Aula 4 - Exigencias nutricionais e controle para o cultivo

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EXIGÊNCIAS NUTRICIONAIS E CONDIÇÕES 
FÍSICAS PARA O CULTIVO DE 
MICRORGANISMOS
Dra Alana de Freitas Pires - alana.pires@estacio.br
Nutrição, controle e 
crescimento microbiano
VAMOS INICIAR 
REFLETINDO!
• Os meios de cultura são preparações que fornecem nutrientes
necessários ao crescimento de microrganismos, possibilitando
seu estudo em laboratório. Cada tipo de microrganismo
necessita de condições ideais para cultivo.
Micro-
organismos
Mesmas 
necessidades 
nutritivas que 
todos seres vivos 
Grande maioria das bactérias são 
quimiotróficas
Litotróficas: Oxidam compostos 
inorgânicos
Organotróficas: oxidam compostos 
orgânicos 
1. Fatores necessários para o crescimento 
• Fatores Químicos (Nutrientes, N, C, O2) 
• Fatores Físicos (Temperatura, pH e pressão osmótica)
2. Meio de Cultura 
• Meio Complexo 
• Meio Definido
Crescimento Microbiano 
Refere-se a um aumento do número de células e não 
ao aumento das dimensões celulares
Crescimento Microbiano 
1 
cel
tempo de geração 
ou de duplicação
FATORES NECESSÁRIOS PARA O CRESCIMENTO 
• - FATORES QUÍMICOS: 
• água
• fontes de carbono e nitrogênio
• minerais
• oxigênio
• fatores orgânicos
• - FATORES FÍSICOS: 
• temperatura
• pH 
• pressão osmótica (concentração de sal)
FATORES 
QUÍMICOS
1. Água
- Essencial para os micro-organismos 
- Disponibilidade variável no ambiente 
Ambiente com temperatura, onde ainda é possível o crescimento
FATORES FÍSICOS 
A maioria dos micro-organismos cresce bem nas 
temperaturas ideais para os seres humanos
1. Temperatura
Micro-organismos são classificados em 3 grupos:
FATORES FÍSICOS 
°C)
1. TEMPERATURA: 
FATORES FÍSICOS 
FATORES FÍSICOS 
Temperatura de preservação dos alimentos 
1. TEMPERATURA: 
Baixas temperaturas reduzem as velocidades 
de reprodução microbiana 
FATORES FÍSICOS 
2. pH:
3. PRESSÃO OSMÓTICA: 
• Os micro-organismos retiram da água a maioria dos
nutrientes solúveis (conteúdo celular 80 – 90 % de
água)
• Pressão osmótica: retira a H2O dentro da célula
• Reação Hipertônica: perda de H2O do meio
intracelular para o extracelular
• Plasmólise: diminuição da membrana plasmática da célula
devido a perda de H2O por osmose
FATORES FÍSICOS 
3. PRESSÃO OSMÓTICA: 
FATORES FÍSICOS 
MEIOS DE CULTURA
- Preparado nutritivo para o crescimento de micro-organismos, cuja
composição deve atender aos princípios expostos anteriormente;
- Meio adequado- conhecer a fisiologia das bactérias em estudo; o
meio ideal para uma bactéria pode ser ruim para outra;
CULTURA 
Micro-organismos que crescem e se multiplicam em um meio
Meio de Cultura
Meio de Cultura
Meio de Cultura- quanto à definição
Meios
Quimicamente Definidos: composição
exata é conhecida. Quantidade precisas
de compostos químicos inorgânicos ou
orgânicos altamente purificados,
adicionados a água destilada
Complexo ou indefinido:
Não se conhece a composição precisa de
alguns componentes.
Empregam produtos de digestão da
caseína, de carne, de soja, de leveduras,
extratos de plantas, entre outros.
Meio de Cultura- quanto à afinidade
Meios
Seletivo:
Favorece o crescimento do micro-organismo de
interesse e impede o crescimento de outros.
Diferencial:
Permite a fácil identificação da colônia da bactéria
de interesse, dentre as colônias de outras bactérias
crescidas no meio.
Ex.: meio ágar sangue
De enriquecimento:
Semelhante ao seletivo, mas suplementado por
nutrientes especiais, com a característica de
aumentar o número das bactérias de interesse
tornando-a detectável.
