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* * Biotecnologia Msc. Edson Delatorre ANVISA Área 2 - Ciências Biológicas/Biomedicina delatorre.ioc@gmail.com Especialista em Regulação e Vigilância Sanitária Parte 3 * * Produção de anticorpos Fungos Proteínas exógenas Vírus Bactérias Patógenos Secreção de anticorpos Plasmócito Neutralização Linfócito B Maturação * * Hibridomas: fusão de células somáticas Célula B isolada Poucos dias de vida Imortalização transformação viral (exemplo: Epstein-Barr) fusão de células cancerosas para gerar híbridos ou “hibridomas” * * Produção de Ac monoclonais Etapas Imunização Fusão e seleção Triagem Produção de ascite Caracterização * * Imunização Imunógenos: proteínas, células, peptídeos antigênicos, peptídeo pequeno ligado a carreador Adição de adjuvante Produção de Ac monoclonais * * * * Selecionar o camundongo com a melhor resposta imune Remover as células B do baço Produção de Ac monoclonais * * Fusão e seleção Células de mieloma (da mesma espécie ou espécie diferentes) e linfócitos A fusão pode ocorrer de forma espontânea, mas com baixa frequência Agentes fusogênicos Vírus Sendai PEG (polietilenoglicol) Campos elétrico Produção de Ac monoclonais * * Seleção metabólica Após o processo de fusão Híbridos (heterocárion) Produção de Ac monoclonais * * Célula mieloma Célula B Heterocárion Hibridoma Três híbridos que serão selecionados Meio HAT * * * * 3. Triagem Hibridomas que produzem os anticorpos de especificidade adequadas ELISA Western Blot Imunofluorescência Etc Produção de Ac monoclonais * * 4. Produção de ascite Hibridoma cultivado em tumor ascítico Maior quantidade de anticorpo Purificação Diálise Produção de Ac monoclonais * * Caracterização Quantificação Isotipagem Reação com outros antígenos Imunoprecipitação, ensaior imunoenzimáticos, imunofluorescência, cromatografia Produção de Ac monoclonais * * Aplicações dos anticorpos monoclonais Detecção e tratamento de câncer Imunização passiva Testes diagnósticos Insumos laboratoriais * * Biomedicamentos Produtos farmacêuticos produzidos por células geneticamente modificadas A maioria dos biomedicamentos são Proteínas (ou peptídeos) Componente proteíco majoritário (conjugados) * * Biomedicamento Definição mais usada (Walsh, 2002): “Substância farmacêutica baseada em proteína ou ácido nucleico utilizada para terapia ou diagnóstico in vivo, produzida de forma independente da extração da fonte biológica nativa.” Walsh G (2002), Biopharmaceuticals and biotechnology medicines: an issue of nomenclature, European Journal of Pharmaceutical Sciences 15, 135–138 * * Biomedicamento Biofármacos em comercialização = proteínas terapêuticas: avanços no entendimento da base molecular das doenças revelaram a existência de proteínas com potencial terapêutico produzidas naturalmente pelo organismo em mínimas quantidades * * Evolução dos biomedicamentos Primeira geração: Proteínas com idêntica sequência de aminoácidos Voltadas para a reposição ou aumento do nível de proteínas endógenas Segunda geração: Fração crescente dos biofármacos aprovados recentemente Engenharia de proteínas propriedades terapêuticas planejadas Geração de um produto de ação mais rápida ou mais lenta Alteração do tempo de meia vida do produto Alteração da imunogenicidade do produto Desenvolvimento de proteínas terapêuticas híbridas * * Estratégias usadas em engenharia de proteínas e exemplos: Alteração da sequência de aminoácidos Insulina e t-PA Remoção de domínios da proteína Fator VIII modificado (Refacto) e t-PA Obtenção de moléculas híbridas (anticorpos) e proteínas de fusão Infliximab – anticorpo quimérico Enbrel – proteína fusionada Engenharia pós-traducional Glicosilação: EPO Aranesp Adição de PEG: interferon α2 peguilado * * Exemplos * * Exemplos Remoção do domínio B na molécula recombinante Manutenção da atividade coagulante Maior estabilidade Fator VIII completo (Inativo) Fator VIII incompleto (Ativo - FVIIIa ) * * Exemplos * * Células animais como sistemas de expressão Sistema de expressão atualmente majoritário para a produção de proteínas recombinantes: secretam a proteína no meio de cultivo facilidade de purificação modificações pós-traducionais carboxilação, hidroxilação, sulfatação, fosforilação e especialmente a glicosilação atividade biológica estabilidade imunogenicidade * * * * Processo de produção * * * * Biomateriais Biomaterial é definido como todo material utilizado para substituir - no todo ou em parte - sistemas biológicos metálicos cerâmicos poliméricos (sintéticos ou naturais) compósitos biorecobrimentos * * Biocompatibilidade não estimular ou provocar o mínimo de reações alérgicas ou inflamatórias Classificação substituição de tecidos moles substituição de tecidos duros materiais para sistemas cardiovasculares Biomateriais * * Biomateriais: Seleção Identificação das propriedades requeridas para a aplicação em questão Escolha da matéria prima e dos componentes Biocompatibilidade Não causar nenhum dano tecidual * * Biomateriais: Aplicações Implantes dentais Próteses mamárias Ligamentos artificiais e tendões Válvulas cardíacas Reparo de pele Implantes ósseos