BIOTECNOLOGIA DE EMBRIOES PROF Halim - Parte 3

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<p>Biotécnicas aplicadas a embriões</p><p>produzidos in vivo ou in vitro</p><p>Dificuldade congelação - Embriões PIV</p><p>Diferenças entre embriões PIV e produzidos</p><p>in vivo:</p><p> Zona pelúcida: maior sensibilidade à atividade enzimática</p><p> Maior quantidade de lipídios intracelular</p><p> Menor capacidade de compactação dos blastômeros: complexos</p><p>juncionais menores e em menor quantidade</p><p> Adequada maturação citoplasmática (?) - pior qualidade</p><p>embrionária (?)</p><p>Sexagem de embriões</p><p>• Permite a identificação do sexo do embrião</p><p>• Direcionamento da cadeia de produção – machos ou fêmeas</p><p>• Retira-se um fragmento através de micro manipulação do</p><p>embrião com 7 dias</p><p>• Técnica de eletroforese evidenciará através do DNA qual é o</p><p>sexo do embrião</p><p>• Método invasivo, porém funcional</p><p>Bipartição Embrionária</p><p>• Divisão de um embrião através de</p><p>micromanipulação em duas partes</p><p>• Produção de gêmeos</p><p>• Técnica pioneira em estudos de clonagem</p><p>• Custo do equipamento (micromanipulador) é</p><p>elevado</p><p>• Mão-de-obra especializada (treinamento)</p><p>BIOTECNOLOGIAS</p><p>• Bipartição Embrionária</p><p>Congelação de Embriões</p><p>Bovinos</p><p>Congelação de Embriões Bovinos</p><p>• criopreservação</p><p>• N2 (- 196ºC)</p><p>• metabolismo celular quiescência</p><p>• conservação por tempo indeterminado</p><p>Congelação de Embriões Bovinos</p><p>Etapas – Congelação tradicional – Método Lento</p><p>- Exposição do embrião à solução crioprotetora</p><p>(diferentes crioprotetores e associações)</p><p>- Resfriamento</p><p>- Armazenamento N2</p><p>- Aquecimento (descongelação)</p><p>- Remoção do crioprotetor</p><p>- Transferência para receptoras</p><p>Máquina de congelar embriões</p><p>Vitrificação</p><p>• Congelação ultra-rápida</p><p>• Nitrogênio líquido</p><p>• Vários crioprotetores e associações</p><p>• Diminui a formação de cristais de gelo intra-celular</p><p>• Diminui danos ao embrião</p><p>• Reidratação embrião</p><p>• Sucesso com embriões produzidos in vivo</p><p>• 50% a 60% de prenhez</p><p>• Embriões in vitro</p><p>• 20% a 40% de prenhez</p><p>• Vitrificação</p><p>Congelação de Embriões Bovinos</p><p>BIOTECNOLOGIAS</p><p>Transferência nuclear (clonagem)</p><p>BIOTECNOLOGIAS</p><p>Transferência nuclear (clonagem)</p><p>Clonagem</p><p>Células somáticas embrionárias ou adultas</p><p>• Blastômeros</p><p>• Cels granulosa</p><p>• Fibroblastos</p><p>• Cels epiteliais</p><p>• Cels gls mamárias</p><p>• Cels oviduto</p><p>• Cels musculares</p><p>• Leucócitos</p><p>- Injeção direta no citoplasto</p><p>- Introdução do núcleo no espaço perivitelíneo</p><p>- Pulsos elétricos ou substs químicas</p><p>(fusão mbs e ativação oocitária- influxo Ca2+ )</p><p>BIOTECNOLOGIAS</p><p>• Transferência nuclear (clonagem)</p><p>BIOTECNOLOGIAS</p><p>TRANSGENIA</p><p>BIOTECNOLOGIAS</p><p>• Transgênese: por que produzir animais</p><p>transgênicos?</p><p>• Novos conhecimentos</p><p>• Produzir rebanhos e/ou animais resistentes geneticamente à</p><p>doenças</p><p>• Melhorar caracteres produtivos dos animais (por ex. alteração</p><p>benéfica da composição do leite, de forma a produzir queijo de</p><p>melhor qualidade, leite com mais ptns, sem substâncias alergênicas</p><p>ou não toleradas, proteínas terapêuticas, animais com maiores</p><p>índices de crescimento)</p><p>• Produzir fármacos de alta complexidade biológica a partir de fluidos</p><p>corporais dos animais geneticamente modificados</p><p>BIOTECNOLOGIAS</p><p>• Transgênese:</p><p>• injeção pronuclear de DNA exógeno</p><p>• Uso de retrovírus (infeção de embriões com</p><p>vetores contendo DNA exógeno)</p><p>Peixe Paulistinha Colorido –</p><p>geneticamente modificado</p><p>Fibroblastos de ovelhas transfectados com fator IX humano +</p><p>transferência nuclear = duas ovelhas clonadas produziram altos níveis</p><p>de fator IX na 1ª lactação</p><p>Muito Obrigado!</p>