aula soro 16 set 2024

Prévia do material em texto

Testes 
sorológicos na 
hemoterapia
Laís Garcia
Biomédica- CRBm 560
Especialista em Hematologia e Hemoterapia (FEEVALE)
Proficiência Técnica em Imuno-hematologia (ABHH)
Especialista em Banco de Sangue (ABBIOM)
Mestre em Ciências Médicas (UFRGS)
Serviço de Hemoterapia- Imuno-hematologia (HCPA)
Sorologia
Testes sorológicos na hemoterapia
Objetivo:
Através de testes laboratoriais disponibilizar para
comunidade componentes sanguíneos com qualidade,
livres de agentes infecciosos.
Principais Doenças Transmitidas 
pelo Sangue 
Doenças causadas por vírus: hepatites B e C, retroviroses 
(HIV e HTLV), citomegalovírus. 
Doenças causadas por bactérias: sífilis 
Doenças causadas por protozoários: Doença de Chagas, 
malária
Características das Doenças 
Transmissíveis
Muitos pessoas descobrem que possuem estas 
patologias somente após a doação de sangue. Ex: 
hepatite C. 
As doenças transmitidas através do sangue são graves e 
podem ser até mesmo fatais para os receptores. 
A maioria dessas doenças, são muitas vezes 
assintomáticas nos doadores.
⮚Segundo Portaria nº5:
• O sangue total e seus componentes não podem ser
transfundidos antes da obtenção de resultados finais não
reagentes, nos testes de detecção para:
✔Hepatite B;
✔Hepatite C;
✔HIV;
✔Doença de Chagas;
✔Sífilis;
✔HTLV-I e HTLV-II
Legislação
• § 1º Os exames de que trata o “caput” devem ser feitos em 
amostra colhida no ato da doação. 
• § 2º Os exames serão realizados em laboratórios específicos para 
triagem laboratorial de doadores de sangue, com conjuntos 
diagnósticos (kits) próprios para esta finalidade, registrados na 
ANVISA. 
• § 3º Fica vedada a realização de exames sorológicos em pool de 
amostras de sangue. 
Até 2013: 
✔Pesquisa de antígenos: HBV, 
HCV e HIV
✔ Pesquisa de anticorpos: HBV, 
HCV, HIV, Chagas, sífilis e 
HTLV I//II
⮚A partir de 2014:
• Detecção de ácido nucleico – NAT
✔ HIV;
✔HCV;
✔HBV;
É o intervalo de tempo entre a
infecção e a detecção de
anticorpos no sangue.
O que é janela imunológica?
TESTES FEITOS NA 
JANELA IMUNOLÓGICA: 
POSSÍVEL FALSO-
NEGATIVO
Janela imunológica
Janela imunológica
VÍRUS ELISA NAT
HIV 14-22 8-10
HCV 70-80 7-12
HBV
-
Anti-HBc: 60
Anti-HBsAg: 38
10
JANELA IMUNOLÓGICA (DIAS)
Testes para detecção de 
hepatite B
I - detecção do antígeno de 
superfície do vírus da hepatite B 
(HBV) - HBsAg;
Método: eletroquimioluminescência
(Elecsys HBsAg II )
Eletroquimioluminescência
Utiliza a emissão de luz através da aplicação de potenciais de 
oxidação ou redução a um eletrodo imerso em soluções que 
emitem radiação (em geral compostos de rutênio). 
Dentre os métodos automatizados mais utilizados encontra-se o 
Elecsys da Roche Diagnóstica que utiliza micropartículas 
revestidas de estreptavidina, anticorpo monoclonal específico 
biotinilado e um anticorpo monoclonal específico para cada 
analito. 
Essa mistura é fixada magneticamente na superfície do eletrodo 
e o que não se fixar é removido. Por fim, há uma aplicação de 
corrente elétrica no eletrodo que induz uma emissão 
quimioluminescente, medida por um fotomultiplicador. 
https://www.youtube.com/watch?v=5I6-sW0igyU
Eletroquimioluminescência
Testes para detecção de 
hepatite B
Princípio do sanduíche. Duração total do ensaio: 18 minutos.
 1ª incubação: 50 µL de amostra, dois anticorpos monoclonais 
anti-HBsAg biotinilados e uma mistura de anticorpo 
monoclonal anti-HBsAg e anticorpos policlonais anti-HBsAg 
marcados com um complexo de rutênio)formam um complexo 
sanduíche. 
