Microbiologia-práticas

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Microbiologia- Práticas
Materiais:
Alça de platina:
Bico de bunsen:
Lâmina:
Lâmínula:
Placa de Petri :
Pipeta:
Pipeta semi-automática:
Tubo de ensaio:
Balão volumétrico:
Erlenmeyer:
Placa de Petri com meio de cultura:
Proveta graduada:
Béquer:
Autoclave:
Autoclave vertical: 
Incubadora/Estufa:
Banho Maria:
Microscópio:
pHmetro:
Shaker:
Equipamentos:
Pisseta:
Coloração de Ziehl
Neelsen(B.A.A.R)-álcool-ácido
resistência:
Bactérias do gênero
Mycobacterium são resistente a
coloração de GRAM/simples----
Falso positivo 
Motivo: estrutura externa a parede
celular de natureza lipídica,
formada por Cera D/ ácido micólico
Fucsina permite a entrada da
coloração na bactéria (facilitada
pelo calor)
Importância: Nesse gênero, estão
contidas as bactérias
Mycobacterium leprae (causa
hanseníase) e Mycobacterium
tuberculosis (causa tuberculose)
B.A.A.R += VERMELHO
B.A.A.R -= AZUL
Coloração de GRAM:
Dentre as estruturas essenciais das
bactérias, tem se a parede celular (é
por meio das diferenças nela que se
realiza a coloração de GRAM)
Parede Celular: 
-Mais externa
Estrutura das paredes celulares das
bactérias:
-Previne ruptura da célula por lise
osmótica
-Funciona como fator de virulência
(mecanismo que o microrganismo
utiliza para agredir o hospedeiro)
-Sua composição induz resposta
imune
-Local de ação de antibióticos
(ex:penicilina)
-Complexas quimicamente
-Formadas por peptideoglicanos 
-Peptideoglicano: Base de carboidrato
(N-acetilglicosamina e N-
acetilmurâmico alternados) e cadeia
lateral de tetrapeptídeos
-GRAM +: Membrana citoplasmática +
peptideoglicano (40 camadas-espessa)
-GRAM -: Membrana citoplasmática+
peptideoglicano (2 camadas-
delgada)+periplasma+membrana
externa (com LPS)
Cristal violeta: Encontra a parede
celular e penetra na camada de
peptideoglicano. Cora GRAM + e
GRAM - de roxo
Lugol (com iodo): Se combina com
cristal violeta formando um
complexo químico e dificultando a
saída da cor
Álcool-cetona: Álcool não é capaz
de remover as 40 camadas com
cristal violeta + lugol que estão
coloridas--- GRAM += roxa; GRAM -=
sem cor (destrói a membrana
externa e descora a camada de
peptideoglicano)
Contra-corante (fucsina de GRAM)
1.
2.
3.
4.
Vermelha. GRAM += não acontece nada
e nas GRAM -= coloração
vermelha/rosa
Espécies utilizadas: Escherichia coli,
Staphylococcus aureus,
Streptococcus pyogenes
Bactéria:Escherichia coli
Forma: Bacilos
Arranjo: Estreptobacilos ou
diplobacilos
Coloração: Rosa/vermelha
Resposta a GRAM: Negativa
Patogenicidade: Sim 
(infecção no trato digestivo,trato
urinário (principalmente),etc.
Bactéria: Streptococcus pyogenes
Forma: Coco
Arranjo: Estreptococos
Coloração: Roxa
Resposta a GRAM: Positiva
Patogenicidade: Sim 
(faringites)
Bactéria: Staphylococcus aureus
Forma: Cocos
Arranjo: Estafilococos
Coloração: Roxa
Resposta a GRAM: Positiva
Patogenicidade: Sim 
(infecções de pele e algumas vezes
pneumonia,endocardite e
osteomielite. Na maioria das vezes,
provoca a formação de abscesso)
Lavagem das mãos:
Contagem das UFC-Unidades
Formadoras de Côlonia
1 - -
2 50 15
3 26 12
4 19 -
BANCADA ANTES DEPOIS
1- Água
2- Detergente 
3- PVPI
4-Álcool 70%
Não possui ação microbicida
Remoção--- remoção mecânica
Dissolve a membrana
citoplasmática do microrganismo 
Antisséptico usado na prática
clínica
Iodo---halogênio (Cl e F também
são)
Interfere na síntese proteica de
proteínas essenciais, causa
alteração na membrana celular 
Limitação: É tintorial (mancha),
comum causar alergia
Bactericida e fungicida
Desnaturação de proteínas e
dissolução de lipídeos
Álcool 70% penetra melhor na
membrana (30% água e 70%
álcool puro )
1- Água
2- Detergente 
3- PVPI (Iodo polvidona)
4-Álcool 70%
Terminologia:
Esterilização: Destruição de TODAS
as formas de vida bacteriana,
incluindo os endósporos* (ÚNICO
MÉTODO QUE DESTRÓI)
Desinfecção: destruição das formas
vegetativas de microrganismos
patogênicos em superfícies inertes
Assepsia: destruição das formas
vegetativas de microrganismos
patogênicos em tecido vivo
Sanitização: Redução das
contagens microbinas em utensílio
s alimentares, equipamentos
industriais etc.
