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Metabolismo Bacteriano METABOLISMO BACTERIANO � Conjunto altamente organizado e complexo de reações bioquímicas, catalizadas e reguladas por enzimas. � Estas reações se organizam em seqüências enzimáticas denominadas VIAS METABÓLICAS � O metabolismo celular, apesar de ser muito complexo, possui vias metabólicas centrais. Um grupo de vias metabólicas se assemelha a um mapa rodoviário: Pode haver mais de um caminho que vai de um intermediário a outro. Metabolismo Metabolismo = Catabolismo + Anabolismo . • Do seu habitat - grande diversidade de nichos onde bactérias podem ser encontradas • Dos meios de cultura laboratoriais quando se quer estudá-las em ambiente controlado De onde as bactérias captam estes elementos? • Elementos químicos como nutrientes – Fonte de carbono – Nitrogênio – H, O, S, P – Outros elementos – Água Necessidades nutricionais e meios de cultivo bacteriológicos Macronutrientes: • Carbono: Corresponde a base de todas as moléculas orgânicas. Presente na maioria das substâncias que compõem as células (aminoácidos, ácidos orgânicos, açucares, bases nitrogenadas, etc...) • As bactérias podem ser classificadas como: • Quimioautotróficas: utilizar o carbono inorgânico existente no ambiente, na forma de carbonatos ou de CO2 como única fonte de carbono. • Quimioheterotróficas: Os microrganismos que obrigatoriamente requerem uma fonte orgânica de carbono e as principais fontes, são os carboidratos. • Nitrogênio: Componente de proteínas e ácidos nucléicos, vitaminas e outros compostos celulares. • Está disponível na natureza sob a forma de gás (N2) ou na forma combinada. - Sua utilização como N2 é restrita a um grupo de bactérias cujo principal habitat é o solo. - Na forma combinada, o nitrogênio é encontrado como matéria inorgânica (NH3 , NO3 -, etc.) ou matéria orgânica: aminoácidos, purinas e pirimidinas. ENXOFRE, HIDROGÊNIO E FÓSFORO – essenciais a todos os organismos – S é necessário na biossíntese de cisteína, cistina, metionina e de vitaminas (tiamina e biotina) – P é essencial para a síntese de ácido nucléicos e ATP – sais inorgânicos (sulfatos e fosfatos) podem ser utilizados para suprir estes elementos também presentes em fontes protéicas (aa), DNA e RNA – alguns destes elementos são encontrado na água ou na atmosfera Micronutrientes • ferro, • magnésio, • manganês, • cálcio, • zinco, • potássio, • sódio, • cobre, • cloro, • cobalto, • molibdênio, • selênio e outros - sempre na forma inorgânica, fazendo parte de minerais. . • São necessários ao desenvolvimento microbiano, mas em quantidades variáveis, dependendo do elemento e do microrganismo considerados. • Funções dos micronutrientes: - Componentes de proteínas, (Ex: ferro que participa da composição de várias proteínas enzimáticas (catalizadores de reações química). - cofatores de enzimas, como o magnésio, potássio, molibdênio, etc. - Componentes de estruturas, (Ex: cálcio, presente em um dos envoltórios dos esporos) - Osmorreguladores Transferência de energia nas reações metabólicas Metabolismo Microbiano Nas reações químicas a energia é transferida entre as moléculas • O propósito das reações químicas nas células é transferir energia de uma molécula para outra e utilizar a energia armazenada para realizar trabalho. • A energia potencial armazenada nas ligações químicas de uma molécula é denominada energia livre da molécula. Transferência e armazenamento de energia nas reações biológicas: • ATP–Adenosinatrifosfato – Estoca energia das reações catabólicas e as libera quando necessário para as reações anabólicas e outros trabalhos celulares Metabolismo Bacteriano Uma vez garantidos pelo ambiente os nutrientes e as condições adequadas para assimilá-los, as