Biotécnicas Da Reprodução Em Bovinos Transferência De Embriões Te In Vivo

Prévia do material em texto

BIOTÉCNICAS DA REPRODUÇÃO EM BOVINOS 
TRANSFERÊNCIA DE EMBRIÕES TE IN VIVO
Profa. Dra. Vanessa Storillo
veterinariavanessa@yahoo.com.br
CONCEITOS
Embriões coletados in vivo
Embriões produzidos in vitro
Mercado
Congelamento
Sociedade Internacional de Transferência de Embriões
IETS
2
RAZÕES DA TE
Obter mais bezerros de uma vaca de alta qualidade.
Aumentar a taxa de melhoramento genético de um
rebanho.
Facilitar a exportação de animais
Obter bezerros de corte puro−sangue da parte de
menor qualidade do rebanho leiteiro.
Obter progênie de vacas com problemas de fertilidade
/ idosas
Pode ser realizada uma coleta a cada 60 dias, com
média de 6 embriões viáveis/coleta. Tx de concepção
dos embriões transferidos = de 50 a 60%.
3
4
MANEJO DA VACA DOADORA
Superovulação = 1 ovulação para 7 ovulações
Hormônios: eCG e FSH
Ciclo estral é sincronizado, tratamento inicia quando
emerge a onde folicular
FSH: 2x ao dia por 3-4 dias
eCG: meia vida longa = 1 injeção
5
6
7
8
MANEJO DA VACA RECEPTORA
Sincronismo com a vaca doadora
Assincronia de 24h ou mais = efeito negativo
Sincronizar de 7 a 10 receptoras / doadora
Transferência 7 dias após o estro
Embriões de boa qualidade podem ir para
congelamento
9
EMBRIÃO
Ideal: compacto e esférico
Blastômeros com tamanho, cor e textura iguais
Citoplasma não pode ser granulado ou com vesículas
Espaço perivitelínico claro, sem debris celulares
Zona pelúcida intacta
10
11
12
OLIVEIRA, C. S.; SERAPIÃO, R. V.; QUINTAO, C. C. R. Biotécnicas da reprodução em bovinos. Embrapa Gado de 
Leite. Documentos, 175. 2014.
PRODUÇÃO IN VITRO DE EMBRIÕES (PIV)
A produção in vitro (PIV) de embriões é uma
importante biotécnica reprodutiva que permite a
interação entre o espermatozoide e o oócito fora do
trato reprodutivo da fêmea, com a formação de um
novo indivíduo.
O processo envolve as etapas de coleta dos oócitos,
maturação in vitro (MIV), fecundação in vitro (FIV) e o
cultivo ou co-cultivo in vitro (CIV) de zigotos e
embriões fora do útero animal
Fonte: http://www.cbra.org.br/pages/publicacoes/rbra/v40/n2/p58-
64%20(RB602).pdf
15
16
17
MATERIAL
Texto: Fertilização in vitro pode acelerar
melhoramento genético de rebanhos leiteiros
https://www.embrapa.br/busca-de-noticias/-
/noticia/16489290/fertilizacao-in-vitro-pode-acelerar-
melhoramento-genetico-de-rebanhos-leiteiros
18
IN VIVO VS IN VITRO
PIV: 25 folículos são aspirados, 20 oócitos coletados,
30% chegam a blastocisto = 6 embriões, 40% taxa de
prenhez = 2 bezerros / sessão = 1 OPU por semana
2 meses = 16 bezerros
TE: superovulação, IA, 1 a cada 21 dias = 6 embriões =
50% tx prenhez = 3 bezerros
2 meses = 6 bezerros
19
Vantagens
• Aumentar o número de descendentes de uma
fêmea
• Produzir embriões de fêmeas que não respondem à
TE
• Utilizar bezerras para a produção de embriões
• Produzir embriões de vacas com patologias
adquiridas
• Produzir embriões de vacas com gestação de até 4
meses
• Otimizar o uso de doses de sêmen de elevado valor
genético e comercial
20
Fonte: http://www.cbra.org.br/pages/publicacoes/rbra/v40/n2/p58-64%20(RB602).pdf
ETAPAS DA PIV
Coleta de oócitos
Maturação in vitro (MIV) = taxas iguais as in vivo 
Fertilização in vitro (FIV) = taxas iguais as in vivo
Cultivo in vitro (CIV) = etapa com menor eficácia 
apenas 30% chegam a blastocisto
22
ETAPAS DA PIV – COLETA DE OÓCITOS
Aspiração folicular guiada por utrassom (OPU – “ovum 
pick up”)
Transvaginal, sem tratamento hormonal
Doadoras: recebem anestesia, higienização
Aspiração cuidadosa dos folículos
Oócitos = selecionados e classificados, colocados em 
criotubos c/ meio de cultura específico => laboratório
Realizada 2x por semana ou semanal
Vídeo 1: https://www.youtube.com/watch?v=Kl0Qk45xq-U
23
ETAPAS DA PIV – MATURAÇÃO DOS OÓCITOS
Incubadoras = temperatura, umidade e atmosfera 
gasosa controladas. 
