Aula Enterobacterias

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Enterobacteriales
Introdução ao Laboratório Clínico II
Mestranda Isabela Fortaleza 
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A família Enterobacteriales
A MAIOR E MAIS HETEROGÊNEA
42 gêneros 
 Mais de 100 espécies 
 A maioria não é patogênica 
CLASSIFICAÇÃO
Provas bioquímicas
Estrutura antigênica
 
Técnicas moleculares
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A família Enterobacteriales
ONDE VIVEM? 
Ubíquas no solo, água, plantas, TGI de humanos e de animais. 
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O QUE FAZEM?
Compõem a microbiota normal 
Abscessos
Pneumonia
Meningites
Septicemias
Infecções de feridas, trato urinário e trato gastrintestinal. 
Citar que a Salmonella typhi é encontrada somente no TGI humano. Que compõem a microbiota normal e podem ser patogênicos. 
A família Enterobacteriales
PRINCIPAIS ENTEROBACTÉRIAS ISOLADAS NA CLÍNICA:
Escherichia coli 
Klebsiella spp.
Enterobacter spp.
Proteus spp.
Providencia spp. 
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Morganella spp.
Citrobacter spp.
Salmonella spp.
Shigella spp.
Serratia spp.
ISOLADOS MENOS FREQUENTES: 
Edwardsiella spp.
Hafnia spp.
Yersinia spp.
Citar que a Salmonella typhi é encontrada somente no TGI humano. Que compõem a microbiota normal e podem ser patogênicos. 
A família Enterobacteriales
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Fonte: JUNIOR, A. F., 2015
Fisiologia e estrutura
Bacilos Gram-negativos
Não esporulados
Aneróbios facultativos 
Fermentadores da glicose
Catalase positivos
Oxidase negativos 
Reduzem nitrato a nitrito
Flagelos peritríquios
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1,0 a 6,0 μm
0,3 a 1,0 μm
Tamanho aproximado das enterobactérias
Flagelos peritríquios
Antígeno H  Flagelos
Antígeno K  Cápsula 
Lipopolissacarídeo LPS
Polis. O  Diferente em cada bactéria 
Estruturas antigênicas
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Repelem fagócitos e protegem as bactérias dos anticorpos
Ativa o sistema complemento, leucocitose, 
coagulação intravascular disseminada, 
febre, choque e morte
Enterobacteriales
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São os isolados mais frequentes na rotina clínica, representando 80% dos achados
Isolados com alta frequência de resistência aos antimicrobianos
Adequado isolamento e identificação
Plasmídeos
Transposons 
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Identificação
Provas bioquímicas
Teste de sensibilidade aos antimicrobianos 
Isolamento primário
Isolamento primário
 Os espécimes clínicos podem ser provenientes de abscessos, feridas, fezes, urina, aspirado traqueal, dentre outros.
O semeio das secreções deve ser feito pela semeio por esgotamento. 
Para a urina, a cultura deve ser procedida com alça calibrada ( 1µl ou 10µl) e semeio específico para urocultura.
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Técnica de esgotamento
Semeio com alça calibrada
Meios de cultura utilizados
NÃO SELETIVOS:
Ágar sangue 
 CLED (quando a amostra é urina)
MEIOS SELETIVOS E DIFERENCIAIS: 
Ágar MacConkey
Ágar SS (Shigella-Salmonella)
Ágar EMB (Eosina Azul de Metileno)
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Ágar CLED 
Lac +
Sempre ficar atento para a morfologia e a pureza das colônias!
Cistina lactose deficiente de eletrólitos 
Identificação bioquímica 
PRINCIPAIS PROVAS BIOQUÍMICAS SÃO:
Fermentação Carboidratos
Produção de Gás
Motilidade
Indol
Produção sulfeto
Citrato
Urease
Descarboxilação da lisina
Fenilalanina desaminase
VM – Vermelho de Metila
VP – Voges-Proskauer
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MEIOS PRESUNTIVOS: 
IAL  Nove provas bioquímicas em um único tubo. 
Identificação bioquímica
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TSI  Tríplice açúcar e ferro
Glicose, lactose e sacarose  fermentam viram o pH que reage com o vermelho de fenol. O sulfato ferroso de amônio é usado na detecção da produção de H2S, formando composto na cor preta. 
SIM  Sulfeto, Indol, Motilidade
O citrato ferroso de amônio e tiossulfato de sódio são usados para detectar produção de gás H2S. 
Identificação bioquímica
Os testes de VM e VP são baseados no resultado final do metabolismo do piruvato. 
VM – Vermelho de Metila  Via ácido-mista: Identifica bactérias que produzem ácidos fortes na via ácido-mista, que é uma via alternativa para o metabolismo do piruvato. Os ácidos produzidos pelas bactérias reagem com o VM e o meio fica vermelho. 
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VM +  Escherichia spp., Shigella spp., Salmonella spp., Proteus spp., Providencia spp., Citrobacter spp. 
O objetivo é determinar a capacidadedos microrganismos produzirem produtos finais não ácidos ou neutros, como o acetilmetilcarbinol, a partir dos ácidos orgânicos que resultam da metabolização da glicose. Prova feita no meio MR - VP (Methyl Red, Voges - Proskauer). 
A adição do reagente de Barritt’s (solução 40% KOH e solução de a-naftol em etanol absoluto) permite detectar a presença de acetilmetilcarbinol (acetoína) que é percursor da síntese de 2,3 butanediol, pois ocorre a formação de um complexo rosa/vermelho que dá essa cor ao meio de cultura. Odesenvolvimento de uma cor rosa/vermelha na cultura, 15 minutos após a adição do reagente de Barritt’s representa uma prova positiva. A ausência dessa cor é uma prova negativa. 
Este tipo de fermentação da glicose é característico do E.aerogenes. 
Identificação bioquímica
VP – Voges – Proskauer  Via butilenoglicólica (acetil-metil-carbinol)
Detecta a via fermentativa butilenoglicólica, cujo os produtos são não ácidos ou neutros, como acetilmetilcarbinol (acetoína), a partir dos ácidos orgânicos que resultam da metabolização da glicose. 
 
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Reagente de Barrit: KOH + α-naftol + álcool absoluto.
VP+  Enterobacter spp., Klebsiella spp., Serratia spp.
O teste é feito no caldo MR - VP (Methyl Red, Voges - Proskauer). O oxigênio do ar e a adição do reagente de Barritt’s (solução 40% KOH e solução de α-naftol em etanol absoluto) permite detectar a presença de acetoína, que será convertida em diacetila e esta formará um complexo com α-naftol gerando uma cor rosa-avermelhada ao meio de cultura. A ausência dessa cor é uma prova negativa.
Identificação bioquímica
Prova do Indol 
As bactérias que possuem a enzima triptofanase degradam o triptofano com a formação de Indol. Quando adicionamos o Reativo de Kovacs (para-dimetilaminobenzaldeído), este forma um complexo com o Indol produzindo um anel de coloração rosa no meio. 
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Indol +: E. coli 
Identificação bioquímica
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Identificação bioquímica
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Identificação bioquímica
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Identificação bioquímica
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