AULA 04meios microbiologicos02.04

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Cultivo de microorganismos
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Carbono: Necessário para o crescimento microbiano
Compostos orgânicos: Contêm carbono
Compostos inorgânicos: não contêm
Nutrientes Orgânicos: 
Carboidratos
Lipídeos
Proteínas
Fornecem energia para o crescimento da célula e servem como unidade básica do material celular.
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Nitrogênio: Elemento essencial dos aminoácidos (formam as proteínas)
Fixação de nitrogênio: Capacidade de utilizar nitrogênio gasoso ou atmosférico
Outros compostos nitrogenados:
Inorgânicos: nitratos, nitritos, sais de amônio
Orgânicos: Aminoácidos ou peptídeos
Azotobacter chroococum 
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Hidrogênio, Oxigênio, Enxofre e Fósforo
Hidrogênio e Oxigênio: partes de muitos compostos orgânicos
Enxofre: Biossíntese dos aminoácidos (cisteína, cistina e metionina)
Síntese de ácidos nucléicos e Adenosina Trifosfato (ATP)
Podem ser encontrados na água ou na atmosfera gasosa do meio
Íons inorgânicos: Sulfatos e Fosfatos ( podem suprir os principais elementos necessários para os microrganismos
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Classificação Nutricional dos Microrganismos
Quimiotróficos: Compostos químicos para absorver energia
Fototróficos: Dependem primeiramente da energia radiante (luz)
Quimioautotróficos: utilizam substâncias químicas (Inorgânicas) como fonte de energia e dióxido de carbono como fonte de carbono
Quimioheterotróficos: utilizam substâncias químicas (Orgânicas) como fonte de energia e compostos orgânicos como fonte de carbono 
Fotoautotróficos: utilizam a luz como fonte de energia e dióxido de carbono como fonte de carbono
Fotoheterotróficos: utilizam luz como fonte de energia e compostos orgânicos como fonte de carbono
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Componentes comuns:
Categorias:
Nutrientes nitrogênio-amínico: peptonas, infusões, extratos...
Fontes de energia: glicose
Fatores de promoção de crescimento: sangue, soro, vitaminas, NADH...
Tampão fosfato, para manutenção do pH em meios de fermentação: sais de fosfato acetatos e citratos solúveis;
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Sais minerais e metais, para melhorar o crescimento: PO4-2, SO4-2, CA+2, Mg+2, Fe+2, Mn+2 e metais
Agentes seletivos: reagentes químicos, antibióticos, e tinturas inibidoras;
Corantes indicadores úteis para indicar mudanças de pH no meio, durante e depois do crescimento de m.o.: fenol vermelho, vermelho neutro, bromocresol púrpura...
Agentes gelificantes: ágar, gelatina
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Meios p/ cultivo de Bactérias
Normalmente imitam o hábitat normal das mesmas.
Para as bactérias que preferem os nutrientes encontrados no sangue, adiciona-se sangue ao meio.
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Meios p/ cultivo de Bactérias
Se a glicose é o constituinte comum de um nicho bacteriano, adiciona-se o açúcar ao meio.
Para as que apresentam maiores exigências nutricionais (fastidiosas), utiliza-se os meios complexos, os quais contém uma grande variedade de substâncias orgânicas.
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Meios p/ cultivo de Fungos
Assim como as bactérias, os fungos absorvem nutrientes ao invés de ingeri-los;
Essa absorção é auxiliada por enzimas que quebram as moléculas orgânicas;
Todos os fungos são heterotróficos, e podem crescer no laboratório:
Em uma mistura simples contendo açúcar, uma fonte de nitrogênio inorgânico ou orgânico e alguns minerais;
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Meios p/ cultivo de Fungos 
Alguns necessitam de vitaminas;
Outros podem crescer somente em meio complexo que contenha uma grande variedade de compostos orgânicos providos da peptona e extrato de carne;
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Em geral, o meio para cultivo de fungos tem:
Uma concentração maior de açúcar que as bactérias: 4%;
Um pH menor: 3,8 a 5,6.
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Composição de um meio utilizado para o isolamento e crescimento de fungos em geral
Ágar Sabourand:
Fonte de carbono, nitrogênio: peptona
Fonte de carbono e energia: glicose (em alta concentração, inibe o crescimento bacteriano)
Agente solidificante: ágar
Solvente: H2O
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Algas utilizam luz para produzir energia;
Requerem somente CO2, H2O e vários íons inorgânicos para crescer;
Meios complexos geralmente contem extrato de soja;
Existem poucos meios prontos, como para bactérias e fungos.
