Aula_7_-_Microscopia_eletronica_2

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MICROSCOPIA ELETRÔNICA 
Citologia – aula 7 
Kátia F. M. De Resende 
Universidade Federal de Lavras 
2013 
No microscópio de luz: 
 
Objetiva 100x: LR = K .  = 0,612. 0,55 = 0,27µm 
 AN 1,25 
 
Importância do Microscópio Eletrônico 
Importância do Microscópio Eletrônico 
Material Tamanho médio 
Bactéria 1-2 µm 
Célula animal 10 – 20 µm 
Célula vegetal 50 µm 
Núcleo 3-6 µm 
Ribossomo 0,025µm - 25 nm 
Membrana 0,01µm - 10 nm 
Vírus HIV 0,13µm - 130 nm 
Limite de resolução da 
objetiva de 100X: 
 
0,27µm 
(270 nm) 
 
- No microscópio de luz: 
 
Objetiva 100x: LR = K .  = 0,612. 0,55 = 0,27µm 
 AN 1,25 
 
Importância do Microscópio Eletrônico 
-No microscópio eletrônico: 
 
LR = 0,02µm = 2 nm = 0,2 Å 
100 vezes menor que o do microscópio de luz 
- luz visível: 700 e 400nm 
- UV: <400nm 
- elétrons: 0,004nm 
RESOLUÇÃO- menor distância discernível 
entre dois pontos 
• Olho nú- 0,1mm 
• Microscopia de luz- 0,27µm - 270nm 
• MEV- 10 0A 
• MET- 1- 2 0A 
 
Objetiva 
Amostra 
Observador 
 
Ocular 
 
 
 
 
Objetiva 
Amostra 
 
 
Condensador 
 
Fonte de luz 
Caminho da luz X Caminho do elétron 
Microscópio de luz 
Microscópio eletrônico 
de varredura 
Microscópio eletrônico 
de transmissão 
Esquema de uma “lente eletrônica” gerada por um 
solenóide excitado por uma corrente elétrica. Note que 
a trajetória dos elétrons sofre também uma rotação 
Elétron primário 
Elétron secundário 
Catodoluminescência 
Transmitidos 
Retro-espalhados 
Raio X 
Espécime 
e primário 
e secundário 
e Retoesp. 
Raio X 
Interação elétron/amostra 
MEV 
MET 
Tipos de imagens 
Preparo de amostras biológicas MEV 
• Coleta 
• Fixação 
• Pós fixação 
• Desidratação 
• Secagem ao ponto crítico 
• Adesão aos stubs e metalizar 
• Avaliação 
Preparo de amostras biológicas MEV 
Preparo de amostras não metálicas 
para MEV 
• Amostras não metálicas, mas rigídas como 
plásticos, minerais, materiais biológicos 
rígidos(insetos, pólen, madeira etc) 
 
• Colar nos stubs e metalizar 
Preparo de amostras biológicas MET 
• Coleta 
• Fixação 
• Pós-fixação ósmio---contrastação 
• Desidratação 
• Embebimento em resina 
• Resina 30%overnight 
• Resina 50%/8h 
• Resina 70% overnight 
• Resina 100% / 24h 
• Resina 100%/24-72h à 650 C 
• Preparo das amostras emblocadas 
• Cortes ultra-finos 
• Contrastação--- telinhas 
• Avaliação 
Detalhe de uma telinha de cobre com película de plástico e secções. 
Núcleo da célula 
Poro nuclear 
Cloroplasto 
MITOCÔNDRIA 
Complexo de Golgi 
Tricoma glandular 
Estômato 
Fotos MEV 
Pêlo 
Formiga 
Superfície da pele 
Nematoíde 
Imagem de microscopia de varredura eletrônica 
(cores adicionadas) de micélio fúngico com as hifas 
(verde), esporângio (laranja) e esporos (azul), 
Penicillium sp. (aumento de 1560 x). 
 
Células do sangue 
Foto de microscopia eletrônica de varredura (MEV)- 
20.000 X-mostra as células do sangue: eritrócitos 
(em vermelho), um leucócito linfócito (em amarelo) 
e plaquetas (em lilás) 
Vírus HIV atacando leucócito 
Linfócito Citotóxico atacando uma célula 
cancerosa. Os linfócitos T citotóxicos são 
importantes leucócitos que atacam células que se 
tornam anormais, geralmente tumorais. A presente 
foto de MEV aumentada 20.000 X- linfócito T 
citotóxico (amarelo) atacando célula tumoral 
(vermelho). 
Histórico Microscopia 
• 1590- Janssens – Microcopia de luz- 20-30X 
 
• Sec. 18/19-M. composto- HOOKe- 300X 
• 1873-Abbe e Hellmotz- LR  
• 1924-Broglie elétrons-onda 
• 1929 –Bush – lentes eletrônicas 
• 1930-primeiro MET Ardenne, Ruska-Knoll-Berlin 
• 1939-primeiro MET comercial –Siemens 
• 1945-1950- desenv,. MET Alemanha, Holanda, 
França, Inglaterra, EUA, Japão (Pesquisa) 
• 1965- MEV- pesquisa