2ª incubação: Após a adição das micropartículas revestidas 
com estreptavidina, o complexo liga-se aofase sólida via 
interação de biotina e estreptavidina. A mistura de reação é 
aspirada para a célula de medição onde as micropartículas são 
magneticamentecapturado na superfície do eletrodo. As 
substâncias não ligadas são então removidas com ProCell M.A 
aplicação de uma voltagem ao eletrodo induz a emissão 
quimioluminescente que é medida por umfotomultiplicador
Testes para detecção de 
hepatite B
A detecção de HBsAg em soro ou plasma humano indica 
infecção pelo vírus da hepatite B. 
O HBsAg é o primeiro marcador imunológico a aparecer na 
infecção aguda por hepatite B 
 Geralmente está presente alguns dias ou semanas antes do 
início dos sintomas clínicos.
O HBsAg é observado em pessoas com infecções agudas e 
crônicas por hepatite B.
Testes para detecção de 
hepatite B
II - detecção de anticorpos contra o 
capsídeo do HBV - antiHBc (IgG ou 
IgG + IgM); (Ac contra o core)
Método: eletroquimioluminescência
(Elecsys HBsAg II )
Testes para detecção de 
hepatite B
•Durante uma infecção por HBV, geralmente são produzidos 
anticorpos para HBcAg, que geralmente persistem por toda a vida. 
•O anti-HBc aparece logo após o início da infecção pelo HBV e 
geralmente pode ser detectado no soro logo após o aparecimento do 
HBsAg. 
•O anti-HBc persiste em pessoas que se recuperaram da infecção 
pelo HBV e em portadores inativos. Portanto, eles são um indicador 
de infecção por HBV existente ou passada. 
•Em casos raros, a infecção por HBV também pode seguir seu curso 
sem o aparecimento de anti-HBc imunologicamente detectável 
(geralmente em pacientes imunossuprimidos). 
Testes para detecção de 
hepatite B
• O anti-HBc não é produzido após a vacinação. 
• Devido à persistência do anti-HBc após a infecção pelo HBV, a 
triagem para anti-HBc pode ser usada para identificar indivíduos 
previamente infectados.
• A determinação de anti-HBc em associação com outros testes de 
hepatite B permite o diagnóstico e monitoramento de infecções por 
HBV. 
• Na ausência de outros marcadores de hepatite B (pessoas HBsAg-
negativas), o anti-HBc pode ser a única indicação de uma infecção 
por HBV existente.
Testes para detecção de 
hepatite B
III - detecção de ácido nucleico 
(NAT) do HBV.
Testes para detecção de 
hepatite B
Interpretação dos testes 
sorológicos na hepatite B
Testes para detecção de 
hepatite C
I - detecção do anticorpo contra o 
vírus da hepatite C (HCV) ou 
detecção combinada de anticorpo + 
antígeno do HCV; 
Método: eletroquimioluminescência
Testes para detecção de 
hepatite C
O ensaio Elecsys Anti-HCV II é um teste de 
diagnóstico in vitro para a detecção qualitativa de 
anticorpos contra o vírus da hepatite C (HCV) em soro 
e plasma humanos.
Os testes de anticorpos anti-HCV são usados sozinhos 
ou em combinação com outros testes (por exemplo, 
HCV RNA) para detectar uma infecção por HCV e para 
identificar sangue e hemoderivados de indivíduos 
infectados com HCV. 
Testes para detecção de 
hepatite C
Princípio do sanduíche. Duração total do ensaio: 18 minutos
Testes para detecção de 
hepatite C
II - detecção de ácido nucleico 
(NAT) do HCV.
Testes para detecção de 
HIV
I - detecção de anticorpo contra o 
HIV ou detecção combinada do 
anticorpo contra o HIV + antígeno 
p24 do HIV; 
Método: eletroquimioluminescência
Testes para detecção de 
HIV
Princípio do sanduíche. Duração total do ensaio: 27 minutos. 
Determinação qualitativa do antígeno p24 do HIV-1 e dos anticorpos contra 
HIV-1 e HIV-2
Testes para detecção de 
HIV
•O antígeno HIV p24 em amostras de sangue de pacientes 
recentemente infectados pode ser detectado em 2 a 3 semanas 
após a infecção.