Meios p/ Cultivo de Algas
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Meios Especiais
São aqueles com finalidade específica;
Utilizados quando se quer isolar, identificar ou contar os m.o.;
Fornecem informações específicas sobre o m.o. (coloração da colônia... Etc);
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Diferencia-se os meios:
1.	Pela Consistência:
Líquidos:
	Não contém ágar. Ex.: Caldo simples.
Fluidos:
	A percentagem de ágar é inferior a 0,1%.
	Ex.: Meio de Tiogliconato.
Semi-sólidos:
	Participação de 0,3-0,5% de ágar.
	Ex.: Meio de Sim, Cary & Blair.
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Solidificados:
	São meios de cultura que apesar de sólidos, podem ser liquefeitos. Usualmente contém 1,5-2% de ágar.
	Ex.: Ágar-simples, Ágar-sangue.
Sólidos:
	Aqueles que embora não contenham ágar, apresentam-se naturalmente no estado sólido. Ex.: Fatias de batata, usadas ocasionalmente para cultivo de bactérias.
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Pela procedência:
Naturais:
	Aqueles que não sofrem alteração de sua composição. Ex.: Batata, Cenoura, leite, suco de laranja.
Artificiais:
	São preparados pela mistura de diversas substâncias. Ex.: Ágar simples, Ágar chocolate, Ágar Mueller-Hilton.
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Meios para Anaeróbios
Primeiros cultivos foram feitos em camadas profundas de meios solidificado;
A camada da superfície exclui o oxigênio atmosférico;
Adição de um agente redutor ao meio remove o oxigênio – MEIO REDUZIDO;
Anaeróbios estritos como as arqueobactérias produtoras de metano, o cuidado deve ser maior. Deve-se:
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Ferver o meio para que a maior parte do oxigênio dissolvido seja retirado;
Adicionar o gás N2, livre de oxigênio, nos tubos contendo o meio;
Adicionar um agente redutor, p.ex. a cisteína remove os últimos traços de oxigênio;
Esterilização do meio (recomendável a utilização de válvula de selagem no topo do frasco para prevenir a entrada de oxigênio).
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Meios Seletivos
Servem para selecionar um m.o. permitindo um tipo particular de m.o. ou suprimindo o crescimento de outros m.o.;
Ex.: Ágar Sabourand para fungos; Ágar verde brilhante para Salmonella; Corante verde brilhante adicionado ao meio inibe as bactérias Gram + comum do trato intestinal; o ágar feniletanol inibe o crescimento de Gram – , mas não da Gram +.
Recentemente os antibióticos vem sendo adicionados aos meios, tornando-os seletivos para os m.o. resistentes à estes agentes microbianos.
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Meios diferenciais	
Servem para diferenciar os vários tipos de m.o. em uma placa com ágar.
Ex.: se uma amostra de secreção da garganta é semeada numa placa de ágar sangue, pode-se diferenciar as bactérias hemolíticas (produzem enzimas que lisam as hemácias formando uma zona clara ao redor da colônia) das não hemolíticas (que dissolvem as hemácias, e portanto não formam este halo ao redor das colônias)
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Meios Seletivos/Diferenciais
Agem tanto como seletivos como diferenciais;
São particularmente úteis em microb. de saúde pública, como na determinação de qualidade da água, ou na identificação de causas de infecção alimentar.
Ex.: Ágar MacConkey – contém sais biliares e corante cristal violeta, os quais inibem o crescimento de Gram + (produtoras de ácido a partir do açúcar tornando-as vermelhas) das Gram – (não produtoras de ácido).
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Meios de Enriquecimento
Utilizados para selecionar m.o. que está presente em determinado local, em pequenas quantidades;
O meio favorece o crescimento da espécie desejada, mas não o crescimento das outras espécies presentes em uma população mista;
Nenhum agente inibidor é utilizado para prevenir o crescimento de m.o. indesejáveis;
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TSA
Celulose
Gelatina
Solubilizadores de Fosfato
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Ex.: bactérias que oxidam o fenol – que podem ser isoladas de amostras de solo, utilizando o meio de enriquecimento.
Utiliza-se sais de amônia e fenol como única fonte de carbono e energia, assim, somente os m.o. capazes de oxidar o fenol estarão presentes em grande número.
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Meios de Estocagem
Utilizado para
a manutenção da viabilidade e das características fisiológicas de uma cultura;
Pode exigir um meio diferente daquele ótimo para o seu crescimento;
O desenvolvimento rápido pode estar associado com a rápida morte celular;
A glicose, que favorece com freqüência o crescimento, também desenvolve maior quantidade de ácidos no meio, sendo preferível omitir a glicose na preparação de um meio de estocagem.
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