18 a 24 horas em atmosfera controlada contendo 5% 
de CO2 em ar e umidade saturada
modificações no núcleo e no citoplasma do oócito
CUIDADO COM CONTAMINAÇÕES
24
ETAPAS DA PIV – FERTILIZAÇÃO IN VITRO (FIV)
Ao final do processo de maturação
Oócitos são transferidos para uma nova placa 
contendo o meio de fertilização específico
Co-cultivo com os espermatozoides: 18 a 22 horas, a
39°C e atmosfera com 5% de CO2 em ar e umidade 
saturada
Capacitação espermática
25
CAPACITAÇÃO ESPERMÁTICA
IN VIVO: sptz precisam ir até a ampola da tuba 
uterina para fecundar o oócito
Nesse trajeto, substâncias presentes no sistema 
reprodutor feminino induzem a capacitação dos 
espermatozoides: 
Modificações bioquímicas, como: alterações na 
fluidez e no teor lipídico da membrana plasmática
Resultado: hiperativação espermática.
Esse processo possibilita a ligação da membrana
do sptz a receptores na zona pelúcida do oócito, onde 
ocorre a reação acrossômica. 
26
ETAPAS DA PIV – CULTIVO IN VITRO
Zigotos são transferidos para uma nova placa 
contendo meio específico para o desenvolvimento 
embrionário = INCUBADORA
Até o estágio de blastocisto (7D de desenvolvimento 
embrionário). 
Os embriões viáveis são classificados e envasados 
individualmente em palhetas para que possam ser 
inovulados (transferidos) para as vacas receptoras.
7 a 9 dias, a 39°C com atmosfera controlada (5% de 
O2, 5% de CO2 e 90% de N2) e umidade saturada
27
ETAPAS DA PIV – CULTIVO IN VITRO
Vídeo 2: 
https://www.youtube.com/watch?v=8RhL73NZyws
Vídeo 3: 
https://www.youtube.com/watch?v=hekgWqNjT-4
28
ETAPAS DA PIV – TRANSFERÊNCIA
Embriões produzidos por PIV apresentam baixa 
resistência à congelação
Baixa criotolerância
 transferência a fresco para taxa de prenhez 
satisfatória. 
Vídeo 4: https://www.youtube.com/watch?v=2euwL_70uU4
29
30
TRANSGENIA 
CLONAGEM
CLONAGEM
Em animais: produção de indivíduos geneticamente 
idênticos
http://fait.revista.inf.br/imagens_arquivos/arquivos_destaque/DhyPvqvZdREhWFc_2016-9-14-18-22-8.pdf
33
CLONAGEM
A maioria das atividades => espécie bovina
Animais clonados de outras espécies: equinos, 
caprinos, ovinos, suínos, bubalinos e cervos
https://oglobo.globo.com/sociedade/ciencia/clonagem-um-grande-negocio-20-anos-depois-da-ovelha-dolly-19580298
2016!!!
1894 – Hans Dreisch trabalhando com ouriços-do-
mar pegou um embrião de duas células e sacudindo 
dentro de um béquer cheio de água do mar fez com 
que as células se separassem, dando origem a dois 
ouriços adultos.
1902 – O embriologista Hans Spemman usou um fio 
de cabelo de seu filho como uma faca para separar 
um embrião de salamandra, também dando origem 
a dois indivíduos.
1952 – Robert Briggs e Thomas King realizaram a 
primeira clonagem de sapos a partir de células 
embrionárias.
1997: Nascimento da ovelha Dolly => o primeiro 
clone produzido a partir de um núcleo de 
CÉLULAS SOMÁTICAS DE UM ANIMAL ADULTO.