• Os anticorpos anti-HIV são detectáveis no soro cerca de 
4 semanas após a infecção. 
•A detecção combinada de HIV p24 antígeno e anticorpos anti-
HIV em ensaios de triagem de HIV de 4ª geração leva a uma 
sensibilidade aprimorada e, portanto, a uma janela de 
diagnóstico mais curta em comparação com ensaios anti-HIV 
tradicionais. 
Testes para detecção de HIV
• Com o ensaio Elecsys HIV combi PT, o antígeno HIV-1 p24 e 
anticorpos para O HIV-1 e o HIV-2 podem ser detectados 
simultaneamente em uma determinação. 
• O ensaio usa antígenos recombinantes derivados da região env epol do HIV-1 (incluindo o grupo O) e do HIV-2 para determinar os 
anticorpos específicos do HIV. 
• Para a detecção de anticorpos monoclonais específicos do 
antígeno p24 do HIV-1, são usados. 
Testes para detecção de 
HIV
II - detecção de ácido nucleico 
(NAT) do HIV.
Testes para detecção de 
Doença de Chagas
-Detecção de anticorpo anti-T cruzi 
por método de ensaio 
imunoenzimático (EIE) ou 
quimioiluminescência (QLM). 
-Método: eletroquimioluminescência
Testes para detecção de 
Doença de Chagas
-Princípio do sanduíche. Duração total do ensaio: 18 minutos
Testes para detecção de 
Doença de Chagas
A doença de Chagas é causada pelo parasita protozoário flagelado 
Trypanosoma cruzi (T. cruzi).
Sorologia positiva é considerada um sinal de infecção ativa por T. 
cruzi ou exposição passada.
O ensaio Elecsys® Chagas usa antígenos recombinantes para a 
determinação de anticorpos para T. cruzi.
A determinação de anticorpos específicos para T. cruzi é usada 
para identificar sangue de indivíduos infectados com T. cruzi. 
Testes para detecção de 
sífilis
-Detecção de anticorpo anti-treponêmico ou 
não-treponêmico.
-O teste VDRL é capaz de detectar anticorpos inespecíficos ou 
reaginas, presentes no soro de pacientes com infecção sifilítica, o que 
permite seu emprego em larga escala como prova de triagem 
sorológica para sífilis. 
- Princípio: As reaginas, quando presentes na amostra, reagem com as 
partículas de colesterol revestidas com cardiolipina e lecitina 
provocando uma floculação, visível somente ao microscópio.
Testes para detecção de 
sífilis
-O VDRL utilizado por muitos anos como diagnóstico de sífilis, é 
um teste não treponêmico, que, apesar de ter uma sensibilidade 
elevada, apresenta uma baixa especificidade, com resultados 
falso-positivos relacionados a vários interferentes. 
-A diferença principal é que os testes não treponêmicos detectam 
anticorpos que não são específicos contra Treponema pallidum e 
os testes treponêmicos detectam anticorpos específicos para 
antígenos de T. pallidum.
-Efeito pro-zona: diluição
Resultados falso-positivos nos testes: Em portadores de lúpus 
eritematoso sistêmico; Na síndrome antifosfolipídica e em outras 
colagenoses; Na hepatite crônica; Em usuários de drogas ilícitas 
injetáveis; Na hanseníase; Na malária. 
Resultados falso-positivos podem também ocorrer transitoriamente: 
Em algumas infecções; Após vacinações; Uso concomitante de 
medicamentos; Após transfusões de hemoderivados; Na gestação 
e em idosos. 
Testes para detecção de 
HTLV I/II
-Detecção de anticorpo contra o HTLV I/II 
(vírus T- linfotrópico humano)
 
-Método: eletroquimioluminescência
Testes para detecção de 
HTLV I/II
-Princípio do sanduíche. Duração total do ensaio: 18 minutos
Testes para detecção de 
HTLV I/II
Os vírus T-linfotrópico humano (HTLV) tipo I 
e II são dois retrovírus.
O HTLV é transmitido de mãe para filho, 
entre consumidores de droga por via 
intravenosa através da partilha de agulhas, 
por relações hetero ou homossexuais e por 
produtos derivados do sangue 
contaminados.
