RT-PCR: Técnica e Aplicações

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1. 
Na técnica de RT-PCR por que não utilizamos ciclos de temperaturas conforme no PCR tradicional?
Resposta incorreta.
A. 
Porque a enzima transcriptase reversa (RT) não consegue polimerizar as novas fitas de RNA com variações de temperaturas;
A temperatura ótima da enzima RT é aproximadamente 42°C, não aceitando variações da temperatura. Além disso, a enzima sintetiza novas fitas de DNA complementar, não de RNA.
Você acertou!
B. 
Porque o RNA tem a estrutura de fita simples, o que não necessita de desnaturação a 95°C das pontes de hidrogênio que contém na molécula de DNA;
A ciclagem das temperaturas objetiva principalmente a reação exponencial devida ao anelamento em dupla-fita da molécula, o que não ocorre com o RNA que é fita simples.
Resposta incorreta.
C. 
Porque na temperatura de 95°C o RNA é estável e, com isso, gera estruturas terciárias que impedem a polimerização pela transcriptase reversa.
A 95°C o RNA é praticamente degradado devido sua instabilidade.
2. 
Se houver a necessidade de gerar apenas 1 tipo de cDNA pela transcriptase reversa, o que deve ser adicionado na reação que servirá como iniciador para a enzima?
Resposta incorreta.
A. 
OligodT, ou seja, oligonucleotídeos compostos de Timinas;
o oligodT ajudará a enzima a sintetizar cDNAs relacionados apenas aos RNAs mensageiros em geral;
Resposta incorreta.
B. 
Um par de primers que servirão para direcionar a RT ao local correto;
como o RNA é fita simples, não há a necessidade de um par de primers.
Você acertou!
C. 
Um único primer (iniciador) específico daquele gene-alvo.
3. 
Comumente é utilizada a enzima RNAse-H após o término da reação de RT-PCR. Qual a importância dessa proteína?
Resposta incorreta.
A. 
Ela permite uma estabilidade dos RNAs extraídos e adicionados na reação;
A RNAse-H degrada os RNAs que estão hibridizados com as novas fitas de cDNAs.
Resposta incorreta.
B. 
A RNAse-H auxilia a Transcriptase reversa na polimerização de uma fita de DNA complementar;
a enzima não ajuda a polimerase, mas sim atua após a reação acabar
Você acertou!
C. Após terminar a reação, a RNAse-H degrada a fita de RNA do híbrido RNA-cDNA, facilitando a reação de PCR subsequente.Sim, a A RNAse-H degrada os RNAs que estão hibridizados com as novas fitas de cDNAs.
4. 
Em qual dos exemplos patológicos abaixo a técnica de RT-PCR é indicada?
Resposta incorreta.
A. 
Para detectar mutações nos genes relacionados a origem de cânceres;
A RT-PCR não é voltada para detectar mutações no DNA.
Resposta incorreta.
B. 
Para analisar se um vírus de DNA está infectando um organismo;
Através da técnica, apenas há a identificação de moléculas de RNA, não de DNA.
Você acertou!
C. 
Para analisar se um vírus de RNA está infectando um organismo.
A expressão de genes está intimamente relacionada a produção de RNAs. Com isso, a RT-PCR é indicada para esse fim.
5. 
Se em um determinado projeto o objetivo é analisar a expressão de genes ribossomais, por exemplo, qual reagente não deve ser adicionado a reação que impediria a análise correta? 
Você acertou!
A. 
OlidodT;
o oligodT direcionará a transcriptase reversa a sintetizar cDNAs relacionados apenas aos RNAs mensageiros, excluindo os ribossomais e transportadores por não conter calda poli-Adenina.
Resposta incorreta.
B. 
Randon primers;
esses iniciadores são inespecíficos, permitindo a análise de todos os grupos de RNAs, incluindo os robossomais.
Resposta incorreta.
C. 
Nucleotídeos livres (A, T, C, G).
é essencial conter os nucleotídeos livres para haver a polimerização dos cDNAs.
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