POP Gi e Ana original

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FUNDAMENTO	 
Os triglicerídeos da amostra são hidrolisados em glicerol e ácidos graxos pela ação da enzima lipase. O glicerol produzido é fosforilado pelo ATP para formar glicerol-3-fosfato (G-3-P) em uma reação catalisada pela glicerol quinase (GK). O G-3-P é então oxidado a diidroxiacetona fosfato (DHAP) e peróxido de hidrogênio, catalisado pela GPO (glicerol fosfato oxidase). O peróxido de hidrogênio reage com 4-aminoantipirina e 35 dicloro-2-hidroxibenzeno, na presença de peroxidase, formando um complexo colorido que pode ser medido a 500nm ± 20nm, diretamente proporcional à concentração de triglicerídeos.
 Lipase
Triglicéride + H₂O	> Glicerol + 3FFA
 GK
Glicerol + ATP-------------> G-3-P + ADP
 GPO
G-3-P + O₂ -------------> DHAP + H₂O₂
POD
4 AAP+4fenol-----------> Quinoneimina+H₂O
APLICAÇÃO CLÍNICA	 
Este método é destinado à determinação quantitativa de triglicerídeos em soro e plasma humano para diagnóstico “in vitro”.
AMOSTRA	 
Preparo do Paciente
Colher sangue pela manhã após jejum de 12 horas, essa orientação pode ser ajustada conforme orientação médica.
Amostras utilizadas
Soro ou Plasma (EDTA, Heparina, Oxalato ou Fluoreto).
Estabilidade e armazenamento da amostra
Os triglicerídeos no soro ou plasma permanecem estáveis por até 5 dias, desde que armazenados entre 2 e 8°C.
Volume ideal utilizado para a análise
Conforme programação do aparelho. 
Volume mínimo utilizado para análise 
Conforme programação do aparelho, em geral, 1 mL.
Critérios para rejeição da amostra
Não utilizar amostras hemolisadas.
Não conservar em temperatura ambiente (>25°C).
REAGENTE UTILIZADO			 
TRIGLICÉRIDES - PP	CAT. 459	MS 80022230062
GOLD ANALISA DIAGNÓSTICA LTDA CNPJ - 03.142.794/0001-16
Av. Nossa Senhora de Fátima, 2363
Laboratório Biovision
Procedimento Operacional Padrão
DOSAGEM DE TRIGLICERÍDES
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POP BIO 268 Revisão: 10/2024
Belo Horizonte – MG – Brasil
Farmacêutico Responsável: Homero Jackson de Jesus Lopes - CRF- MG -2010
Componentes do kit
Conservar entre 2-8C
1. Reagente de Cor: Pipes 45 mmol/L, 4-clorofenol 6 mmol/L, cloreto de magnésio 5 mmol/L, lipase superior a 100 U/mL, glicerol quinase (GK) superior a 1,5 U/mL, glicerol-3-fosfato oxidase (G3P) superior a 4 U/mL, peroxidase (POP) superior a 0,8 U/mL, 4-aminoantipirina (AAP) 0,75 mmol/L, ATP 0,9 mmol/L e pH ajustado para 7,0.
2. Padrão: Azida sódica 0,09% p/v, glicerol equivalente a concentração de triglicérides de 200mg/dL.
Estabilidade
Reagentes fechados permanecem estáveis até a data de validade indicada no rótulo. Uma vez colocados no analisador (em compartimento refrigerado), mantêm sua estabilidade por aproximadamente 30 dias. Durante o manuseio, podem ocorrer contaminações químicas ou microbianas, comprometendo a estabilidade e a qualidade dos reagentes.
Sinais de Deterioração dos Reagentes
1. Presença de turvação visível.
2. A absorbância do branco ultrapassar 0,150 a 500 nm.
3. Quando houver dificuldade em alcançar os valores esperados para o soro controle fresco.
Precauções e Cuidados Especiais
1. Nunca realizar pipetagem com a boca.
2. Evitar contato com pele e roupas. Em caso de contato com os olhos, lave imediatamente com bastante água e procure assistência médica.
3. O reagente contém azida sódica (0,01%) como conservante, que pode reagir com metais como cobre e chumbo, formando compostos potencialmente explosivos. Por isso, ao descartá-lo, adicione grande quantidade de água para diluir.
4. Adotar as medidas usuais de segurança ao lidar com reagentes e amostras biológicas.
5. Sugerimos seguir as Boas Práticas em Laboratórios Clínicos para a realização do teste. Conforme as normas de biossegurança, todas as amostras devem ser tratadas como materiais potencialmente infecciosos.
EQUIPAMENTOS	 