Ela não foi o primeiro clone
CLONAGEM
Clonagem bovina e equina já é comercial!
Revista Globo Rural - 2017
https://revistagloborural.globo.com/Colunas/sebastiao-nascimento/noticia/2017/12/clone-de-gir-leiteiro-
ja-vendeu-20-mil-doses.html
36
2014 a 2017 = 20 mil
https://oglobo.globo.com/sociedade/ciencia/clonagem-um-grande-negocio-20-anos-depois-da-ovelha-
dolly-19580298
37
CLONAGEM
Transferência nuclear de células somáticas (TNCS)
São necessários 2 tipos celulares:
1- doador de núcleo = será clonado
2- célula que receba o núcleo = receptora
A célula doadora de núcleo pode ser qualquer um dos 
212 tipos celulares somáticos do organismo. 
Cél receptora: citoplasma sem núcleo de um oócito 
maduro.
38
39
CLONAGEM - USOS
✓ Banco/ seguro para morte de animais
✓ Multiplicação de indivíduos de excepcional valor 
genético
✓ Conservação de espécies em extinção / extintas
40
41
CLONAGEM - USOS
Masss A MAIOR CONTRIBUIÇÃO da clonagem:
✓ produzir animais transgênicos
✓ produção de células para fins biomedicinais
42
https://revistapesquisa.fapesp.br/wp-
content/uploads/2015/10/062-065_cabra-
trans_2361.pdfCLONAGEM ASSOCIADA A TRANSGENIA
✓ produção de animais doadores de órgãos e tecidos 
para humanos, 
✓ produção de proteínas de uso farmacológico,
✓ produção modelos animais para doenças humanas,
✓ propiciar que leite e carne mais nutritivos
✓ propiciar leite, carne e lã com características de 
interesse industrial. 
✓ Gerar animais resistentes a doenças
43
TRANSGENIA: 
Processo de alteração do material genético de uma
espécie pela introdução de uma ou mais sequências
de genes provenientes de outra espécie.
O organismo transgênico contém fragmentos do
genoma de bactérias, vírus ou outros organismos em
seu DNA. Os genes introduzidos não pertenciam ao
genoma original da espécie modificada e vão conferir-
lhe novas características (resistência a herbicidas,
produção de toxinas contra pragas, produção de
substâncias de interesse, como maior qualidade
nutritiva ou produzindo substâncias medicinais).
45
TRANSGENIA: 
3 principais métodos para transferir um gene de
interesse para o genoma de outro animal
(hospedeiro):
✓ Microinjeção de DNA
✓ Retrovírus como vetor
✓ Agregação em células mães embrionárias
http://www2.ibb.unesp.br/nadi/Museu5_transmissao/Museu5_engenharia/Museu5_enge
nharia_transgenicos.htm
http://www2.ibb.unesp.br/nadi/Museu5_transmissao/Museu5_engenharia/Museu5_enge
nharia_transgenicos.htm
http://www2.ibb.unesp.br/nadi/Museu5_transmissao/Museu5_engenharia/Museu5_enge
nharia_transgenicos.htm
http://www2.ibb.unesp.br/nadi/Museu5_transmissao/Museu5_engenharia/Museu5_enge
nharia_transgenicos.htm
50
51
TRANSGENIA: 
Texto: Cabras transgênicas
http://revistapesquisa.fapesp.br/wp-
content/uploads/2015/10/062-065_cabra-
trans_2361.pdf
52
LINKS
http://www.cnpgl.embrapa.br/sistemaproducao/498
8-clonagem-e-transgenia-animal
http://fait.revista.inf.br/imagens_arquivos/arquivos_d
estaque/DhyPvqvZdREhWFc_2016-9-14-18-22-8.pdf
http://www.cbra.org.br/pages/publicacoes/rbra/dow
nload/pag118-128.pdf
http://www2.ibb.unesp.br/nadi/Museu5_transmissao
/Museu5_engenharia/Museu5_engenharia_transgeni
cos.htm
54
LINKS
http://www.bioembryo.com.br/noticias.php?cat=3&s
ubcat=7&id=251
http://www.cbra.org.br/pages/publicacoes/rbra/v40/
n2/p58-64%20(RB602).pdf
http://www.cnpgl.embrapa.br/sistemaproducao/498
5-t%C3%A9cnica-de-transfer%C3%AAncia-de-
embri%C3%B5es-te
55