Diagnóstico laboratorial das viroses

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Diagnóstico Laboratorial 
das Viroses
Importância:
✓Tratamento, quando possível;
✓Epidemiologia;
✓Prevenção e controle
Introdução
Dois parâmetros considerados:
➢Isolamento e Identificação do vírus
➢Sorologia
Introdução
VIROSES ANIMAIS
Isolamento e identificação
✓ Através de propagação em sistemas vivos: culturas de células, ovos 
embrionados e animais de laboratório;
✓Detecção direta do vírus, antígenos e genomas virais.
Isolamento e identificação
⚫A colheita do material deve ser feita na
fase aguda da doença.
⚫O material deve ser transportado
imediatamente para o laboratório, mantido
em temperatura baixa (gelo).
⚫Quando o material for enviado para locais
distantes, deve ser acondicionado em gelo
seco.
Teste de Hemaglutinação (HA)
Teste de hemadsorção
Sorologia
⚫São utilizados métodos para detecção de
peloanticorpos específicos, produzidos 
hospedeiro em resposta à infecção viral.
Teste de Neutralização
Teste de Fixação do Complemento
Teste de Imunofluorescência Direta
Teste de Imunofluorescência Indireta
Teste de Imunoenzimático (ELISA)
Imunoblotting – Western Blotting
Diagnóstico molecular
Detecção do ácido nucleico
✓Reação em Cadeia da Polimerase (PCR)
✓RT-PCR
✓Real-time - PCR
✓Reação de Hibridização
Diagnóstico de fitovirus
1 BIOLÓGICO:
✓Propriedades biológicas:
morfologia e gama de hospedeiros;
✓ Modos de transmissão; 
2 - SOROLÓGICO:
✓Detecção de proteínas do capsídeo.
3 MOLECULAR:
✓Detecção do ácido nucleico.
CARACTERÍSTICAS DESEJÁVEIS DOS MÉTODOS
-Rapidez
-Baixo custo
-Precisão
MÉTODOS DIAGNÓSTICOS DE VIROSES VEGETAIS
Pequeno valor diagnóstico quando:
✓Mesmo sintoma - espécies diferentes de vírus.
✓Mesmo vírus - CMV – Mais de 1000 hospedeiras,
sintomas diferentes
SINTOMAS
SINTOMAS SEMELHANTES
-Deficiências nutricionais;
-Toxinas produzidas por insetos;
-Efeito de agroquímicos;
-Alta temperatura;
-Distúrbios de origem genética.
TRANSMISSÃO EXPERIMENTAL
-Vetores
-Inoculação Mecânica
- Enxertia
• Transmissão mecânica de vírus fitopatogênicos
• Observação dos sintomas em uma série de
plantas-teste inoculadas (indicadoras e diagnósticas)
MÉTODOS BIOLÓGICOS
Amostra vegetal
com sintomas de
mosaico
Trituração da amostra 
em presença da solução 
tampão e abrasivo em 
almofariz
Inoculação do extrato
Vegetal em plantas
indicadoras
PROPRIEDADES FÍSICAS
• Ponto de inativação térmica (10 minutos de exposição em 
temperaturas diferentes)
• Alíquotas do extrato para avaliar, após inoculação em
plantas indicadoras, qual o intervalo de inativação térmica
avaliar, após inoculação em
a diluição final em que há
• ponto final de diluição
• Alíquotas do extrato para 
plantas indicadoras, qual 
aparecimento de sintomas
• longevidade in vitro
• Alíquotas do extrato para avaliar, após inoculação em
plantas indicadoras, quanto tempo na temperatura ambiente
o extrato permanece com poder de infecção
Informações gerais sobre o envio de amostras para análise
http://www.biologico.sp.gov.br/exames_pops/vegetal_pop.html
As amostras deverão ser remetidas até 24h após terem sido coletadas.
Não enviar partes vegetativas às sextas-feiras e nem em vésperas de feriados.
No caso de várias amostras, mantê-las em separado e devidamente etiquetadas com o
local (cidade e Estado) e data de coleta; a espécie ou nome comum; lote e safra se forem
o caso. Todas as informações pertinentes ao problema deverão ser mencionadas, assim
como os dados sobre as práticas culturais empregadas, no caso de amostras vegetais.
Os materiais deverão ser enviados juntamente com o formulário de entrada de
amostra para um dos endereços abaixo:
Unidade Laboratorial de Referência em Fitossanidade — Instituto Biológico
Av. Conselheiro Rodrigues Alves 1252, CEP 04014-002, São Paulo, SP.
Telefax: (0xx11) 5087-1789. E-mail: analise_fitossanidade@biologico.sp.gov.br
ou
Unidade Laboratorial de Referência em Diagnóstico de Plantas e Produtos Vegetais —
Instituto Biológico
Rodovia Heitor Penteado. km 3, CEP 13092-543, Campinas, SP.
Telefax: (0xx19) 3252-4737. E-mail: ceib-triagem@biologico.sp.gov.br
O horário para recebimento de amostras é das 8h às 11h30 e das 13h às 16h30 de
segunda a sexta-feira.
http://www.biologico.sp.gov.br/exames_pops/vegetal_pop.html
http://www.biologico.sp.gov.br/docs/entrada%20de%20amostra.doc
http://www.biologico.sp.gov.br/docs/entrada%20de%20amostra.doc
mailto:analise_fitossanidade@biologico.sp.gov.br
mailto:%20ceib-triagem@biologico.sp.gov.br