Relatório estafilococos

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<p>COORDENADORIA DE QUÍMICA CURSO TÉCNICO EM QUÍMICA Disciplina: Microbiologia II Professora: Renata Gonçalves</p><p>CONTAGEM DE ESTAFILOCOCOS</p><p>HELENA EHLERT E NICOLI MÜLLERIntrodução</p><p>J</p><p>Staphylococcus ou estafilococos, são um grupo de bactérias gram-positivas, no formato de cocos, que ao aumento do microscópio se arranjam na forma de cacho de uva. Este que é um dos agentes infecciosos mais frequentes em seres humanos.</p><p>Estafilococos pode ser dividida em dois grupo: Coagulase-Positivos (Staphylococcus aureus): Causam intoxicação alimentar por toxinas. Risco em alimentos mal manipulados e Coagulase-Negativos: Geralmente inofensivos em alimentos, sem risco de intoxicação.</p><p>A análise de estafilococos em alimentos é uma prática essencial para proteger a saúde dos consumidores, evitar surtos de intoxicação alimentar, garantir a qualidade dos produtos e assegurar que os alimentos estejam em conformidade com as normas sanitárias vigentes.</p><p>O objetivo da prática é realizar a análise microbiológica no presunto, com foco na detecção e quantificação de estafilococos, a fim de verificar sua conformidade com os parâmetros estabelecidos pela legislação vigente, garantindo que o produto esteja seguro para o consumo humano e dentro dos limites permitidos para estafilococos coagulase positiva; utilizando o método de contagem em placas. Este objetivo cobre tanto a verificação da segurança alimentar quanto a conformidade com as normas de controle microbiológico.Resultados e Discussões</p><p>A norma vigente é a seguinte: A quantidade máxima permitida de Estafilococos coagulase positiva é 10³ UFC/g, segundo Resolução RDC nº 12 de 2001 da ANVISA.Materiais e métodos</p><p>Materiais: Micropipetas; ponteiras para micropipetas; tubo de ensaio; estante de tubo de ensaio; ágar Manitol Salgado (MAS); pipeta; bico de Bunsen; fósforo; alça de drigalski; agitador; presunto para análise; água peptonada 0,1%; autoclave; placas de Petri; estufa regulada a 37°C; saco plástico, faca e garfo.</p><p>Métodos: Primeiramente corta-se o presunto em pequenos pedaços até fechar 25g (pesando com uma balança) e coloca-se em um saco de plástico junto a 225mL de água peptonada 0,1% e agitar 3 minutos no agitador. Com isso, terá a primeira diluição (10-1). Logo em seguida, é necessário pegar mais dois tubos de ensaio, um para diluição 10-2 e um para a 10-3. Coloca-se 1mL da diluição 10-1 em 9mL de água peptonada 0,1% que está dentro do tubo de ensaio. Posteriormente, adiciona-se 1mL da diluição 10-2 para o segundo tubo de ensaio com mais 9mL de água peptonada 0,1%. Com o auxílio de uma micropipeta, adiciona-se 0,1ml das amostras de cada diluição em duas placas de Petri, pois a contagem será realizada em duplicata. Após colocar cada mL nas placas, é necessário realizar o espalhamento com uma alça de drigalski. Após fazer este passo a passo é necessário levar as placas, viradas com a tampa para baixo, para a estufa regulada a 37°C por 48h.</p><p>Diluições</p><p>10-1</p><p>10-2</p><p>10-3</p><p>Amostras</p><p>556 EST</p><p>105</p><p>11</p><p>1056 EST</p><p>316</p><p>41</p><p>Tabela 1: Contagem de M.O</p><p>Utilizando o método de duplicata, analisou-se três diluições, 10-1, 10-2, 10-3. As única diluições que estão dentro dos parâmetros de contagem de placas, para realização dos cálculos, é as de diluições 10-2 (105) e 10-3 (41). Pois o número mínimo de colônias é 25 unidades por placa e o máximo é 250 unidades.