DIAGNOSTICO LABORATORIAL I

Prévia do material em texto

DIAGNÓSTICO LABORATORIAL I
1. As Três Fases do Diagnóstico Laboratorial
Para que o diagnóstico microbiológico seja preciso, o processo é dividido em três blocos operacionais:
· Fase Pré-Analítica: Envolve a indicação médica, a requisição do exame, o preparo do paciente, a coleta da amostra, o acondicionamento e o transporte. É onde ocorrem cerca de 70% dos erros laboratoriais.
· Fase Analítica: É o processamento real no laboratório (semeadura em meios de cultura, coloração de Gram, testes bioquímicos, Teste de Sensibilidade aos Antimicrobianos - TSA).
· Fase Pós-Analítica: Emissão, validação e interpretação do laudo pelo médico.
2. Princípios de Ouro da Coleta de Amostras
A coleta inadequada gera resultados "falso-positivos" (por contaminação externa) ou "falso-negativos" (bactéria morre antes de chegar ao laboratório). Fixe estas 4 regras fundamentais:
1. Momento Ideal: A coleta deve ser realizada antes do início da antibioticoterapia. Se o paciente já estiver tomando antibiótico, o laboratório deve ser notificado.
2. Sítio Anatômico: Coletar o material exatamente do local da infecção, minimizando o contato com áreas vizinhas.
3. Antissepsia: Evitar a contaminação da amostra com a microbiota normal (as bactérias "boas" que vivem na nossa pele e mucosas).
4. Volume Adequado: Pouco volume pode não conter bactérias suficientes para o crescimento no meio de cultura.
3. Coleta por Tipo de Amostra (O Guia de Sobrevivência)
Hemocultura (Sangue)
Usada para investigar infecções na corrente sanguínea (bacteremia, sepse, endocardite).
· Antissepsia Rigorosa: É vital limpar a pele do paciente com álcool 70% e clorexidina (ou iodo) para não injetar bactérias da pele no frasco.
· Amostragem: Nunca coletar de um único local. O padrão é coletar 2 a 3 amostras de punções venosas diferentes. Isso ajuda a diferenciar uma infecção real de uma contaminação da agulha.
· Frascos: Existem frascos específicos para bactérias aeróbias (que gostam de oxigênio) e anaeróbias. O volume em adultos deve ser de 10 a 20 mL por frasco.
Urocultura (Urina)
Usada para diagnóstico de Infecção do Trato Urinário (ITU).
· Jato Médio: A técnica padrão. O paciente higieniza a genitália, despreza o primeiro jato de urina (que serve para "lavar" as bactérias da uretra) e coleta o jato do meio em frasco estéril.
· Sonda Vesical: Em pacientes sondados, a urina deve ser puncionada do portal do cateter (após desinfecção), nunca da bolsa coletora (onde a urina está parada e contaminada).
· Punção Suprapúbica: Inserção de agulha direto na bexiga. É invasivo, mas é o padrão-ouro porque garante 100% de esterilidade (ausência de microbiota da uretra).
Coprocultura (Fezes)
Investigação de diarreias infecciosas severas (ex: Salmonella, Shigella).
· Coleta: Preferencialmente na fase aguda da diarreia. Coletar porções com muco, pus ou sangue.
· Transporte: Se houver demora para chegar ao laboratório, deve-se usar um meio de transporte específico, como o Cary-Blair.
Líquor (Líquido Cefalorraquidiano - LCR)
· Indicação: Suspeita de meningite. É uma amostra nobre e crítica (urgência absoluta no laboratório).
· Coleta: Ato exclusivamente médico (punção lombar). O material nunca deve ser refrigerado se houver suspeita de bactérias sensíveis ao frio (como Neisseria meningitidis ou Haemophilus influenzae).