*2 gêneros de GRAM +: Clostridium e
Bacillus
Funcionamento da autoclave:
Calor úmido
Adição de água DESTILADA (água
normal oxida a autoclave)
Desnatura e coagula as proteínas
(ENDÓSPORO E VEGETATIVA)
Funcionamento "panela de
pressão"
Teste de Snyder:
1 - - + pequena 
2 - - - negativa 
3 - - + pequena 
4 - - - negativa 
BANCADA 24 48 72 ATV. DE CÁRIE
Digital (clínica,consultório) ou
manual (laboratório, hospital)
Aumenta a temperatura (121° C) e
a pressão (15 lb/pol2)
Quando chega a esses níveis inicia-
se esterilização 
Por 15 minutos---- depois
temperatura e pressão diminuem
O material deve estar SECO e
embalado adequadamente (filme
plástico, papel grau cirúrgico,TNT,
todos selados)
Monitoramento
-Fiscalização sanitária
-Indicador biológico---tubos com
esporos com bactérias altamente
resistentes à calor----indicador de pH
púrpura---púrpura (sem crescimento
microbiano)
púrpura---amarelo (com crescimento
microbiano)
-= verde/ += amarelo
Avalia a atividade cariogênica DO
INDIVÍDUO 
Avaliação feita periodicamente em
um intervalo de 24 horas
SALIVA NÃO PRODUZ ÁCIDO (não
tem atividade cariogênica)----serve
como veículo da bactéria
Meio de cultura de Snyder fornece
carboidratos e o indivíduo bactéria
(principalmente Streptococcus
mutans), inicialmente com a cor
verde
Fermentação dos carboidratos
pelas bactérias produz ácido
(ácido láctico principalmente) e
por consequência abaixa o pH,
fazendo com que o meio se torne
amarelado
Ação antimicrobiana:
Pinho sol 20 20 29 30
Clorexidina 2% 15 23 26 25
Álcool 70% 10 0 - -
Clorexidina 20 12 18 23
Cloro 15 22 16 25
H2O2 - - 8 -
E. coli S. aureus
*halo (diâmetro) em mm
Diferença de operação aceitável
Microrganismo diferentes
respondem de formas diferentes
Clorexidina funciona nos dois
(GRAM + e GRAM -)
Álcool não funciona bem (alta
volatilidade em 37 graus C)
-As duas concentrações funcionam
parecido
Concentrações elevadas em dose-
resposta
-Concentração maior----maior chance
de efeito antimicrobiano
-Atóxico
-Concentrações: 
0,12%- Bochechos (digluconato de
clorexidina)
2%-Irrigante do sistema de canais
radiculares ou na limpeza de
cavidades 
-Solução aquosa (para crianças e
alcóolicos) ou alcóolica
-Ação contra alguns vírus
envelopados
Líquido ou em gel
 inibe proteases de Porphyromonas
gingivalis(GRAM -,forma de bacilo,
anaérobio), inibe captação e
catabolismo de aminoácidos
-Efeitos adversos: manchas escuras no
esmalte dentário, perda do paladar
para o sal (uso ininterrupto por anos)
Clorexidina:
-Nome comercial: Periogard, Colgate
plax
-Princípio: ruptura da membrana
plasmática (microbicida)
-Biguadina catiônica: carga positiva
que se adere à superfície bacteriana
que é negativa
-Propriedade de SUBSTANTIVIDADE:
efeito persistente por até 8 horas após
o uso (somente ela possui)
-Trata paciente com doenças
periodontais
-Bactericida GRAM + e GRAM -
-Concentrações sub-letais: inibe
produção de ácido por estreptococos, 
Antibiograma:
Ação: Halos de inibição em mm
(inibe crescimento microbiano) 
Turbidez do tubo de ensaio deve
ser 0.5 na Escala de MacFarland
(mede a turbidez do meio)
7 dias após: medir o diâmetro
Tamanho do diâmetro deve ser
consultado em uma tabela
Controle do crescimento microbiano
in-vivo:
Antibiótico, antiviral e antifúngico
Ação microbicida:mata o
microrganismo
Ação microbiostática: NÃO mata o
microrganismo, apenas
controla/inibe o crescimento
O S. Imune continua atacando,
mas o microbicida é o que mata
Em agentes microbiostáticos, é o
S. Imune o responsável por
eliminar o microrganismo 
Penicilinas: atuam bem nas
doencas bacterianas da
odontologia 
Tetraciclina: ÚNICO antibiótico
capaz de interferir na formação
dental (gera amelogênese
imperfeita)---cuidado na