</p><p>De acordo com as principais características visuais e do alimento em que foram analisadas as colônias de bactérias formadas nas placas, há grande chance de ser a bactéria estafilococos coagulase positiva, desde que houve mudança na coloração do ágar, de vermelho para cor amarela.</p><p>Conclusão</p><p>Concluímos que este presunto não estava próprio para ser ingerido, pois o resultado de colônia por gramas foi ultrapassado do parâmetro imposto pela ANVISA. O máximo era 103 UFC/g e o resultado desta análise foi 2,575 x 104 UFC/g.Referências</p><p>Agência Nacional de Vigilância Sanitária. Resolução RDC nº 12, de 2 de janeiro de 2001. Aprova o regulamento técnico sobre padrões microbiológicos para alimentos. Diário Oficial da União, Brasília, DF, 10 jan. 2001. Seção 1, p. 45-53.</p><p>GEITENES, Simone et al. Modelagem do crescimento de bactérias láticas e análise microbiológica em apresuntado e presunto cozido fatiados e embalados à vácuo. RECEN-Revista Ciências Exatas e Naturais, v. 15, n. 1, p. 113-134, 2013.</p><p>https://antigo.anvisa.gov.br/documents/10181/2718376/IN_161_2022_.pdf/b08d70cb-add6-47e3-a5d3-fa317c2d54b2</p><p>SANT'ANA, Anderson de Souza; AZEREDO, Denise R. Perdomo. Comparação entre o sistema Petrifilm RSA® e a metodologia convencional para a enumeração de estafilococos coagulase positiva em alimentos. Food Science and Technology, v. 25, p. 531-535, 2005.</p><p>Imagens</p><p>Figura 1: Crescimento dos microrganismos nas 6 placas, com 3 diluições</p><p>Figura 2: Crescimento de microrganismos em concentração 10-1, em duplicata.</p><p>Cálculos</p><p>Figura 3: Crescimento de microrganismos em concentração 10-2, em duplicata.</p><p>Figura 4: Crescimento de microrganismos em concentração 10-3, em duplicata.</p><p>105 x 102 = 10500</p><p>41 x 103 = 41000</p><p>10500 + 41000/2 = 25750 = 2,575 x 104 UFC/g</p><p>Pesquisa</p><p>Estafilococos podem ser divididos em dois grupos principais com base na presença da enzima coagulase: estafilococos coagulase positiva e estafilococos coagulase negativa. A análise desses dois tipos é fundamental para determinar o potencial patogênico e o tratamento adequado das infecções.</p><p>Estafilococos Coagulase Positiva (SCP)</p><p>· Exemplo principal: Staphylococcus aureus.</p><p>· Presença de coagulase: Positiva, produz a enzima coagulase, que coagula o plasma.</p><p>· Patogenicidade: S. aureus é altamente patogênico e é uma das principais causas de infecções em seres humanos. Está associado a uma ampla variedade de infecções, desde infecções cutâneas (como furúnculos e abscessos) até condições mais graves, como pneumonia, sepse e endocardite.</p><p>· Fatores de virulência: Produz toxinas e enzimas, como hemolisinas e enterotoxinas, que contribuem para a sua virulência.</p><p>· Resistência a antibióticos: S. aureus é conhecido por sua resistência a vários antibióticos, incluindo cepas resistentes à meticilina (MRSA).</p><p>Estafilococos Coagulase Negativa (SCN)</p><p>· Exemplos principais: Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus saprophyticus.</p><p>· Presença de coagulase: Negativa (não produzem a enzima coagulase).</p><p>· Patogenicidade: Embora geralmente menos patogênicos do que os estafilococos coagulase positiva, os SCN podem causar infecções, especialmente em pacientes imunocomprometidos ou em ambiente hospitalar. S. epidermidis, por exemplo, está frequentemente associado a infecções relacionadas a dispositivos médicos (como cateteres e próteses).</p><p>· Fatores de virulência: Embora menos virulentos, SCN podem formar biofilmes em superfícies de dispositivos médicos, o que dificulta o tratamento.</p><p>· Resistência a antibióticos: SCN, como S. epidermidis, podem ser resistentes a antibióticos, especialmente em infecções hospitalares.