Trato Respiratório (Escarro e Swab)
· Escarro: Exige orientação rigorosa. O paciente deve escovar os dentes ou lavar a boca só com água e tossir profundamente. Escarro não é saliva! Saliva é rejeitada pelo laboratório.
· Swab de Orofaringe: Friccionar vigorosamente as amígdalas e a parede posterior da garganta, evitando tocar na língua, dentes ou bochechas.
QUESTÕES DE FIXAÇÃO: 
1 - Em relação ao gênero Staphylococcus, durante seus processos metabólicos em presença de oxigênio, é gerado peróxido de hidrogênio como um subproduto. Uma enzima específica produzida por essas bactérias desempenha um papel fundamental na decomposição do peróxido de hidrogênio H2O2), convertendo-o em água H2O) e gás oxigênio O2). Qual é o nome dessa enzima responsável por essa importante reação de decomposição?
A - Catalase
B - Coagulase
C - Fermentase
D - Peroxidase
E – Oxigenase
Resposta: Letra A
Comentário:
A Catalase é a enzima de "sobrevivência" das bactérias aeróbias e facultativas (como o Staphylococcus). O oxigênio é ótimo para gerar energia, mas o metabolismo produz "lixo tóxico", como o peróxido de hidrogênio (H2O2, a famosa água oxigenada). Se a bactéria não limpar esse lixo, ela morre.
· No laboratório, o Teste da Catalase é o primeiro passo para separar as duas famílias mais famosas de cocos Gram-positivos.
· Você pinga uma gota de água oxigenada na lâmina com a bactéria.
· Se borbulhar intensamente (liberação do gás O2), o teste é Positivo (tem Catalase) > É a família Staphylococcus.
· Se não borbulhar, o teste é Negativo (não tem Catalase) > É a família Streptococcus.
Resumo Rápido na Mente 
· Fez bolha com água oxigenada? = Catalase Positivo = Staphylococcus
· Fez coágulo no plasma? = Coagulase Positivo = Streptococcus aureus
2 - Sobre o tempo de crescimento das bactérias em meio de cultura a ponto de observarmos o aparecimento de colônias, escolha a opção correta.
A - Os meios de cultura devem sempre ser incubados em estufa durante o período máximo de 24 horas.
B - O tempo de crescimento necessário das espécies bacterianas em meio de cultura para técnicas de diagnóstico pode variar entre 24 horas até em semanas.
C - Os meios de cultura devem sempre ser incubados em estufa durante o período máximo de 1 semana, para evitar contaminações.
D - O tempo de crescimento em meio de cultura depende mais da temperatura na qual foi incubado do que a espécie de bactéria que se pretende cultivar.
E - O tempo de crescimento necessário das espécies bacterianas em meio de cultura para técnicas de diagnóstico pode variar entre uma ou mais semanas.
Resposta: Letra B
Comentário:
O tempo que uma bactéria leva para se duplicar (tempo de geração) é extremamente variável e depende intrinsecamente da espécie. No laboratório, o tempo de incubação deve respeitar essa biologia para que as colônias tornem-se visíveis ao olho nu.
· Bactérias de Crescimento Rápido: A maioria das bactérias de importância médica, como a Escherichia coli, tem um tempo de geração de aproximadamente 15 a 20 minutos. Nesses casos, observamos colônias em 18 a 24 horas de incubação.
· Bactérias de Crescimento Lento: O exemplo clássico é o Mycobacterium tuberculosis (bacilo da tuberculose), cujo tempo de geração é de cerca de 932 minutos (mais de 15 horas).
· Padrões de Diagnóstico: Por causa dessa variação, uma cultura de micobactéria só pode ser considerada negativa após, no mínimo, 45 dias (aproximadamente 6 semanas) de incubação sem crescimento visível.
3 - Qual das técnicas de cultivo de bactérias usando amostras de urina fornece resultados quantitativos, ou seja, determina o número de bactérias por mL de urina, sendo útil para o diagnóstico de ITU e para o acompanhamento da terapia antimicrobiana?
