Criopreservação Sêmen garanhões

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CRIOPRESERVAÇÃO DO SÊMEN 
EQUiNO
Prof. Msc. Heder Nunes Ferreira
 OBJETIVOS:
• Seguro para proprietário;
•Seguro genético para a raça;
•Ganho genético para a raça (Importação);
•Contornar dificuldades de refrigeração 
e transporte.
 LIMITAÇÕES:
- Variações:
. Raça 
. Garanhão 
. Ejaculado
- Custos e Manejo : Necessidade de IA Próximo da 
ovulação
 Etapas da Criopreservação:
1) Colheita do Sêmen;
2) Avaliação;
3) Centrifugação;
4) Ressuspenção;
5) Identificação, Envase, Vedação;
6) Técnica de Congelação;
7) Armazenamento;
8) Descongelação;
9) Avaliação Pós Descongelação.
COLHEITA DO SÊMEN
Prepararação do Laboratório
Análises do Ejaculado
Macroscópica e Microscópica
Processamento do ejaculado
Centrifugação- Para concentrar as células 
espermáticas
DILUIR 1:1 COM DILUENTE A BASE DE LEITE
Centrifugação
600xg
10 min
 Ressuspenção: 
• Meio de Congelação
- Aminoácidos;
- Citrato de Sódio - tampão;
- Açúcares - energia;
- Gema de ovo e ou leite – proteínas protegem do “cold shock”;
- Detergentes (oep) – facilitam interação com membrana;
- Crioprotetores
 Crioprotetores – Substâncias que promovem proteção celular
em condições de baixas temperaturas.
PENETRANTES NÃO-PENETRANTES
GLICEROL;
ETILENOGLICOL; 
DIMETILSULFÓXIDO 
(DMSO)
AMIDAS:
Acetamidas
Formamidas
Lactamidas
AÇUCARES
Frutose;
Lactose;
Rafinose;
Trealose;
LIPOPROTEÍNAS
METILCELULOSE
Volume por palheta: 0,5ml
Volume de diluente: 48 x 0.5 ml = 24 ml
COMPLETAR O VOLUME FINAL ATÉ 24 ML
CÁLCULO DO NÚMERO DE PALHETAS
EXEMPLO:
Volume: 60 ml Motilidade:80%Concentração:100x10
6
sptz/ml
Sptz viáveis / ejaculado: 60 X 100x10
6
X 80% = 4.800x10
6
Número de 
palhetas:
4.800x10
6
100x10
6
= 48 
palhetas
Identificar,
envasar e 
lacrar
Identificar,
envasar e 
lacrar
Técnicas de Criopreservação:
• Ativa
Técnicas de Criopreservação:
• Ativa
Técnicas de Criopreservação:
• Passiva
3-6cm N2 – 20 min.
Criopreservação em vapor de 
Nitrogênio
Curva De Criopreservação
Armazenamento
- Palhetas de 0,5 ml
. 38
oC / 40” (700OC/min.)
. 46
oC / 20”
. 65
oC / 10”
. 75
oC / 7” (4.000OC/min.)
- Mini palhetas de 0,25 ml
. 38
oC / 30”
. 46
oC / 15”
. 65
oC / 07”
- Macrotubo 4,0 ml
. 50
oC / 45” 
DESCONGELAÇÃODescongelação
Avaliação Sêmen Descongelado:
•MOTILIDADE TOTAL ≥ 40 %
•MOTILIDADE PROGRESSIVA > 20%
•INTEGRIDADE MEMBRANA SIMILAR 
A MOTILIDADE TOTAL
•MORFOLOGIA ESPERMÁTICA < 30%
DÚVIDAS
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O final de uma técnica bem 
sucedida resulta no inicio da vida