Testes de Carboidratos em Bioquímica

Prévia do material em texto

<p>DEPTO. DE QUÍMICA E CIÊNCIAS AMBIENTAIS – BIOQUÍMICA ESTRUTURAL – PROF. GUSTAVO</p><p>R O T E I R O D E A U L A P R Á T I C A</p><p>TÓPICOS: CARBOIDRATOS E LIPÍDEOS versão 2024</p><p>CARBOIDRATOS:</p><p>REAÇÕES QUALITATIVAS DOS CARBOIDRATOS</p><p>OBSERVAÇÃO: EM TODOS OS EXPERIMENTOS ESCREVA COM A CANETA MARCADORA NA</p><p>PARTE SUPERIOR DO TUBO DE ENSAIO UMA IDENTIFICAÇÃO, PARA NÃO CONFUNDIR OS</p><p>TUBOS. REGISTRE OS RESULTADOS COM FOTOGRAFIAS QUE SERÃO INCLUÍDAS NO</p><p>RELATÓRIO.</p><p>1. TESTE DE MOLISCH (DESCARTE OS RES Í DUOS NO BÉQUER NA CAPELA )</p><p>A 20 gotas da solução de carboidrato (teste glicose ou frutose) adicione 4 gotas da solução de alfa-</p><p>naftol a 10% em álcool. Como controle dessa reação, prepare um tubo substituindo a solução de carboidrato</p><p>por água. Em seguida, adicione delicadamente 1 mL de ácido sulfúrico concentrado no fundo de cada tubo,</p><p>com o auxílio de uma pipeta (O ÁCIDO FICA NA CAPELA). Não agite o tubo. Deixe-o em repouso por 5</p><p>minutos e em seguida observe a formação de 2 camadas: - a camada superior corresponde à solução de</p><p>carboidrato e alfa-naftol e a inferior é a do ácido sulfúrico concentrado. Na interface das 2 camadas há o</p><p>aparecimento de um anel de coloração violeta, indicando a presença de carboidrato na amostra. Agite com</p><p>cuidado ambos os tubos. Compare os resultados obtidos com ambos os tubos. Você terá 2 tubos: 1: glicose</p><p>ou frutose, 2: água.</p><p>tubo 1 2</p><p>carboidrato Água (20 gotas) Glicose ou frutose (20 gotas)</p><p>alfa-naftol 4 gotas 4 gotas</p><p>ác. sulfúrico (na capela) 1 mL no fundo do tubo 1 mL no fundo do tubo</p><p>SEGURANÇA: CUIDADO COM O ÁCIDO SULFÚRICO: É ALTAMENTE CORROSIVO!</p><p>2. TESTE DE SELIWANOFF (DESCARTE OS RESÍDUOS NO BÉQUER NA CAPELA)</p><p>Em 3 tubos coloque 2 gotas das seguintes soluções (1 tubo para cada): glicose, frutose e água,</p><p>adicione 10 gotas da solução de resorcinol a 0,05% em HCl 6N. Aqueça em banho-maria fervente durante</p><p>10 minutos. A coloração castanho escura indica a presença de cetoses. Aldoses reagem mais lentamente</p><p>com o resorcinol originando um produto de coloração alaranjada. Você terá 3 tubos.</p><p>SEGURANÇA: cuidado com a solução ácida de resorcinol: o ácido é corrosivo e o resorcinol é irritante das</p><p>mucosas. Cuidado com queimaduras com a água quente do Banho-Maria fervente!</p><p>Tubo 1 2 3</p><p>Carboidrato ou H2O H2O 2 gotas Glicose 2 gotas Frutose 2 gotas</p><p>Resorcinol 10 gotas</p><p>Banho-Maria fervente 10 minutos</p><p>DEPTO. DE QUÍMICA E CIÊNCIAS AMBIENTAIS – BIOQUÍMICA ESTRUTURAL – PROF. GUSTAVO</p><p>3. REAÇÃO COM SAIS DE PRATA (PODER REDUTOR) (DESCARTE OS RES Í DUOS NO</p><p>BÉQUER NA CAPELA)</p><p>A 20 gotas da solução de carboidrato (faça 1 tubo para glicose, outro para sacarose), adicione 10</p><p>gotas de AgNO3 0,1M e 5 gotas de NH4OH concentrado (ESTE FICA NA CAPELA). Aqueça em banho</p><p>maria por 5 minutos. e observe os resultados. Esta reação indica a presença de açúcares redutores.</p><p>Tubo 1 2</p><p>Carboidrato Glicose 20 gotas Sacarose 20 gotas</p><p>Nitrato de Prata AgNO3 10 gotas</p><p>Hidróxido de amônio NH4OH 5 gotas</p><p>Banho-Maria fervente 5 minutos</p><p>SEGURANÇA: O nitrato de prata é cáustico e irritante, e o hidróxido de amônio é tóxico. Cuidado com</p><p>queimaduras com a água quente do Banho-Maria fervente!</p><p>4. TESTE DE BENEDICT (PODER REDUTOR)</p><p>A 20 gotas do reagente de Benedict adicione 4 gotas da solução de carboidrato (faça um tubo para</p><p>glicose, outro para sacarose). Coloque em banho maria fervente por 5 minutos e observe os resultados.</p><p>Esta reação também indica a presença de açúcares redutores.</p><p>Tubo 1 2</p><p>Carboidrato Glicose 4 gotas Sacarose 4 gotas</p><p>Reagente de Benedict (capela) 20 gotas</p><p>Banho-Maria fervente 5 minutos</p><p>SEGURANÇA: Cuidado com queimaduras com a água quente do Banho-Maria!