A - Técnica de semeadura superficial. 
B - Técnica de semeadura em profundidade. 
C - Lamino-cultivo.
D - Técnica de contagem de colônias por diluição. 
E - Técnica de contagem de colônias por filtragem.
Resposta: Letra D
Comentário e Fundamentação Técnica
Diferente de outras culturas onde buscamos apenas o isolamento do patógeno, a urocultura exige uma análise quantitativa para diferenciar uma infecção real de uma simples contaminação da uretra.
· Técnica de Contagem por Diluição: Consiste em semear um volume rigorosamente calibrado de urina (geralmente através de alças calibradas de 1,0 μl ou 10 μl ) em meio de cultura sólido. Após a incubação, conta-se o número de Unidades Formadoras de Colônias (UFC).
· Cálculo: Se utilizarmos uma alça de 1,0 μl (0,001mL) e crescerem 100 colônias, o resultado será 100 X 1000 = 100.000 UFC/mL.
· Importância Clínica: O valor de 105 UFC/mL (cem mil unidades por mL) é frequentemente utilizado como ponto de corte para confirmar uma ITU em amostras de jato médio.4 – Uma mulher com 45 anos de idade foi atendida na Unidade de Pronto Atendimento Hospitalar, queixando-se de dor ao urinar, disúria frequente, urgência miccional e ocasionalmente dor pélvica, além de dor nos flancos e febre. Após anamnese, o médico assistente solicitou à unidade de análises clínicas os seguintes exames de urgência: hemograma, exame qualitativo de urina EQU), urocultura e antibiograma. Após quatro dias, o setor de microbiologia liberou o resultado da urocultura, que demonstrou crescimento de Escherichia coli ≥ 105 UFC/mL e sensibilidade aos antimicrobianos. Com base no caso clínico descrito, avalie as afirmações a seguir. 
I. A realização da bacterioscopia da urina, após coloração de Gram, em objetiva de imersão 1000X, demonstra bacilos gram-negativos, além de observação de leucocitose no hemograma. 
II. A determinação da sensibilidade aos antibacterianos, por meio do teste de difusão em disco, pode ser realizada em Ágar Sangue de carneiro para Escherichia coli. 
III. As provas bioquímicas e meios de cultura seletivos como o ágar Mac Conkey ou Eosin Methylene Blue EMB) são utilizados para identificação da enterobactéria Escherichia coli. É correto o que se afirma em:
A - I, apenas. 
B - II, apenas. 
C - I e III, apenas. 
D - II e III, apenas. 
E - I, II e III.
Resposta: Letra C
5 - Por que é tão importante para o diagnóstico de infecção urinária determinar o número de colônias que cresceram a partir de uma quantidade exata de urina?
A - Um número de colônias abaixo do limite mínimo tem grandes chances de se tratar de contaminação da urina durante a coleta. 
B - A partir da contagem de colônias a dosagem de antimicrobiano será ajustada, para garantir maior eficiência do tratamento. 
C - Caso a contagem seja alta, indica que a infecção acomete a porção superior do sistema urinário, o que inclui os rins. 
D - A contagem de colônias ajuda a determinar qual a espécie responsável pela infecção, já que as bactérias têm tempos de crescimento muito diferentes. 
E - O tipo de colônia que estiver em maior número sempre será a responsável pela infecção.
6 - A Bordetella pertussis, a bactéria causadora da coqueluche, apresenta uma característica distintiva na coloração de Gram. Qual é a característica distintiva na coloração Gram da Bordetella pertussis e qual técnica laboratorial é recomendada para acelerar o diagnóstico dessa infecção?
A - Células gram-positivas; teste sorológico.
B - Células gram-negativas; cultura em Ágar Regan-Lowe.
C - Células gram-positivas; diagnóstico molecular pela PCR.
D - Células gram-negativas; cultura em Ágar Bordet & Gengou.