bactérias vão absorvê-los e transformá-los para que cumpram suas funções básicas, quais sejam, o suprimento de energia e de matéria prima. Como matéria-prima, os nutrientes vão ser transformados em estruturas celulares ou em moléculas acessórias à sua síntese e funcionamento. Obtenção de energia • As substâncias com alto valor energético são sempre aquelas com elevado grau de redução, e grande parte das bactérias (exceção às fotossintetizantes) vai obter toda energia de que necessita por oxidação desses substratos. As substâncias preferencialmente oxidadas por microrganismos são os açúcares, seguidos de proteínas, peptídios e, mais raramente, as gorduras. • As bactérias utilizam energia para o transporte de nutrientes, o movimento dos flagelos, mas sobretudo para as biossínteses. Obtenção de energia • Em decorrência da variabilidade genética, os microorganismos apresentam uma enorme variação no tocante a vias metabólicas. • Os processos de obtenção, armazenamento e utilização de energia são organizados: - Rede complexa de reações químicas. - Alterações do meio. (Retirada de nutrientes, liberação de substâncias). - Enzimas (codificada por material genético). Fermentação: Metabolismo no qual os compostos orgânicos servem como doadores e receptores de elétrons (hidrogênio). A fermentação conduz, geralmente, à cisão parcial de moléculas de glicose (glicólise): Glicose – glicose- 6- fosfato – ácido pirúvico Dentre os vários tipos de fermentação, pode-se citar: – Fermentação homolática: produção de ácido lático como produto final. – Fermentação alcoólica: produção de álcool como produto final. – Fermentação mista: produção de álcool, ácido e gás. – Fermentação butileno-glicólica: produção do butileno glicol (não ácido) como produto final. Metabolismo - Fermentação Clostridium Piruvato Ácido acetoacético Àcido butírico Àcido fórmico Àcido láctico Acetil-coa Àcido acético CO2 + H2 Àcido misto Acetobacter Proteus Streptococcus E.coli,Shigella Acetilmetilcarbinol 2,3-butanodiol H2 Enterobacter Àcido oxalacético Àcido succínico Àcido propiônico Propionibacterium ⇨Ácido Pirúvico – fermentação ou respiração celular: - Respiração aeróbica ou anaeróbica ● Ácido lático: Streptococcus, Lactobacillus, Bacillus ● Etanol e CO2: Saccharomyces ( Levedura) ● Ácido propiônico, ácido acético, CO2 e H2: Propionibacterium ● Ácido butírico, butanol, acetona, álcool isopropílico e CO2: Clostridium ● Etanol, ácido lático, ácido succínico, ácido acético, CO2, H2: Escherichia, Salmonela ● Etanol, ácido lático, ácido fórmico, butanodiol, acetoína, CO2 e H2: Enterobacter Putrefação Decomposição de compostos nitrogenados (proteínas), utilizando-se de substância orgânica como aceptor-doador de elétrons. É um tipo de fermentação que produz produtos finais de odor desagradável: indol, escatol, ácido sulfídrico. Respiração aeróbica Decomposição microbiana de substratos cujo receptor de hidrogênio é o oxigênio. Na respiração ocorrem as seguintes etapas: a) Glicólise; b) Ciclo de Krebs; c) Cadeia transportadora de elétrons: Fosforilação oxidativa. Visão geral do metabolismo da glicose em presença de Oxigênio 32December 15 Glicólise: Quebra da glicose (açúcar de 6C) em dois açúcares de 3C Ciclo de Krebs: Série de reações bioquímicas em que grande quantidade da energia química potencial da molécula de acetilCoA é liberada passo a passo. Os derivados do ácido pirúvico são oxidados; e as coenzimas são reduzidas RESPIRAÇÃO CELULAR ▪ Respiração aeróbica: ácido pirúvico – acetil + CoA Geração de ATP • Fosforilação oxidativa Cadeia Respiratória ou de Transporte de Elétrons Seqüência de moléculas transportadoras que são capazes de oxidação e redução . Enquanto os elétrons passam pela cadeiahá uma gradual liberação de