</p><p>5. TESTE DO IODO PARA AMIDO</p><p>Prepare 2 tubos, colocando em um 20 gotas de amido a 1% e no outro 20 gotas de sacarose.</p><p>Depois adicione a cada um 2 gotas da solução de iodo. O aparecimento de cor azul ou avermelhada indica</p><p>a presença de polissacarídeos como amido ou glicogênio, ao passo que mono e oligossacarídeos não</p><p>reagem. Pode escolher alguns outros carboidratos para serem testados, incluindo mono oligo e</p><p>polissacarídos. Inclua um controle usando água.</p><p>EFEITO DA TEMPERATURA: Pegue o tubo que tem o amido (cor azul escura) e agite por alguns segundos</p><p>na água do Banho-Maria fervente. O que aconteceu? Depois resfrie o tubo com água da torneira. O que</p><p>aconteceu agora?</p><p>SEGURANÇA: Cuidado com a água quente do Banho-Maria! O iodo pode irritar a pele.</p><p>6. HIDRÓLISE ÁCIDA DE POLISSACARÍDEOS</p><p>Materiais</p><p>Solução de amido solúvel a 2%, HCl concentrado, solução de iodo, solução de glicose, tubos de</p><p>DEPTO. DE QUÍMICA E CIÊNCIAS AMBIENTAIS – BIOQUÍMICA ESTRUTURAL – PROF. GUSTAVO</p><p>ensaio e estante.</p><p>Instruções para o procedimento:</p><p>1. Pegue 2 tubos de ensaio e numere-os como 1’ e 20’.</p><p>2. Adicione 2 gotas de solução de iodo a cada tubo de ensaio numerado.</p><p>3. Adicione 5 mL de solução de amido a 2% em outro tubo de ensaio e rotule-o como “AH” (amido</p><p>hidrolisado).</p><p>4. Adicione 2,0 mL de HCl concentrado a esse tubo de ensaio contendo a solução de amido.</p><p>5. Agite bem a solução contendo a mistura de amido e HCl concentrado.</p><p>6. Coloque o tubo de ensaio “AH” em um Banho Maria a 60°C e comece a contar o tempo.</p><p>7. Nos tempos de 1 e 20 minutos, retire amostras de 1 mL de amido que está sofrendo a hidrólise</p><p>ácida (tubo AH) e transfira para os tubos numerados previamente (primeiro item da lista).</p><p>8. Observe a cor da amostra após adicionar a alíquota de amido.</p><p>9. Anote os resultados e observe a mudança de cor dos tubos com o tempo.</p><p>LIPÍDEOS</p><p>1. REAÇÃO DE SAPONIFICAÇÃO</p><p>Coloque em um tubo de ensaio, aproximadamente 2 mL de óleo vegetal. Adicione 5 mL da solução</p><p>alcoólica de Hidróxido de potássio a 10%. Cubra a extremidade do tubo com filme plástico e agite bem.</p><p>Retire o plástico e aqueça por 3 minutos no Banho Maria fervente.</p><p>SEGURANÇA: CUIDADO COM A SOLUÇÃO DE HIDRÓXIDO DE POTÁSSIO, CÁUSTICA.</p><p>2. EFEITO DE CÁTIONS SOBRE A SOLUBILIDADE</p><p>Em 20 gotas (1 mL) do sabão que você preparou antes, adicione 0,5 mL (10 gotas) de uma solução de</p><p>cloreto de cálcio a 10%. Como controle, prepare um outro tubo substituindo o cloreto de cálcio por cloreto de</p><p>sódio a 10%. Misture batendo os tubos de ensaio na palma da mão e verifique o que acontece em cada</p><p>tubo.</p><p>3. DETERGÊNCIA: TESTE 1</p><p>Adicione um pouco de água e agite ambos os tubos batendo contra a palma da mão. Observe o que</p><p>acontece em ambos os tubos.</p><p>4. DETERGÊNCIA: TESTE 2</p><p>Adicione uma pequena quantidade de óleo vegetal a cada tubo e agite bem. O que você observa?</p><p>DEPTO. DE QUÍMICA E CIÊNCIAS AMBIENTAIS – BIOQUÍMICA ESTRUTURAL – PROF. GUSTAVO</p><p>MATERIAL DE APOIO: CARBOIDRATOS</p><p>REAÇÃO DE MOLISCH</p><p>Figura 1. (A) aparência do anel formado na interface entre o ácido e a solução aquosa; (B)</p><p>formação do composto colorido na reação entre hidroxi-metil-furfural e alfa-naftol.</p><p>TESTE DE SELIWANOFF</p><p>Figura 2. Reação de Seliwanoff entre resorcinol e o hidroxi-metil-furfural.</p><p>Testes de Poder redutor (para açúcares redutores): Tollens e Benedict</p><p>TESTE DE TOLLENS (SAIS DE PRATA)</p><p>Figura 3. Formação do “espelho de prata” pela redução da Ag em meio alcalino.