Pré e Pós Teste - RT PCR

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Pré e Pós Teste - RT PCR
PRÉ TESTE
1. Na técnica de RT-PCR por que não utilizamos ciclos de 
temperaturas conforme no PCR tradicional?
A. Porque a enzima transcriptase reversa (RT) não consegue 
polimerizar as novas fitas de RNA com variações de 
temperaturas;
B. Porque o RNA tem a estrutura de fita simples, o que não 
necessita de desnaturação a 95°C das pontes de hidrogênio que 
contém na molécula de DNA;
C. Porque na temperatura de 95°C o RNA é estável e, com isso, 
gera estruturas terciárias que impedem a polimerização pela 
transcriptase reversa.
2. Se houver a necessidade de gerar apenas 1 tipo de cDNA pela 
transcriptase reversa, o que deve ser adicionado na reação 
que servirá como iniciador para a enzima?
A. OligodT, ou seja, oligonucleotídeos compostos de Timinas;
B. Um par de primers que servirão para direcionar a RT ao 
local correto;
C. Um único primer (iniciador) específico daquele gene-alvo.
3. Comumente é utilizada a enzima RNAse-H após o término da 
reação de RT-PCR. Qual a importância dessa proteína?
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A. Ela permite uma estabilidade dos RNAs extraídos e 
adicionados na reação;
B. A RNAse-H auxilia a Transcriptase reversa na polimerização 
de uma fita de DNA complementar;
C. Após terminar a reação, a RNAse-H degrada a fita de RNA do 
híbrido RNA-cDNA, facilitando a reação de PCR subsequente.
4. Em qual dos exemplos patológicos abaixo a técnica de RT-PCR 
é indicada?
A. Para detectar mutações nos genes relacionados a origem de 
cânceres;
B. Para analisar se um vírus de DNA está infectando um 
organismo;
C. Para analisar se um vírus de RNA está infectando um 
organismo.
5. Se em um determinado projeto o objetivo é analisar a 
expressão de genes ribossomais, por exemplo, qual reagente 
não deve ser adicionado a reação que impediria a análise 
correta?
A. OlidodT;
B. Randon primers;
C. Nucleotídeos livres (A, T, C, G).
PÓS TESTE
1. A técnica de RT-PCR, uma variação da PCR, tem suas 
características distintas, principalmente na molécula 
inicial molde.Assinale a alternativa correta.
A. A RT-PCR consegue identificar de maneira quantitativa 
moléculas de DNA relacionadas a genes;
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B. A partir de um RNA mensageiro, há a amplificação pela DNA 
polimerase dessa sequência, indicando a expressão do gene;
C. A utilização da enzima transcriptase reversa permite 
transformar o RNA em um cDNA complementar, prosseguindo com a 
reação da PCR.
2. Com a técnica de RT-PCR, qual é a importância da utilização 
de oligonucleotídeos compostos de aproximadamente 18 a 20 
timinas (oligo-dT)?
A. Como todas as moléculas de RNA são constituídas de 
adeninas, a utilização dos oligo-dT é crucial para a 
amplificação dos RNAs;
B. A utilização dos oligo-dT serve para selecionar apenas os 
RNAs mensageiros, uma vez que eles têm uma cauda poli-A, ou 
seja, várias adeninas no final da molécula, servindo para a 
estabilidade dos RNAm;
C. Como a transcriptase reversa apresenta a função de 
polimerização a partir de moléculas molde de DNA, sua 
utilização na variação da técnica de PCR torna-se muito 
versátil a partir do oligo-dT.
3. Considerando-se as bases teóricas da técnica de RT-PCR, 
analise as seguintes afirmações:
I - A RT-PCR resulta na síntese de cDNA a partir de RNA.
II - A RT-PCR convencional utiliza moléculas fluorescentes.
III - Na reação de síntese de cDNA, são realizados 
aproximadamente 20 ciclos com temperaturas diferentes.
Assinale a alternativa que apresenta as afirmações que estão 
corretas.
A. I e II;
B. Apenas II;
C. Apenas I.
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4. Qual material genético deve ser adicionado em uma reação de 
RT-PCR?
A. DNA;
B. RNA;
C. DNA e RNA.
5. Na reação de síntese de cDNA pela enzima RT, inicialmente é 
necessário aquecer os tubos com os RNAs, a água e o oligo-
dT a 70 °C. Essa etapa é essencial para permitir a reação 
subsequente.Nesse contexto, assinale a alternativa correta.
A. A enzima RT tem sua temperatura ótima a 70 °C para 
amplificação dos RNAs mensageiros;
B. Ocorre a separação entre os RNAs mensageiros e os demais, 
como principalmente os ribossomais e os transportadores, 
aumentando a especificidade da transcriptase reversa;
C. Essa temperatura possibilita que as estruturas 
tridimensionais intramoleculares nos RNAs sejam desfeitas, 
permitindo a ligação dos oligo-dT.