Baixe o app para aproveitar ainda mais
Esta é uma pré-visualização de arquivo. Entre para ver o arquivo original
Prof. Eldo Campos Proteínas: Tradução • TRADUÇÃO DO RNAm • AÇÃO COMBINADA De TRÊS CLASSES DE RNA • O RNAm especifica a seqüência correta de aminoácidos na proteína • O RNAr forma os ribossomos, a maquinaria de produção de proteínas • O RNA transportador TRADUÇÃO • A maquinaria responsável pela tradução do mRNA em linguagem de proteínas é composta por quatro componentes básicos: • mRNAs; • tRNAs; • Aminoacil-tRNA sintetases; e • Ribossomos mRNA • O mRNA contém a seqüência de nucleotídeos do gene que será traduzido em proteínas. Código Genético • O código genético foi decifrado no início da década de 60 e é utilizado universalmente em todos os organismos vivos. • De acordo com o Código genético cada trinca de nucleotídeos do mRNA é um CÓDON; • Cada códon especifica um aminoácido ou um ponto de finalização. Código Genético • Quantos códons existem? • Quantos aminoácidos existem? • O código genético é degenerado, ou seja, um mesmo aminoácido pode ser codificado por mais de um códon. • No código genético 61 códons codificam aminoácidos e 3 são sinais de terminação. Código Genético TRADUÇÃO • A tradução inicia na extremidade 5’ da fase aberta de leitura (ORF – open-reading frame) e segue códon a códon até a extremidade 3’. • O códon de iniciação: •AUG (Met) - Todos os eucariotos. •AUG (Met), GUG (Val) e UUG (Leu) – em procariotos. • Códons de terminação: •UAA, UAG e UGA - Todos os organismos. • Qualquer segmento de mRNA poderia ser traduzido em três fases de leitura diferentes (3 ORFs), mas somente uma codifica a proteína específica. TRADUÇÃO TRADUÇÃO • Os mRNAs de eucariotos, geralmente, contêm apenas um ORF (mRNA monocistrônicos) • Nos eucariotos os ribossomos são recrutados pela guanina metilada do cap 5’ e iniciam o RASTREAMENTO pelo códon de iniciação. • Em procariotos os mRNAs podem possuir duas ou mais ORFs com produtos protéicos distintos (mRNA policistrônicos). TRADUÇÃO • Os mRNAs contêm uma seqüência curta de nucleotídeos que facilita a ligação do ribossomo, o RBS (sítio de ligação ao ribossomo – ribosome binding site) • A RBS está posicionada próximo ao sítio de terminação aumentando a eficiência de reutilização do ribossomo que completou a seqüência anterior. • As moléculas de tRNA possuem os anticódons e atuam como adaptadores entre os códons e os aminoácidos por eles definidos. tRNA • Assim como, mais de um códon pode especificar o mesmo aminoácido, um tRNA pode reconhecer mais de um códon. • Pode existir ainda o pareamento de bases por oscilação, onde o pareamento da terceira base não precisa ser exato . Novamente a redundância • A l i g a ç ã o d e u m a m i n o á c i d o a o s e u respectivo tRNA ocorre em duas etapas enzimáticas que são mediadas por aminoacil tRNA sintetases Aminoacil-tRNA Sintetases • A formação do aminoacil-tRNA é muito precisa, e depende de uma série de fatores: 1. As aminoacil-tRNA sintetases possuem afinidades específicas com a haste aceptora e a alça do anticódon. Aminoacil-tRNA Sintetases • A formação do aminoacil-tRNA é muito precisa, que depende de uma série de fatores: 2. O aminoácido correto apresenta maior afinidade pela fenda do sítio ativo da sua sintetase. Aminoacil-tRNA Sintetases • A formação do aminoacil-tRNA é muito precisa, que depende de uma série de fatores: 3. A aminoacil-tRNA remove os aminoácidos errados numa etapa de edição hidrolítica, num outro sítio de edição com maior especificidade. Aminoacil-tRNA Sintetases • O ribossomo é a máquina macromolecular que promove a síntese protéica. • O ribossomo lê o mRNA e direciona a síntese da proteína codificada. RIBOSSOMO • O ribossomo é uma ribozima composta por 2/3 de rRNA e 1/3 de proteínas, • Os rRNAs são responsáveis pela estrutura geral do ribossomo, pela capacidade de posicionar tRNAs sobre o mRNA e pela atividade catalítica na formação de ligações peptídicas. RIBOSSOMO RIBOSSOMO Procarioto RIBOSSOMO Eucarioto • O ribossomo possui três sítios de ligação com o tRNA: • Sítio A: sítio de ligação para o aminoacil-tRNA; • Sítio P: sítio de ligação para o peptidil-tRNA; • Sítio E (exit): sítio de ligação para o tRNA descarregado RIBOSSOMO Visão geral da tradução • Para a tradução ser iniciada são necessários pelo menos três eventos: Início da tradução 1. O ribossomo precisa ser recrutado para o mRNA; 2. Um tRNA precisa ser posicionado sobre o sítio P; 3. O ribossomo precisa ser posicionado sobre o códon de iniciação. • O reconhecimento do mRNA pelo ribossomo é diferente em procariotos e eucariotos: Início da tradução 1. Procariotos: é mediada pelo pareamento de bases entre o sítio de ligação do mRNA (RBS) e o rRNA 16S do ribossomo Início da tradução 2. Eucariotos: existe um complexo de pré-iniciação 43S que começa pelo reconhecimento do 5’-cap e a ação dos fatores de iniciação (IF) Início da tradução 2. Eucariotos: Adicionalmente, existe a formação de um complexo entre o eIF4F e a calda de Poli-A. A formação do círculo aumenta a eficiência de tradução. Início da tradução • Efetivamente a iniciação é catalisada por FATORES DE INICIAÇÃO (IF) da tradução Tradução em Procariotos • Com os três fatores de iniciação (IF1, IF2, IF3) ligados à subunidade menor, ocorre a ligação do mRNA e do tRNA iniciador (fMet-tRNAifMet - N-formilmetionina) à esta subunidade para formar o COMPLEXO DE INICIAÇÃO 30s. Alongamento da tradução em Procariotos • Uma vez formado o complexo de iniciação 70S, a síntese polipeptídica pode iniciar. • Duas proteínas auxiliares funcionam como fatores de alongamento (EF): • EF-Tu e EF-G-GTP Alongamento da tradução em Procariotos Reação Peptidil Transferase Alongamento da tradução em Procariotos Alongamento da tradução em Procariotos • Existem 3 mecanismos que garantem o pareamento correto entre o tRNA e o mRNA. 1. Complementaridade Alongamento da tradução em Procariotos 2. Hidrólise do GTP e liberação do EF-Tu Alongamento da tradução em Procariotos 3. Acomodação – rotação para ligação peptídica Terminação da tradução em Procariotos • A tradução é finalizada pelos códons de terminação • Os códons de terminação são reconhecidos por fatores de liberação (RFs – release factors) que ativam a hidrólise do peptidil-tRNA, liberando o polipeptídio. Liberação da Proteína ACOPLAMENTO ENTRE TRANSCRIÇÃO E TRADUÇÃO EM PROCARIOTOS
Compartilhar