energia, que é utilizada para conduzir a geração de ATP. 37Microbiologia Industrial Metabolismo Microbiano December 15 Respiração anaeróbica Quando o oxigênio é substituído por outro receptor inorgânico de elétrons. - O aceptor final de elétrons é exógeno e inorgânico. - Na respiração anaeróbica não há ciclo de Krebs, porque, na ausência de O2, deixa de ser sintetizada uma enzima característica do ciclo. - Respiração Anaeróbica: ▪ Aceptor final de elétrons – substância inorgânica, diferente do O2 ▪ Nitrato( NO3-) – reduzido a nitrito, óxido nitroso, ou gás nitrogênio ▪ Carbonato – METANO – CH4 ▪ Sulfato – H2S Presença de Oxigênio (atmosfera) �As bactérias anaeróbias não necessitam de oxigênio, na realidade, algumas não sobrevivem em sua presença. Elas tendem a causar infecções que formam coleções purulentas (abcessos) �Supuração com odor fétido ; � Localização da infecção na proximidade da superfície mucosa ; � Tecido necrótico, gangrena; formação de pseudomembrana ; �Centenas de espécies de bactérias anaeróbias vivem normalmente e sem causar danos na pele e nas membranas mucosas (p.ex., revestimento da boca, do intestino e da vagina) �Gangrena gasosa Comparação dos processos metabólicos (vias catabólicas) GLICÓLISE FERMENTAÇÃO CICLO DE KREBS CADEIA RESPIRATÓRIA Localização Citoplasma Citoplasma Procariontes: citoplasma Eucariontes: matriz mitocondrial Procariontes: membrana celular Eucariontes: membranas internas da mitocôndria Exigência de oxigênio Anaeróbica, o oxigênio não é necessário; entretanto, não se interrompe se o O2 estiver presente Sem O2; a presença acarreta paralização Aeróbica Aeróbica Moléculas iniciadoras 1 glicose (6C) Várias moléculas de substrato entram na glicólise, produzindo 2 ácidos pirúvicos 2 ácidos pirúvicos 6 O2 Moléculas finais 2 ácidos pirúvicos (3C); 2 NADH Várias, dependendo da forma de fermentação, por exemplo, etanol, ácido lático, CO2, ácido acético 6 CO2 8 NADH 2 FADH 6 H2O Quantidades de ATP produzidas 4 ATP (saldo de 2 ATP) Várias, dependendo da forma de fermentação, geralmente 2 ou 3 ATP 2 GTP (= 2 ATP) 34 ATP 50 Nutrição e metabolismo microbiano • Condições físicas para o cultivo de bactérias • Temperatura • pH • Atmosfera gasosa • Luz 1.4. Condições Físicas (Fatores Ambientais) Temperatura - Psicrófilos - Mesófilos - Termófilos Thermus aquaticus Min. 40oC òtima:70-72oC Máxima: 79 oC Growth rate vs pH for three environmental classes of procaryotes. Most free-living bacteria grow over a pH range of about three units. Note the symmetry of the curves below and above the optimum pH for growth. 1. 3. pH pH Mínimo, Ótimo e Máximo para o crescimento de alguns procariotos Organismo pH mínimo pH ótimo pH máximo Thiobacillus thiooxidans 0.5 2.0-2.8 4.0-6.0 Sulfolobus acidocaldarius 1.0 2.0-3.0 5.0 Bacillus acidocaldarius 2.0 4.0 6.0 Zymomonas lindneri 3.5 5.5-6.0 7.5 Lactobacillus acidophilus 4.0-4.6 5.8-6.6 6.8 Staphylococcus aureus 4.2 7.0-7.5 9.3 Escherichia coli 4.4 6.0-7.0 9.0 Clostridium sporogenes 5.0-5.8 6.0-7.6 8.5-9.0 Erwinia caratovora 5.6 7.1 9.3 Pseudomonas aeruginosa 5.6 6.6-7.0 8.0 Thiobacillus novellus 5.7 7.0 9.0 Streptococcus pneumoniae 6.5 7.8 8.3 Nitrobacter sp 6.6 7.6-8.6 10.0 Meios de Cultura • Meio de cultura é uma mistura de nutrientes necessários ao crescimento microbiano. • Basicamente deve conter a fonte de energia e de todos os elementos imprescindíveis à vida das células. • A formulação de um meio de cultura: - tipo nutritivo no qual o microrganismo pertence: - fonte de energia (luz ou substância química) - o substrato doador de elétrons (orgânico ou inorgânico) - fonte de carbono (orgânica ou inorgânica). • OBS: O meio de cultura deve atender as necessidades específicas do grupo, da família, do gênero ou da espécie que