E - Células gram-positivas; cultura em meio de ágar simples.
Resposta: Letra D
Comentário:
A Bordetella pertussis é o agente etiológico da coqueluche e possui características laboratoriais muito específicas:
· Classificação de Gram: Ela é classificada como um bacilo (ou cocobacilo) Gram-negativo. Isso significa que sua parede celular possui uma fina camada de peptideoglicano e uma membrana externa rica em LPS, não retendo o cristal-violeta e aparecendo avermelhada/rosada sob o microscópio.
· Cultura e Meios Específicos: Ao contrário de bactérias comuns que crescem em 24 horas, a B. pertussis é nutricionalmente exigente (fastidiosa) e de crescimento lento. O meio clássico e específico para o seu isolamento é o Ágar Bordet & Gengou (que contém sangue e batata para neutralizar substâncias inibidoras) ou o Ágar Regan-Lowe.
· Diagnóstico Acelerado (Observação): Embora a alternativa D foque na cultura, na prática clínica moderna, o diagnóstico molecular (PCR) é frequentemente utilizado para acelerar o resultado, dada a lentidão da cultura.
7 - Qual é a principal característica que diferencia as micobactérias, como o Mycobacterium tuberculosis, das bactérias gram-positivas e gramnegativas no processo de coloração de Gram?
A - Presença de cápsula protetora.
B - Produção de esporos resistentes.
C - Composição de ácido micólico na parede celular.
D - Organização celular em cadeias lineares.
E - Capacidade de fermentação de carboidratos.
Resposta: Letra C
Comentário:
As micobactérias possuem uma morfologia de bacilos, mas sua parede celular é quimicamente única, o que as torna "rebeldes" à coloração de Gram tradicional. 
· A Barreira Lipídica: Acima da camada de peptideoglicanos, as micobactérias possuem uma camada de polímeros de arabinogalactano revestida por uma espessa e cerosa porção lipídica composta de ácidos micólicos. 
· Hidrofobicidade: Essa presença de ácidos micólicos torna a parede celular hidrofóbica (repele a água). Como os corantes da técnica de Gram são aquosos, eles não conseguem penetrar efetivamente na célula. 
· Álcool-Ácido Resistência (BAAR): Devido a essa estrutura cerosa, uma vez que o corante consegue entrar (geralmente através do calor na técnica de Ziehl-Neelsen), a célula resiste à descoloração mesmo quando tratada com uma solução forte de álcool-ácido. Por isso, são chamadas de Bacilos Álcool-Ácido Resistentes (BAAR). 
8 - A distinção entre as enterobactérias e os bacilos gram-negativos não fermentadores é essencial para a compreensão das características únicas desses dois grupos de bactérias. Qual é a característica que distingue as enterobactérias dos bacilos gram-negativos não fermentadores?
A - Capacidade de produzir enzima catalase.
B - Formação de cápsulas ao redor das células.
C - Organização em cachos.
D - Capacidade de fermentar carboidratos 
E - Crescimento em ambientes salinos 
Resposta: Letra D
Comentário:
A diferenciação entre esses dois grupos é o ponto de partida para a identificação de patógenos em amostras como urina, fezes e sangue.
· Enterobactérias: São microrganismos anaeróbios facultativos que possuem a capacidade de fermentar carboidratos (especialmente a glicose) para obter energia. No laboratório, essa característica é facilmente visualizada em meios diferenciais como o Ágar MacConkey, onde fermentadores de lactose (um carboidrato) produzem colônias rosas devido à acidificação do meio.
· Bacilos Não Fermentadores (BNF): Como o nome indica, são bactérias que não utilizam a fermentação como via metabólica para degradar carboidratos, obtendo energia por processos oxidativos ou outras vias. Um exemplo comum é a Acinetobacter baumannii, cujas colônias permanecem incolores ou amareladas no Ágar MacConkey por não fermentarem a lactose.