24. Atualmente, a detecção de antígeno p24 vem sendo substituída por técnicas de biologia molecular, como o PCR qualitativo e a determinação da carga viral, que apresentam uma sensibilidade superior.
· WESTERN BLOT
É um método de alta sensibilidade e especificidade, que permite identificar os anticorpos contra os diferentes constituintes do HIV-1, usado como teste confirmatório no diagnóstico da síndrome de imunodeficiência adquirida (Sida/Aids). No Western Blot, as proteínas do HIV-1 são separadas por eletroforese em um gel de poliacrilamida, de acordo com seu peso molecular, e transferidas para uma membrana de nitrocelulose que é cortada em fitas. No teste, coloca-se a amostra de soro sobre a fita de nitrocelulose que contém os antígenos virais separados e aos quais vão se ligar os anticorpos específicos para o HIV-1 presentes no soro do paciente. O sistema é revelado através de um anticorpo antiimunoglobulina G (IgG) humana, conjugado a uma enzima que, em contato com o substrato, produzirá bandas coloridas correspondentes às várias proteínas virais. O método de WBlot detecta a reação antígeno-anticorpo, identificando no soro anticorpos contra as diferentes proteínas virais. Controles positivo e negativo são testados simultaneamente para permitir a detecção das proteínas virais.
Os anticorpos contra as glicoproteínas do envelope viral gp120 e gp41 e sua precursora gp160, codificadas pelo gene env, são os mais específicos para o HIV-1 e podem ser detectados em amostras de virtualmente todas as pessoas infectadas, independente do estágio clínico. Os anticorpos contra as proteínas do capsídeo viral p24, p17 e sua precursora p55, codificadas pelo gene gag, são grupo-específicos e, portanto, menos específicos para o HIV-1. O anticorpo contra o p24 pode ser o primeiro a ser detectado após a infecção pelo HIV-1 durante a soroconversão, embora a presença de anticorpos contra as proteínas do capsídeo possa representar reações inespecíficas no WBlot de indivíduos não infectados. Anticorpos contra as proteínas do capsídeo tendem a diminuir ou a ficar indetectáveis com a progressão dos sintomas clínicos, principalmente nos estágios avançados da infecção.
Anticorpos contra as enzimas virais codificadas pelo gene pol, como a p66, p51 e p31, também podem ser comumente detectados em pacientes infectados pelo HIV-1.
Conforme recomendação do Centers for Disease Control (CDC) e do Ministério da Saúde, atualmente, o critério diagnóstico para se considerar o teste de Western Blot positivo para HIV-1 requer a presença de, no mínimo, duas das seguintes bandas: gp160/gp120, gp41 ou p24. Os soros reativos para apenas uma delas ou para qualquer outra banda protéica, que não atenda o critério de positividade, são considerados indeterminados. Os soros que não apresentam reatividade para nenhuma banda protéica são considerados negativos.
3. Conclusão 
Portanto os testes de sorologia são de extrema importância para a elucidação dos diagnósticos de doenças infectocontagiosas, tendo em vista a variedade de teste, indo do mais complexo ao mais simples, todos tem sua importância e eficácia, assim como o seu grau de especificidade e sensibilidade.
Os testes sorológicos nos permite diagnosticar infecções ainda em seu estagio inicial, permitindo iniciaro tratamento precoce. 
A realização do procedimento de maneira correta e eficiente e necessário para a credibilidade do resultado e conforto do cliente.
4. REFERENCIAS 
http://www.scielo.br/pdf/rbhh/v30n3/a11v30n3
http://www.scielo.br/pdf/%0D/rbhh/v26n2/v26n2a05.pdf
http://www.scielo.br/pdf/abd/v81n2/v81n02a02.pdf
http://www.sergiofranco.com.br/bioinforme/index.asp?cs=Imunologia&ps=sidaAids