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VDRL – Teste Semiquantitativo Cristiane Pedrosa de Oliveira DETERMINAÇÃO VDRL OBJETIVO 1. Integrar a fundamentação teórica à aplicação prática do método. 2. Desenvolver a habilidade do(a) aluno(a) na realização de exames, como o VDRL, utilizados no diagnóstico da sífilis. 3. Preparar o(a) aluno(a) para atuar na rotina de um laboratório. METODOLOGIA ▪ Organizar e preparar sobre a bancada todo o material necessário para a realização do teste, conforme descrito na bula do kit. ▪ Identificar as cavidades da placa de Kline onde serão depositados os controles positivo, negativo e amostra. ▪ Pipetar 50 µL do controle positivo e dispensar na cavidade da placa escavada correspondente. ▪ Pipetar 50 µL do controle negativo e dispensar na cavidade da placa escavada correspondente. ▪ Pipetar 50 µL da amostra e dispensar na cavidade da placa escavada correspondente. ▪ Pipetar 20µl da suspensão antigênica homogeneizada nas mesmas cavidades das amostras e soros controles. Não é necessário misturar esses dois componentes. ▪ Agitar a placa durante 4 minutos. ▪ Imediatamente após 4 minutos, observar o resultado ao microscópio utilizando a objetiva de 100x, comparando o resultado da amostra com os obtidos para os controles positivos e negativos. DETERMINAÇÃO VDRL • Figura 1 – Placa Escavada – Placa de Kline Figura 2 – Micropipeta volume variável 10-100 µL DETERMINAÇÃO VDRL • Figura 3 – Ponteira Amarela Tipo Gilson Figura 4 – VDRL 250 Testes 5 Ml C/ Controles Wama DETERMINAÇÃO VDRL • Figura 5 – Cronômetro DETERMINAÇÃO VDRL RESULTADOS E DISCUSSÃO Após realizar o teste VDRL, analise ao microscópio a presença ou ausência de aglutinação e compare os resultados com os controles positivo e negativo para uma interpretação correta. Registre o processo da prática por meio de fotos que comprovem sua participação ativa na aula. DETERMINAÇÃO VDRL RESULTADOS E DISCUSSÃO 1) Explique o princípio do teste VDRL e o papel dos componentes da suspensão antigênica (colesterol, lecitina e cardiolipina) no processo de floculação. 2) Registre uma foto do resultado encontrado no microscópio. 3) Descreva a interpretação do resultado obtido para cada amostra, indicando se foi positivo (reagente) ou negativo (não reagente) com base na presença ou ausência de aglutinação. Justifique sua resposta considerando o princípio do teste VDRL e a reação antígeno-anticorpo. Respostas: 1=Princípio do teste VDRL: O teste detecta anticorpos (anticardiolipinas) que reagem com a suspensão antigênica. A suspensão contém colesterol, lecitina e cardiolipina, que são componentes lipídicos semelhantes aos liberados por células danificadas pela sífilis. Colesterol: Ajuda na formação do complexo antigênico que facilita a floculação. Lecitina: Efeito estabilizador que mantém a suspensão homogênea. Cardiolipina: Principal componente que reage com os anticorpos na amostra do paciente 2= Resultados: 3= Interpretação dos resultados: Positivo (reagente) a direita: Indica presença de anticorpos no soro do paciente, sugerindo infecção ativa ou passada. Negativo (não-reagente) a esquerda: Indica a ausência de floculação, sugerindo ausência de infecção ativa ou passada. Algumas fotos registradas durante a aula CONCLUSÕES ● Bom pra mim foi uma aula ótima, na parte da explicação ei consegui entender bem, não tive muitas dificuldades pois o professor me auxiliou em cada passo. No entanto no dia da aula eu estava doente mais não quis deixar de ir pois estava curiosa com a aula, então pra mim valeu a pena e foi ótima. DETERMINAÇÃO VDRL TITULAÇÃO OBJETIVO 1. Compreender o princípio da reação de floculação e sua aplicação na titulação do VDRL, correlacionando os achados laboratoriais com a evolução da doença e a resposta ao tratamento. 2. Desenvolver a habilidade do(a) aluno(a) na execução da titulação do VDRL, incluindo a preparação dos reagentes, a realização da diluição seriada da amostra e a interpretação dos resultados. 3. Capacitar o(a) aluno(a) para a prática laboratorial, possibilitando sua atuação na rotina de exames diagnósticos da sífilis. METODOLOGIA 1. Fazer diluição de amostra em solução salina a 1/2, 1/4, 1/8, 1/16, 1/32, e mais se necessário. 2. Pipetar 50 µl de cada diluição em uma cavidade da placa escavada. 3. Pipetar 20 µl da suspensão antigênica homogeneizada em cada diluição. Não é necessário misturar esses dois componentes. 4. Agitar a placa durante 4 minutos. 5. Imediatamente após 4 minutos, observar ao microscópio. 6. TÍTULO DA AMOSTRA: será a última diluição onde, ainda, se visualiza a presença de agregados. TITULAÇÃO RESULTADOS E DISCUSSÃO Após realizar a diluição da amostra em solução salina no teste de VDRL, analise ao microscópio e determine a interpretação correta. O título da amostra será definido como a última diluição na qual ainda é possível visualizar a presença de agregados. Qual foi a titulação encontrada? Registre o processo da prática por meio de fotos que comprovem sua participação ativa na aula. Além disso, capture uma imagem do resultado da titulação observada no microscópio. RESULTADOS E DISCUSSÃO 1) O que é o fenômeno prozona e como ele pode ser evitado nos testes laboratoriais? O fenômeno da prozona é uma ocorrência que pode afetar testes imunológicos, como os testes sorológicos, onde uma alta concentração de anticorpos pode levar a um falso negativo. Isso acontece porque o excesso de anticorpos interfere na formação do complexo antígeno-anticorpo necessário para a detecção adequada do teste. Para evitar o fenômeno da prozona, a amostra pode ser diluída para garantir que os níveis de anticorpos estejam na faixa ideal para a detecção correta. 2) Qual a importância dos testes não treponêmicos no monitoramento da resposta terapêutica e como a titulação da amostra é realizada? Testes não treponêmicos, como o VDRL (Venereal Disease Research Laboratory) e o RPR (Rapid Plasma Reagin), são importantes no monitoramento da resposta terapêutica em condições como a sífilis. Eles ajudam a avaliar se o tratamento está sendo eficaz ao observar a diminuição dos anticorpos após a terapia. A titulação da amostra nesses testes envolve a diluição seriada do soro do paciente até se obter o ponto em que a reação ainda pode ser detectada. Essa titulação é considerada semiquantitativa, pois dá uma ideia da quantidade de anticorpos presentes, auxiliando na avaliação da resposta ao tratamento. TITULAÇÃO CONCLUSÕES ● Bom assim como havia dito no primeiro espaço de conclusão a minha única dificuldade foi em relação a minha saúde no dia, e por estar doente a minha cabeça estava um pouco longe, mais o professor me deu suporte e me auxiliou em cada passo então foi uma ótima aula. TITULAÇÃO Slide 1 Slide 2 Slide 3 Slide 4 Slide 5 Slide 6 Slide 7 Slide 8: Respostas: Slide 9: Algumas fotos registradas durante a aula Slide 10 Slide 11 Slide 12 Slide 13 Slide 14