Testes Complementares X 
Hemovigilância
Quando os testes de triagem forem reagentes em um doador de 
sangue que em doações prévias apresentava sorologia não reagente 
(SOROCONVERSÃO), o serviço deve adotar procedimentos de 
retrovigilância, conforme regulamento técnico e demais normas 
definidas pela ANVISA.
1) HBsAg: teste de neutralização, ou segundo teste com reagente de 
outra origem ou de outro fabricante, ou teste de ácido nucléico do 
HBV;
2) anti-HBc: segundo teste com reagente de outra origem ou de outro 
fabricante; 
3) anti-HCV: segundo teste com reagente de outra origem ou de outro 
fabricante ou de outra metodologia, ou teste de ácido nucléico do 
HCV ou teste com reagente que detecte de maneira combinada ag/ac 
do HCV;
4) anti-HIV: segundo teste com reagente de outra origem ou de outro 
fabricante ou de outra metodologia, ou teste de ácido nucléico do HIV.
Testes Complementares 
X Hemovigilância
Testes Complementares 
X Hemovigilância
• Anti-HTLV: segundo teste com reagente de outra origem ou de 
outro fabricante ou de outra metodologia, ou teste de ácido 
nucléico do HTLV I/II;
 
• Chagas: segundo teste com reagente de outra origem ou de outro 
fabricante ou de outra metodologia.;
• Sífilis: teste de detecção de anticorpo treponêmico, se o mesmo 
não foi realizado como teste inicial.
Testes Complementares 
X Hemovigilância
Caso o laboratório que realizou os testes de triagem não realize os 
testes de confirmação de resultados iniciais, a mesma amostra deve 
ser encaminhada a outro laboratório no prazo de 10 dias úteis para a 
sua realização. 
Neste caso, o laboratório que realizar os testes de confirmação de 
resultado deve remeter o resultado dos exames ao serviço de 
hemoterapia no prazo máximo de 30 dias.
Plasmateca ou Soroteca
Art. 140. Pelo menos durante os 6 (seis) próximos meses após a 
doação, será conservada (plasmateca ou soroteca) uma alíquota da 
amostra de plasma ou soro de cada doação de sangue em 
temperatura igual ou inferior a -20° C (vinte graus Celsius negativos). 
Controle de qualidade dos 
reagentes
Controle antes da aquisição Anexo VIII 
Art. 2º Os kits de conjuntos diagnósticos serão aprovados antes da 
aquisição ou do início de utilização. 
§ 1º Durante a avaliação será utilizado, no mínimo, um lote do 
reagente em teste. 
§ 2º Serão testados os equipamentos e software, verificando se 
apresentam segurança em todo o processo. 
§ 3º Serão utilizadas amostras de sangue com resultados conhecidos 
e caracterizadas laboratorialmente ou painéis comerciais. 
§ 4º Para a aprovação dos conjuntos diagnósticos serão avaliados: I - 
a sensibilidade, que deverá ter valor mínimo de 100%, não sendo 
aceito nenhum falso negativo; e II - a especificidade, que deverá ser 
acima de 99%.
Controle de qualidade dos 
reagentes
Controle lote a lote/remessa - Anexo VIII 
§ 8º No controle de lotes e remessas serão utilizadas amostras com 
resultados conhecidos e caracterizados laboratorialmente ou painéis 
comerciais.
Controle de qualidade interno
• Controle de qualidade interno: Baseia-se na utilização de uma 
alíquota de soro ou plasma com perfil sorológico específico para 
cada marcador sorológico ou multiparamétrico. São amostras de 
doadores ou pacientes bem caracterizadas, incluindo a realização 
dos testes confirmatórios.
• O CQI é processado juntamente com os controles do fabricante e 
com as amostras da rotina, permitindo verificar se o teste 
laboratorial foi executado em condições satisfatórias. Serve para 
validar as rotinas, juntamente com os controles do fabricante.