</p><p>A escolha do meio de cultura adequado é essencial para a identificação e diferenciação de estafilococos coagulase positiva (SCP) e negativa (SCN), cada um tem um meio de cultura específico:</p><p>Estafilococos Coagulase Positiva (SCP)</p><p>· Agar Manitol Salgado: Este meio é altamente seletivo para Staphylococcus aureus devido à alta concentração de sal (7,5%), que inibe o crescimento de muitas outras bactérias. Além disso, contém manitol, um açúcar que S. aureus fermenta, resultando em uma mudança de cor no meio de vermelho para amarelo devido à produção de ácido, sendo por isso que na realização da nossa prática, grande parte do ágar mudou de coloração, por causa da bactéria que fermentou os açúcares presentes no ágar. Essa característica torna o Agar Manitol Salgado um meio ideal para isolar e identificar estafilococos coagulase positiva.</p><p>· Agar Sangue: Esse meio é utilizado para observar a hemólise, uma característica comum de S. aureus. O tipo beta-hemólise, que causa a destruição completa dos glóbulos vermelhos ao redor das colônias, é indicativo de S. aureus. O Agar Sangue é um meio diferencial que também pode ser usado para isolar e identificar estafilococos coagulase positiva.</p><p>Estafilococos Coagulase Negativa (SCN)</p><p>· Agar Mueller-Hinton: Este meio é frequentemente utilizado em testes de sensibilidade a antibióticos, especialmente para SCN. Não é seletivo ou diferencial, mas permite o crescimento de uma ampla variedade de bactérias, facilitando testes adicionais para identificação.</p><p>· Meios enriquecidos: Para SCN, que podem ser menos exigentes em termos de seletividade, meios como o Agar Nutriente ou Caldo Nutriente também podem ser utilizados para o cultivo inicial.</p><p>Ágar Manitol Salgado</p><p>· Composição: O ágar manitol salgado contém principalmente manitol (um açúcar), cloreto de sódio (NaCl) em alta concentração (7,5% a 10%) e um indicador de pH (geralmente vermelho de fenol).</p><p>· Uso: Esse meio é seletivo e diferencial, projetado principalmente para o isolamento e identificação de Staphylococcus aureus.</p><p>· Seleção: O alto teor de sal inibe o crescimento da maioria das bactérias, exceto Staphylococcus, que são tolerantes ao sal.</p><p>· Diferenciação: Diferencia as espécies de Staphylococcus baseadas na fermentação do manitol. Se a bactéria fermentar o manitol, o ácido produzido altera o indicador de pH, mudando a cor do meio de vermelho para amarelo.</p><p>· Características:</p><p>· Seletividade: Inibe a maioria das bactérias não halofílicas (não tolerantes ao sal).</p><p>· Diferencial: Destaca Staphylococcus aureus por meio da mudança de cor (vermelho para amarelo).</p><p>Ágar Mueller-Hinton</p><p>· Composição: Este ágar é composto de infusão de carne bovina, amido e ágar. Não possui componentes seletivos ou diferenciais.</p><p>· Uso: É um meio geral amplamente utilizado para testes de sensibilidade a antibióticos (antibiograma).</p><p>· Propósito: A principal função do ágar Mueller-Hinton é servir como um meio base para avaliar a eficácia de antibióticos contra diferentes bactérias, utilizando o método de difusão de disco.</p><p>· Aplicação Universal: É adequado para uma ampla variedade de bactérias, incluindo gram-positivas e gram-negativas.</p><p>· Características:</p><p>· Não Seletivo: Permite o crescimento de uma ampla variedade de organismos bacterianos.</p><p>· Não Diferencial: Não diferencia tipos de bactérias, pois não possui indicadores de pH ou outros componentes diferenciais.</p><p>image5.jpeg</p><p>image6.jpeg</p><p>image1.png</p><p>image2.png</p><p>image3.jpeg</p><p>image4.jpeg</p>