Procedimento Técnico Manual
· Espectofotômetro UV (leitura entre 490 e 520 nm).
· Banho-maria ou termostatizador.
· Tubos e Pipetas.
· Cronômetro.
Procedimento em Analisadores Semi-automáticos
Este kit é compatível com a maioria dos analisadores automáticos. A aplicação em sistema automatizado deve seguir as orientações do manual do equipamento e as instruções de uso do reagente. A calibração com o padrão aquoso pode ocasionar desvios em alguns equipamentos. Nesses casos, é recomendada a utilização de um calibrador proteico — Calibrador (Cat. 410) da Gold Analisa.
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Influências Pré-Analíticas
Não devem ser utilizados soros ictéricos. A punção venosa deve ser realizada após 15 minutos do paciente assentado. Se esse procedimento não for realizado, o resultado pode apresentar até 10% de elevação. O torniquete deve ser aplicado por período inferior a 1 minuto ou pode ocorrer uma falsa elevação do triglicérides. Pode ocorrer uma variabilidade biológica de até 20% em medições diferentes devido a ingestão de álcool, exercícios e peso corporal.
Não praticar exercício físico até 24 horas antes do Teste. Não ingerir álcool até 72 horas antes do teste. Jejum inferior a 12 horas leva a uma elevação do triglicérides, pois os quilomicrons ainda não foram metabolizados. Jejum superior a 14 horas leva a uma elevação na concentração de triglicérides devido a lipólise, que causa a liberação de ácidos graxos e glicerol no plasma.
Interferências
Bilirrubina até 2,5 mg/dL, ácido ascórbico até 5 mg/dL e hemoglobina até 1000 mg/dL não causam interferências significativas nos resultados. Não utilize tampas de borracha que contenham glicerol. Certos detergentes podem interferir na reação, gerando precipitado ou coloração vermelha. A vidraria deve ser enxaguada repetidamente. Algumas medicações e substâncias podem comprometer a precisão na medição de triglicerídeos.
Para amostras fortemente lipêmicas, é necessário um branco de amostra. Adicione 0,01 mL (10 μL) da amostra a 1,0 mL de solução salina, misture bem e leia a absorbância em relação à água. Subtraia este valor da absorbância do paciente para obter a leitura corrigida.
PROCEDIMENTO	 
Procedimento manual:
A - Condições de Reação
Leitura: Comprimento de onda 505nm (490 a 520nm). Temperatura: 37 °C.
Tipo de reação: Ponto Final.
B- Técnica de Análise
1- Rotule três tubos de ensaio como "Branco", "Teste" e "Padrão" e adicione as amostras correspondentes com uma pipeta.
	Tubos
	Branco
	Teste
	Padrão
	Amostra
	-
	10 L
	-
	Padrão (1)
	-
	-
	10 L
	Reagente de Cor (2)
	1000 L
	1000 L
	1000 L
2- Misture bem e incube os tubos por 10 minutos a 37 ºC.
3- Meça a absorbância do Padrão e do Teste, utilizando o tubo Branco para zerar o aparelho, em 505 nm ou com um filtro verde (490 - 520 nm).
Atenção
A coloração obtida permanece estável por até 1 hora.
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CÁLCULOS	 
Ver Linearidade.
Como a metodologia obedece a lei de Lambert-Beer, pode-se também fazer os cálculos através do Fator de Calibração (FC).
(Abs.= Absorbância) (Conc. = Concentração)
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Triglicérides da	Abs. Amostra
Conc. do padrão
Amostra (mg/dL)
=	X
Abs. Padrão
(mg/dL)
Conc. do padrão
Fator de	(mg/dL)
Calibração (FC)	=
Abs. Padrão
Triglicérides (mg/dL) = Absorbância da Amosta X FC
Exemplo com FC
Fc = 200/0,251 = 796,81
Triglicérides(mg/dL) = 796,81 x 0,265 = 211 mg/dL
Exemplo com Padrão Concentração do Padrão: 200mg/dL Absorbância da Amostra: 0,265 Absorbância do Padrão: 0,251
Triglicérides(mg/dL) = (0,265/0,251) x 200 = 211 mg/dL
Atenção
· Esta técnica de dosagem é adequada para fotômetros que requerem um volume mínimo de solução de 1000 µL ou menos para a leitura.
· O analista deve verificar se é necessário ajustar o volume de acordo com o fotômetro utilizado em seu laboratório.