• Estado físico 
– Sólido: placas de petri ou tubos 
– Semi-sólido
– Líquido 
Meio de Cultura
Tipos de meio de cultura
Líquidos ou caldos:
CLASSIFICAÇÃO DE ACORDO COM O ESTADO FÍSICO 
➢Não têm agente solidificante nutrientes 
dissolvidos em solução aquosa 
➢Não há formação de colônias 
➢Para aumentar o número de microrganismos e 
para provas bioquímicas
Ex: Infusão cérebro coração
Sólidos
CLASSIFICAÇÃO DE ACORDO COM O ESTADO FÍSICO 
• Adição de uma substância solidificante em determinada quantidade 
(1 a 2%)
• Superfície endurecida → permitem a formação de colônias
• para distinção da morfologia, isolamento de colônias, conservação de 
cepas
Tipos de meio de cultura
Semi-sólidos
CLASSIFICAÇÃO DE ACORDO COM O ESTADO FÍSICO 
➢ Adição de uma substância solidificante em menor 
quantidade (0,5 a 0,8%) 
➢Estudos da mobilidade, testes bioquímicos 
Tipos de meio de culturaTipos de meio de cultura
Meio de cultura Seletivo e Diferencial
▪ Seletivo – elaborados com o objetivo de favorecer o crescimento da 
bactéria de interesse e impedir o crescimento de outras bactérias
Ex: Ágar sabouraud (Fungos)
▪ Diferencial – utilizado para fácil identificação da colônia de bactéria 
de interesse quando existem outras bactérias crescendo na mesma 
placa
Ex.: Ágar Sangue (Streptococcus pyogenes)
Ágar MacConkel
Contém sais e cristal violeta para inibir o
crescimento de gram positivas e favorecer o
crescimento de gram negativas.
Além disso, possui lactose, o que permite
diferenciar as bacterias que utilizam este
açúcar.
Seletivo e diferencial
Meios de enriquecimento
Isolamento de bactérias presentes em pequeno número junto com outras que estão
em grande quantidade – geralmente é liquido e contém todos os nutrientes
necessários para favorecer a multiplicação da bactéria de interesse
Caldo Selenito - meio de enriquecimento para
o isolamento de Salmonella spp a partir de
materiais clínicos,especialmente fezes.
Meios de cultura
Ágar nutriente Ágar Sal manitol
Ágar Chocolate
Ágar Sangue
Ágar SS Ágar Hektoen enteric
Ágar Thayer-Martin cho.
Técnicas de Semeadura
Método pelo qual se transfere inóculos bacterianos de um meio de cultura 
ou material a ser analisado (secreções, alimentos) para um outro meio de 
cultura. 
São utilizadas as técnicas assépticas: procedimentos que devem 
ser adotados visando a não contaminação de materiais, meios e 
culturas.
Crescimento apenas dos microrganismos desejado!
Técnicas de Semeadura
Semeadura em tubos
Estria sinuosa: semear com alça ou agulha bacteriológica, em zig-zag, 
partindo da base para a extremidade do bizel (superfície inclinada do 
meio).
Objetivo: obtenção de intensa massa de microrganismos.
Estria Reta: semear com agulha bacteriológica, fazendo uma linha reta, 
com cuidado de não ferir o Agar, partindo da base para a extremidade 
do bizel (superfície inclinada do meio).
Objetivo: obtenção de pequena massa de microrganismos.
Semeadura em tubos
Picada Central: semear com agulha bacteriológica, no centro do
Agar. Dependendo da finalidade, o inóculo deve penetrar até 2/3
do tubo ou até o fundo deste.
Objetivo: é utilizado para verificar fermentação e motilidade em
algumas técnicas.
Picada em Profundidade: semear com agulha bacteriológica, no
centro do Agar. Dependendo da finalidade, o inóculo deve
penetrar até 2/3 do tubo ou até o fundo deste.
Objetivo: é utilizado para verificar fermentação e motilidade em
algumas técnicas.
Semeadura em placas
Pour-plate: Transferir 1 ml da cultura para placa de Petri vazia, colocar 10 – 20
ml do meio fundido (e resfriado a cerca de 45 – 50°C) sobre a cultura e
homogeneizar suavemente com movimentos circulares.
Objetivo: contagem bacteriana. É utilizado também para análise de micro-
organismos anaeróbios, adicionando uma outra camada de meio fundido após o
endurecimento da primeira camada.
Semeadura em placas
Estria simples: transferir uma alçada da cultura para meio sólido em placa e estriar
com a alça bacteriológica sobre o meio. A estria pode ser realizada em movimento de
zig- zag (estria sinuosa) ou como uma linha reta sobre o meio (estria reta).
Objetivo: Utilizada para visualização de determinadas propriedades metabólicas, como
a produção de enzimas hidrolíticas (hidrólise de substâncias do meio - sangue...), e
produção de pigmentos.
Semeadura em placas
Esgotamento em estrias ou estrias múltiplas: transferir uma alçada
da cultura para meio sólido em placa e estriar com a alça
bacteriológica sobre o meio. A placa é dividida em 4 quadrantes e a
inoculação pode ser feita de 3 ou 4 estrias.
Objetivo: obtenção de colônias isoladas.
Spread-plate ou distensão: Transferir 0,1 ml da cultura para o meio sólido
na placa e espalhar uniformemente com a própria ponta da pipeta, ou alça
bacteriológica/swab/alça Drigalsky.
Objetivo: obtenção de crescimento confluente, ou para contagem
bacteriana. Esta técnica é muito utilizada na realização de antibiogramas
Semeadura em placasSemeadura em placas
https://www.youtube.com/watch?v=cvQKSFoCsPw
https://www.youtube.com/watch?v=XUy4q-5pK1U
https://www.youtube.com/watch?v=Fr3hBuNlPdE
APRENDA MAIS
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