se deseja cultivar. • Imprescindível acrescentar ao meio vitaminas, cofatores, aminoácidos, etc. Fatores de crescimento • Entre as bactérias heterotróficas há uma imensa variedade de exigências nutritivas. Algumas são capazes de crescer em meio muito simples, constituído de uma solução de glicose, sal de amônio e alguns sais minerais. • A partir desses compostos, sintetizam todos os componentes do protoplasma: proteínas, polissacarídeos, ácidos nucléicos, coenzimas, etc. • Existem bactérias que são incapazes de sintetizar determinados compostos orgânicos essenciais para o seu metabolismo: • Os compostos devem ser obtidos do meio natural ou artificial em que vivem. • Essas substâncias são denominadas fatores de crescimento. • Muitos desses fatores são componentes de coenzimas (vitaminas). • Ex: O ácido fólico é necessário ao crescimento de determinadas bactérias. • Muitas vezes o meio de cultura deve conter substâncias para neutralizar a ação de produtos tóxicos lançados pelos próprios microrganismos, que sofrem os efeitos de seu acúmulo. • Ex: adição de tampões para impedir a queda de pH provocada pelos ácidos orgânicos produzidos por fermentação bacteriana. • Os meios podem ser líquidos, quando são uma solução aquosa de nutrientes, ou sólidos, quando a solução aquosa é gelificada por um polissacarídeo extraído de algas, o ágar. • O meio sólido é obrigatoriamente usado quando se pretende separar células. • Cada célula individualizada ou agrupamento isolado dá origem, por multiplicação, a um aglomerado que constitui uma colônia. • Colônias de diferentes espécies geralmente apresentam características morfológicas diferentes. • Os meios de cultura podem ser seletivos, quando contêm uma substância que inibe o crescimento de um determinado grupo de microrganismos, mas permite o desenvolvimento de outros. Curva de Crescimento A DB C Fases da Curva de Crescimento de bactérias: - Fase Lag - Fase Estacionária - Fase Exponencial ou Logaritmica (Log) - Fase de Declínio A C B D • Fase lag (A): esta fase de crescimento ocorre quando as células são transferidas de um meio para outro ou de um ambiente para outro. Esta é a fase de ajuste e representa o período necessário para adaptação das células ao novo ambiente. As células nesta fase aumentam no volume total em quase duas ou quatro vezes, mas não se dividem. • Fase exponencial ou log (B): nesta fase, as células estão se dividindo a uma taxa geométrica constante até atingir um máximo de crescimento. Os componentes celulares como RNA, proteínas, peso seco e polímeros da parede celular estão também aumentando a uma taxa constante. Como as células na fase exponencial estão se dividindo a uma taxa máxima, elas são muito menores em diâmetro que as células na fase Lag. A fase de crescimento exponencial normalmente chega ao final devido à depleção de nutrientes essenciais, diminuição de oxigênio em cultura aeróbia ou acúmulo de produtos tóxicos. • Fase estacionária (C): durante esta fase, há rápido decréscimo na taxa de divisão celular. Eventualmente, o número total de células em divisão será igual ao número de células mortas, resultando na verdadeira população celular estacionária. A energia necessária para manter as células na fase estacionária é denominada energia de manutenção e é obtida a partir da degradação de produtos de armazenamento celular, ou seja, glicogênio, amido e lipídeos. • Fase de morte ou declínio (D): quando as condições se tornam fortemente impróprias para o crescimento, as células se reproduzem mais lentamente e as células mortas aumentam em númeroselevados. Nesta fase o meio se encontra deficiente em nutrientes e rico em toxinas produzidas pelos próprios microrganismos.
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