prescrição de grávidas e crianças
Níveis: sensível, intermediário
(pode ou não dar certo) ou
resistente 
Ação oligodinâmica dos metais:
Metais pesados: Amálgama (Prata+
Mercúrio) e Cobre
-Princípio: Desnaturação de proteínas,
inibição enzimática
OBS: Amálgama- inconveniente: não
pode ser usada em áreas estéticas
-Metais: contraem e dilatam em
virtude da temperatura--- gera
infiltrações e possível reincidência de
cárie 
-Desinfetante e antisséptico
-Ouro: maior ação microbiana e
dureza (preço elevado)
-Os metais oxidam (liberam íons)
naturalmente constantemente e em
baixa concentração, levando a
oxidação dos componentes
microbianos (reduz metabolismo), a
chamada AÇÃO OLIGODINÂMICA
-NÃO HÁ inibição por Cobre---libera
poucos íons
-Tapete microbiano (parte opaca)----
crescimento microbiano
-Prata INIBE crescimento microbiano-
--libera muitos íons 
1
2
1- Prata-SEM TAPETE MICROBIANO---
AÇÃO OLIGODINÂMICA/MICROBICIDA
2-Cobre-COM TAPETE MICROBIANO---
SEM AÇÃO
OLIGODINÂMICA/MICROBICIDA
Estudo dos fungos anemófilos:
Exposição do ágar saboraud
(contém condições favoráveis ao
desenvolvimento do fungo; alta
concentração de carboidratos e
baixo pH)
Meio seletivo (bactéria não cresce)
Local: Sala de espera da F.O.
 Leveduras
 Fungo filamentoso
Fungos:
Eucariotos
Complexos
Encontrados em qualquer lugar
(cosmopolitas)
Fazem parte do Reino Fungi (um
dos mais numerosos)
1-Leveduras:
Poucos são patogênicos
Aclorofilados- não possuem
clorofila ou pigmentos
fotossintéticos (por isso não são
considerados planta)
Gostam de umidade e calor
Se apresentam de duas formas:
levedura e filamentosos
10X maiores que as bactérias
Cada bolinha-----uma célula
Na placa de petri possui aspecto
mais liso e cremoso 
Aspecto úmido
O que se observa:
-Aspecto cremoso
-Cada bolinha---- uma célula
-Formado oval/redondo
-Aspecto úmido
2-Fungos filamentosos:
Pluricelulares 
Formados por hifas (estruturas
alongadas)
Conjunto de hifas= micélio
Cada hifa pode apresentar forma 
Fungo filamentoso pluricelular
com hifas não septadas
(cenocítico)
Fungo filamentoso pluricelular
com hifas septadas
Na placa de petri possui aspectos
variados (=ASPECTO
MACROSCÓPICO), como:
cores,bordas, topografia de
superfícieque devem ser
analisadas:
-Borda/contorno: regular ou irregular
-Topografia de superfície:
dobras,sulcos, pregas, elevações
-Aspecto: veludo, algodão
septada e cenocítica (sem septações)
O que se observa: 
-Borda irregular
-Esverdeado no centro e branco na
periferia
O que se observa: 
-Aspecto de algodão
-Completamente branco
O que se observa: 
-Borda irregular
-Sulcos e fissuras
-Cinza ao centro e esverdeado na
periferia
3-Fungos dimó́rficos:
Podem se apresentar nas duas
formas (levedura ou filamentoso)
A transição da forma depende de
algumas condições específicas,
sendo:
EX: como os fungos do gênero
Candida conseguem infectar o
canal radicular?
-TEMPERATURA
-CO2
-TOPOGRAFIA DA SUPERFÍCIE
-São dimórficos
-Na região dos túbulos dentinários, há
a presença de duas dentinas
diferentes: intertubular (entre túbulos
distintos) e intratubular (dentro de
um túbulo)
-Quando o fungo está na dentina
intertubular se apresenta na forma de
levedura
-Quando o fungo está na dentina
intratubular precisa modificar sua
forma para penetrar nesses túbulos
(devido ao diâmetro)- vira
hifa/filamentoso 
Fungo Candida albicans na forma de
levedura
Fungo Candida albicans na forma de
fungo filamentoso (hifa)
Há 3 maneiras de causar doenças
MICOSES: fungo colonizando
tecido 
ENVENENAMENTO: intoxicação
POR INGESTÃO de fungos
impróprios para consumo
TOXINA FÚNGICA: Metabólitos
produzidos pelo fungo que são
hepatotóxicos e causam câncer de
fígado (encontrado em alimentos:
amendoim, café, ração)
Candidíase/candidose bucal:
1.
