Quantificação de Amido em Vegetais

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Quantificação de Amido
McCready RM, Guggolz A, Silveira V, Owens HS (1950) Determination of starch and amylase in vegetables; application to peas. Analyt Chem 22: 1156–1158
Extração:
Para Material Fresco:
1) Amostras limpas de discos foliares contendo 0,5 g de folhas
2) Triturar em 5 ml de etanol 80% (v/v) quente
3) Centrifugar as frações solúveis a 3500 g por 10 min. 
Fazer o procedimento pelo menos 2x até que o conteúdo saia “limpo”.
4) Coletar o sobrenadante e armazenar a 4°C para determinação de prolina e TSS. O pellet pode ser usado para quantificar carboidratos não solúveis (amido).
Para Material Seco:
1) Macerar as amostras em nitrogênio líquido.
2) Pesar 0,5 g e diluir em 5 ml de etanol 80% (v/v) quente
3) Centrifugar as frações solúveis a 3500 g por 10 min.
Fazer o procedimento pelo menos 2x até que o conteúdo saia “limpo”.
5) Coletar o sobrenadante e armazenar a 4°C para determinação de prolina e TSS. O pellet pode ser usado para quantificar carboidratos não solúveis (amido).
Quantificação:
1) Adicionar 1 mL de ácido perclórico 30% no precipitado;
2) Centrifugar a 10000 rpm, por 15 minutos;
3) Adicionar Alíquotas de 1 mL das amostras em 2mL de antrona 0,2%. 
4) Agitar as soluções e aquecer em 120 °C, por três minutos. 
5) Resfriar e realizar a leitura a 620 nm. 
Como padrão foi utilizado glicose (Sigma® G 8270) diluída em ácido perclórico 30%.
	Curva Glicose
	
	
	
	Tubos
	Glicose a partir da solução 10g/L (1%) (mL)
	Ac. Perclórico 30%
	Antrona
	mg de glicose por L
	Branco
	0
	1
	2 mL
	
	1
	0,25
	0,75
	2 mL
	
	2
	0,5
	0,5
	2 mL
	
	3
	0,75
	0,25
	2 mL
	
	4
	1
	0
	2 mL