Controle de Qualidade Externo
Questões
1- Após a obrigatoriedade da testagem de Hepatite C em bancos de sangue, inclusive com o teste 
de HCV-RNA, a principal forma de contaminação é através do uso de drogas endovenosas. Sobre a 
triagem de Hepatite C, assinale a alternativa incorreta:
a) Após exposição ao vírus da hepatite C, o HCV RNA não poderá ser identificado no soro antes da 
presença do anti-HCV;
b) A presença de HCV-RNA pode ocorrer cerca de duas semanas após a exposição ao agente 
infeccioso;
c) O nível de HCV-RNA aumenta rapidamente durante as primeiras semanas, atingindo seus níveis 
máximos imediatamente antes do pico dos níveis séricos de aminotransferases e pode coincidir com 
o início dos sintomas;
d) Define-se como Hepatite C aguda: anti-HCV não reagente e detecção de HCV-RNA por até 90 
dias após o início dos sintomas ou data de exposição.
Questões
2- O VDRL (Venereal Disease Research Laboratory) é um dos testes realizados no diagnóstico de 
sífilis. Assinale a alternativa que apresenta o respectivo método de realização e uma limitação 
importante da técnica, respectivamente:
a) Reação de floculação e efeito prozona;
b) Reação de quimioluminescência e efeito prozona;
c)Reação de hemaglutinação e anticorpos heterofilos;
d) Reação de turbidimetria e anticorpos heterofilos.
Questões
3) Assinale a alternativa incorreta: de acordo com a Portaria de Consolidação no5, de 28/09/17, em 
áreas endêmicas de malária, considera-se inapto a doar sangue:
a) Pessoa que tenha tido malária nos 12 meses que antecedem a doação;
b) Pessoa com febre ou suspeita de malária nos últimos 30 dias;
c) Pessoa que tenha se deslocado ou procedente de área de alto risco (IPA ≥50,0 casos/1.000 
habitantes) há menos de 30 dias;
d) Pessoa com anti-HBs reagente.
Questões
4) De acordo com a Portaria de Consolidação no5, de 28/09/17, assinale a alternativa incorreta:
a) As bolsas cujas amostras individuais forem positivas ou inconclusivas nos testes NAT ou que 
tenham resultados discrepantes com os testes sorológicos serão descartadas, e o doador será 
convocado para repetição dos testes em nova amostra
e/ou orientação;
b) O teste para doença de Chagas será por meio da detecção de anticorpo anti-T cruzi apenas por 
método de quimioiluminescência (QLM);
c) Somente podem ser liberadas as bolsas com resultados não reagentes/negativos tanto para os 
testes sorológicos quanto para os testes de detecção de ácido nucleico;
d) O teste para sífilis será por intermédio da detecção de anticorpo anti-treponêmico ou não-
treponêmico.
Questões
5) Sobre as exigências para um serviço de hemoterapia, assinale a alternativa incorreta:
a) Os laboratórios de triagem de doadores de sangue para infecções passíveis de transmissão 
sanguínea trabalharão com os tubos primários, colhidos diretamente do doador, até a fase de 
pipetagem das amostras nas placas ou nos tubos das estantes para a reação;
b) O serviço de hemoterapia que realiza exames para detecção de infecções transmissíveis pelo 
sangue para qualificação no sangue do doador, participará regularmente de, pelo menos, um 
programa de controle de qualidade externo (proficiência), realizará controle de qualidade interno e 
disporá de sistema de garantia da qualidade na realização dos testes;
c) Sempre que a sorologia para CMV for realizada, o resultado constará do rótulo das bolsas de 
componentes sanguíneos;
d) Nas regiões endêmicas de malária, com transmissão ativa, independente da incidência parasitária 
da doença, não será realizado teste para detecção do plasmódio ou de antígenos plasmodiais.
Questões
6) Os testes imunológicos que detectam anticorpos em amostras de sangue total, soro ou plasma 
são os mais comumente utilizados para auxiliar no diagnóstico da sífilis e podem ser classificados 
em testes treponêmicos e testes não treponêmicos. Marque a afirmativa incorreta a respeito dessas 
técnicas:
a) Em aproximadamente 85% dos casos, os testes não treponêmicos permanecem reagentes 
durante toda a vida das pessoas que contraem sífilis, independentemente do tratamento;
b) Os testes não treponêmicos detectam anticorpos IgM e IgG contra o material lipídico liberado 
pelas células danificadas em decorrência da sífilis;
c) Testes treponêmicos utilizam lisados de T.pallidum ou antígenos recombinantes e detectam 
anticorpos específicos (geralmente IgG e IgM) contra componentes celulares dos treponemas;
d) Anticorpos anti-cardiolipina são exclusivos para a sífilis e, portanto, testes não treponêmicos são 
altamente específicos e sensíveis para o diagnóstico da doença.