</p><p>A B</p><p>DEPTO. DE QUÍMICA E CIÊNCIAS AMBIENTAIS – BIOQUÍMICA ESTRUTURAL – PROF. GUSTAVO</p><p>TESTE DE BENEDICT</p><p>Figura 4. (A) Aparência dos tubos contendo açúcares redutores e não redutores; (B) redução do</p><p>cobre em meio alcalino por reação com o carbono anomérico.</p><p>REAÇÃO DE CARACTERIZAÇÃO DO AMIDO COM IODO:</p><p>Figura 5. Formação do complexo colorido iodo em sequência de glicopiranoses alfa-1→ 4.</p><p>LIPÍDEOS</p><p>SAPONIFICAÇÃO</p><p>Figura 6. Saponificação por reação entre um triacilglicerol (óleo ou gordura) e uma base forte.</p><p>Ação de Cálcio ou magnésio (água dura):</p><p>2 CH3(CH2)nCO2</p><p>-Na+ + Mg2+ ----> [CH3(CH2)nCO2</p><p>-]2 Mg2+ (insolúvel) + 2 Na+</p><p>Ação detergente</p><p>DEPTO. DE QUÍMICA E CIÊNCIAS AMBIENTAIS – BIOQUÍMICA ESTRUTURAL – PROF. GUSTAVO</p><p>Relatórios:</p><p>Os relatórios serão elaborados em grupos e enviados através do Classroom em resposta a uma</p><p>atividade que será criada para este fim específico. É necessário anexar um documento</p><p>em forma-</p><p>to PDF por grupo contendo o primeiro nome dos membros do grupo separados por um hífen.</p><p>Eles devem ser enviados até a data limite (2 semanas após a prática), respeitando o horário esta-</p><p>belecido na tarefa, não sendo aceitos relatórios atrasados. Portanto, é recomendável que sejam</p><p>enviados com antecedência, verificando se foram de fato submetidos. Cada relatório será avaliado</p><p>com uma nota de até 1,0, e a média das notas dos relatórios será adicionada à média das avalia-</p><p>ções.</p><p>Para simplificar a elaboração (e correção) dos relatórios, vocês devem apresentar o relatório com:</p><p>1. Uma capa contendo o nome da prática, a data de realização e o nome completo dos membros</p><p>do grupo;</p><p>2. Os resultados documentados com fotografias1; e</p><p>3. As respostas às perguntas mencionadas no relatório, seguindo a ordem das mesmas. Ou seja,</p><p>não é necessário incluir introdução, objetivos ou materiais e métodos. Podem incluir ilustrações de</p><p>fontes utilizadas para a escrita das respostas, sempre citando as mesmas.</p><p>Questões a serem respondidas no relatório:</p><p>(1) A) Qual é o princípio do teste de Molisch? B) um dissacarídeo como a sacarose ou a lactose</p><p>dariam positivo?</p><p>(2) O teste de Seliwanoff seria adequado para distinguir diferenças de reatividade entre a glicose e</p><p>a galactose?</p><p>(3) A) Por que a sacarose deu negativo nos testes de Tollens e Benedict? B) O que aconteceria se</p><p>antes do teste tivesse sido adicionada a enzima sacarase (invertase) à solução de sacarose? C)</p><p>se tivesse usado frutose ao invés de glicose teria dado positivo nestes testes?</p><p>(4) A) por que a sacarose deu negativo no teste de iodo para amido? B) por que o glicogênio (não</p><p>testado na prática) também poderia dar uma cor, embora diferente, nesse teste? C) se a gente ti-</p><p>vesse amilose pura, ela também daria a cor azul? D) por que some a cor azul na medida em que</p><p>procede a hidrólise do amido? E) por que o aumento da temperatura leva ao sumiço da cor azul e</p><p>ela retorna quando a amostra é resfriada? Podemos deduzir se a formação do complexo iodo-ami-</p><p>do é exotérmica ou endotérmica?</p><p>(5) A) Qual seria o comportamento observado se um pouco de saliva fosse adicionado a um tubo</p><p>com amido não hidrolisado e fosse feito o teste com iodo a intervalos? B) e se tivesse fervido a sa-</p><p>liva antes de adicioná-la ao amido?</p><p>(6) A) O que observou nos tubos que continham sabão após a adição de NaCl e CaCl2? Qual é a</p><p>explicação? B) Qual dos dois tubos teria capacidade emulsificante? Por que?</p><p>1 Dependendo do relatório será necessário acrescentar aos resultados gráficos, tabelas, etc.</p><p>Compartilhem as fotos tiradas com os demais integrantes do grupo, por segurança.</p><p>TÓPICOS: CARBOIDRATOS E LIPÍDEOS versão 2024</p><p>Reações qualitativas dos carboidratos</p>