2.
3.
OBS: Micoses importantes:
-Candida albicans compõe a
microbiota oral, principalmente de
crianças,fumantes e idosos 
-Fungo coloniza a boca
Patologias fúngicas:
1-Candidose pseudomembranosa:
Placas brancas na cavidade oral
com aspecto de "leite talhado"
facilmente destacáveis
Causa úlceras (epitélio exposto)
Provavelmente paciente está com
grande debilitação so S.I. (maior
incidência em pacientes
imunodeprimidos)
Mucosite: condição extremamente
dolorosa (epitélio exposto devido a
candidose)
Tratamento: laser
-Pacientes HIV positivo que não usam
coquetel (pedir teste-risco de
contaminação)
-Pacientes que fazem quimioterapia,
radioterapia 
2-Candidose Atrófica eritematosa:
Presença de próteses totais
removíveis (dentaduras) fazem
com que o palato duro gere
condições propensas para
proliferação de fungos (câmara
úmida e quente)
Aparecimento de bolinhas
vermelhas
Ocorre devido ao uso intermitente
ou má higienização da prótese
total removível
Para pacientes idosos a
proliferação do fungo é perigosa
3- Quielite angular
Perda da dimensão vertical da
maxila (devido perda dentária)
causa acúmulo de saliva no ângulo
da boca, o que gera condições
para a proliferação de fungos
nesse local (principalmente à
noite)
OBS: Candidose
pseudomembranosa, Candidose
atrófica eritematosa e quielite
angular são causadas
predominantemente pela espécie
Candida albicans
4- Paracoccidioidomicose:
Causado pelo fungo filamentoso
Paracoccidioides brasiliensis
É dimórfica
Presente nas lavouras de café
(endêmico em Alfenas)
Ocorre por aspiração dos esporos
desse fungo e posterior
colonização do pulmão (muda de
forma e coliniza)
Esporos = estrutura de reprodução 
Apresentação secundária na boca
antes do aparecimento de danos
pulmonares
Chega a cavidade oral via vasos
sanguíneos e linfáticos
Oitava causa de morte no Brasil
(clima tropical)
Pode apresentar dano cutâneo e
ósseo
Mais comum em homens entre 50
à 65 anos
Estrógeno impede colonização no
pulmão das mulheres
Lesão MORIFORME- aspecto de
amora (pontinhos hemorrágicos)
Lesão oral- fase crônica da doença
Diagnóstico difícil (parecida com
outras doenças)- necessita biópsia
Tratamento difícil e demorado
Dentista apenas diagnostica,
tratamento feito pelo médico
PLACA DE PETRI: COLÔNIA COM O
ASPECTO DE "PIPOCA
ESTOURADA"
LÂMINA COM ASPECTO "RODA DE
LEME" OU "MICKEY MOUSE"
Identificação de leveduras:
Fonte de carbono utilizada:
Carboidratos (trealose, maltose,
glicose,etc.)
Fonte de N (sulfato e nitrato)----
halo ao redor----Fonte de N que a
levedura é capaz de utilizar---
tabela
-Ao redor de alguns carboidratos---
halo opaco (visto contra a luz)----
indica a fermentação do carboidrato--
---comparação na tabela (serve como
identificação)
Auxanograma:
Zimograma:
Capacidade de fermentação das
leveduras
meio de cultura com carbono
(sacarose, trealose, glicose)-----se
fermenta libera CO2 (gás)-----gera
bolha no tubo de Durham-----
anota resultados---consulta tabela
Microcultivo:
Em lâminas no microscópio
Ágar fubá (pobre em nutrientes)---
obriga formar esporos
ESPOROS ARREDONDADOS COM
BORDA AMARRONZADA-
CLAMIDOSPORO (SE HOUVER
ESPÉCIE Candida albicans)
Descrição: Clamidosporos de
Candida albicans
Tubo germinativo:
-Com soro (plasma humano)
-Se houver a espécie Candida albicans
ela mudará de forma (levedura---
filamentoso/hifa)
Descrição: TUBO GERMINATIVO DE
Candida albicans 
Tipos de meios de cultura:
Pelo estado físico: definido pela
quantidade de ágar adicionado
Meio sólido também pode se dar
no tubo de ensaio
Meio sólido pode ter o conteúdo
inclinado, para aumentar a
superfície de contato