· Os volumes de amostra e reagente podem ser ajustados proporcionalmente sem comprometer o desempenho do teste ou os cálculos.
· Caso os volumes sejamreduzidos, é essencial garantir que o volume mínimo exigido para leitura fotométrica seja respeitado.
RESULTADOS	 
Fator de Conversão de Unidades (mg/dL para SI) mmol/L de Triglicérides = mg/dL de Triglicérides x 0,0113
CONTROLE DA QUALIDADE	 
O laboratório clínico deve implementar um Programa de Garantia da Qualidade para garantir que todos os procedimentos sejam realizados conforme as Boas Práticas de Laboratórios Clínicos. Para controlar e verificar o desempenho dos kits, recomenda-se o uso do Soro Controle N e do Soro Controle P da Gold Analisa.
VALORES DE REFERÊNCIA	 
Adultos
Valor desejável 500 mg/dL
Crianças
Menores de 10 anos:
Valor desejável 130 mg/dL De 10 a 19 anos:
Valor desejável 130mg/dL
Esses valores servem como orientação. Recomenda-se que cada laboratório defina seus próprios intervalos de referência.
SIGNIFICADO CLÍNICO	 
O exame é útil para avaliar o metabolismo das gorduras. Os triglicerídeos fazem parte dos lipídios presentes nas lipoproteínas do soro, juntamente com o colesterol e os fosfolipídios. A Consensus Conference indicou que pessoas com níveis plasmáticos de triglicerídeos em jejum entre 250 e 500 mg/dL possuem um risco diferenciado, pois esses valores estão associados ao dobro de incidência de doenças cardiovasculares. Esses casos normalmente apresentam colesterol elevado e estão ligados a níveis altos de LDL. Em alguns pacientes, esses valores podem ser normais, mas também podem representar um risco aumentado. Se níveis elevados forem confirmados em medições sucessivas, é necessária uma investigação mais aprofundada, especialmente para pacientes com histórico familiar de doenças cardiovasculares precoces ou outros fatores de risco, como colesterol elevado, hipertensão, tabagismo, obesidade ou alguma causa secundária para o aumento de triglicerídeos. A elevação dos triglicerídeos também pode indicar dislipidemia primária ou condições secundárias, como diabetes mellitus, síndrome nefrótica, uremia e obstruções das vias biliares.
Valores elevados: Os valores elevados de triglicerídeos são mais comumente verificados em: diabetes mellitus tipo 2, síndrome metabólica, obesidade, doença hepática gordurosa não alcoólica, hipotireoidismo, doenças renais, pancreatite aguda, uso de medicamentos (como corticoides, betabloqueadores e anticoncepcionais) e consumo excessivo de álcool e distúrbios genéticos, como as hiperlipidemias familiares.
LINEARIDADE	 
Se o procedimento for realizado conforme as orientações, o teste apresenta linearidade até 1100 mg/dL. Amostras com concentrações acima de 1100 mg/dL precisam ser diluídas em solução salina 150mmol/L (0,85%), e os resultados obtidos devem ser multiplicados pelo fator de diluição correspondente.
LIMITAÇÕES DO MÉTODO	 
Os resultados devem ser interpretados em conjunto com dados da avaliação clínica e outros exames diagnósticos disponíveis.
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REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS	 
1- EBRAM PRODUTOS LABORATORIAIS LTDA. QUIMITRI - Triglicérides. Ebram, 2024.
Disponivel em: . Acesso em: out. 2024.
2- GOLD ANALISA DIAGNÓSTICA LTDA. TRIGLICÉRIDES - PP. Gold Analisa, 2022.
Disponivel em: . Acesso em: out. 2024.
3- VIDA BIOTECNOLOGIA LTDA. TRIGLICÉRIDES ENZIMÁTICO. Vida Biotecnologia, 2016.
Disponivel em: . Acesso em: out. 2024.
	
	Nome
	Assinatura
	Data
	Elaborado por:
	Ana Clara Cardoso
	
	___/___/___
	Elaborado por:
	Giovana Vicente
	
	___/___/___
	Aprovado por:
	
	
	___/___/___
	Implantado por:
	
	
	___/___/___
	Substitui POP:
	
	Revisado por:
	
	
	___/___/___
	Revisado por:
	
	
	___/___/___
	Revisado por:
	
	
	___/___/___
	Desativado por:
	
	
	___/___/___
	Razão:
Revisão: 10/2024