Questões
7) O fenômeno prozona ocorre nos pacientes com sífilis quando há um desequilíbrio entre o 
quantitativo de antígenos e anticorpos na reação. Esse efeito ocorre devido a:
a) Reação desproporcional entre as quantidades de antígenos e anticorpos presentes na reação 
treponêmica gerando resultados falso-positivos;
b) Reação desproporcional entre as quantidades de antígenos e anticorpos presentes na reação não 
treponêmica gerando resultados falso-negativos;
c) Sífilis latente ou neurossífilis;
d) Hemólise, e portanto, é mandatória a coleta de uma segunda amostra, para confirmar o resultado.
Questões
8) Controle de Qualidade no laboratório tem a finalidade de:
a) Controlar e identificar os possíveis problemas durante a realização da rotina laboratorial;
b) Aplicar um sistema que garanta o melhor desempenho da rotina realizada no laboratório;
c) Garantir o melhor desempenho nas fases pré e pós- analítica dentro do laboratório;
d) Todas alternativas estão corretas.
Questões
9) Doador apresentou positividade no teste e na repetição da pesquisa sorológica para HIV 1. Qual 
conduta a ser tomada pelo banco de sangue em relação a unidade de sangue doada e ao doador?
 a) Liberar os hemocomponentes, não é necessário avisar o doador. 
b) O hemocomponente será liberado, mas não é necessário avisar o doador. 
c) O hemocomponente deverá ser liberado e o doador deverá ser comunicado.
 d) Desprezar os hemocomponentes e pedir para que o doador doe outra bolsa de sangue. 
e) Desprezar todos os hemocomponentes, comunicar o doador e encaminhá-lo a um serviço de 
infectologia. 
Questões
10) Exames são realizados em laboratórios específicos para triagem laboratorial de doadores de 
sangue com conjuntos diagnósticos (kits) próprios para esta finalidade. Com relação a testes de 
pesquisa de ácido nucléicos (NAT) para detecção de infecções transmissíveis pelo sangue, 
podemos verificar os vírus: 
a) HBV, HIV e HCV. 
b) CMV, EBV e HIV. 
c) HTLV, HIV e CMV. 
d) HIV, EBV e HCV. 
e) HBV, HCV e EBV. 
LOGARCIA@HCPA.EDU.BR
	Slide 1: Testes sorológicos na hemoterapia
	Slide 2
	Slide 3: Sorologia
	Slide 4: Testes sorológicos na hemoterapia
	Slide 5: Principais Doenças Transmitidas pelo Sangue 
	Slide 6: Características das Doenças Transmissíveis
	Slide 7
	Slide 8: Legislação
	Slide 9
	Slide 10
	Slide 11
	Slide 12
	Slide 13
	Slide 14
	Slide 15
	Slide 16
	Slide 17
	Slide 18
	Slide 19
	Slide 20
	Slide 21: Testes para detecção de hepatite B 
	Slide 22
	Slide 23
	Slide 24: Interpretação dos testes sorológicos na hepatite B
	Slide 25
	Slide 26
	Slide 27
	Slide 28
	Slide 29
	Slide 30
	Slide 31
	Slide 32: Testes para detecção de HIV 
	Slide 33
	Slide 34
	Slide 35
	Slide 36
	Slide 37
	Slide 38
	Slide 39
	Slide 40
	Slide 41
	Slide 42
	Slide 43
	Slide 44: Testes Complementares X Hemovigilância 
	Slide 45
	Slide 46: Testes Complementares X Hemovigilância 
	Slide 47: Testes Complementares X Hemovigilância 
	Slide 48: Plasmateca ou Soroteca
	Slide 49: Controle de qualidade dos reagentes
	Slide 50: Controle de qualidade dos reagentes
	Slide 51: Controle de qualidade interno
	Slide 52: Controle de Qualidade Externo 
	Slide 53: Questões
	Slide 54: Questões
	Slide 55: Questões
	Slide 56: Questões
	Slide 57: Questões
	Slide 58: Questões
	Slide 59: Questões
	Slide 60: Questões
	Slide 61: Questões
	Slide 62: Questões
	Slide 63
	Slide 64