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CENTRO UNIVERSITÁRIO ESTACIO DO CEARÁ CURSO NUTRIÇÃO DISCIPLINA: MICROBIOLOGIA BÁSICA ALINE FARIAS NORONHA COLORAÇÃO DE MICRORGANISMO Fortaleza-Ceará 2016 COLORAÇÃO DE MICRORGANISMO Objetivo: Mostrar o aprendizado da aula no laboratório Orientador: Eliane Curso: Nutrição Disciplina: Microbiologia básica Fortaleza-Ceará 2016 4 INTRODUÇÃO Grande parte dos microrganismos presente em nosso cotidiano, e os estudados em laboratórios, são microrganismos e quase sempre invisíveis. Por isso há necessidade do uso do microscópio e principalmente dos métodos de coloração específicos. Coloração significa corar os microrganismos com um corante que enfatiza certas estruturas. Essas técnicas de coloração servem para mostrar as várias estruturas dos microrganismos, identificar suas estruturas internas e externas (como flagelos, membranas, cápsulas, entre outros) e ajudar a identificar e separar microrganismos similares. As colorações podem ser feitas com um ou mais corantes. Para colorar um microrganismo é necessário que esteja fixado à lâmina para visualização no microscópio. Existem dois tipos de coloração: Coloração Diferenciada: envolve mais de um corante, permitindo distinguir diferentes estruturas e tipos de células microbianas, pois, coram de cores diferentes, dentre elas podemos destacar a coloração de Gram, que tem o objetivo de detectar a parede celular da bactéria. Coloração Simples: onde se utiliza só um tipo de corante 5 OBJETIVOS Confeccionar lâminas microbiológicas para observação de forma e arranjo microbiano ao microscópio. Executar a técnica de coloração de gram e diferenciar microrganismos gram-positivos e gram-negativos. Relacionar a técnica de coloração de gram com a composição da parede celular. 6 MATERIAL Para esse procedimento foram utilizados os seguintes materiais: Lâminas Alça de inoculação Papel de filtro bico de bunser Amostras biológicas Cristal violeta 2% Lugol Solução descorante(água/acetona) Fuscina Água destilada Microscopio MÉTODOS - Confeccionar lâminas fazendo esfregaços a partir de amostras em meio liquido e sólido - Fixar os microrganismos nas lâminas, passar na chama 3 vezes. -Adicionar os corantes e reagentes de gram na seguinte ordem: 1) Passar cristal violeta, aguardar 1 minuto e lavar com água destilada. 2) Passar lugol, aguardar 1 minuto e lavar com água destilada. 3) Lavar com solução descolorante e após lavar com, água destilada. 4) Passar fuscina, aguardar 20 segundos e lavar com água destilada. 5) Secar com papel filtro. 6) Observar ao microscópio e analisar forma, arranjo e coloração de gram. 7 RESULTADO Levando em conta que as células gram positivas ficam com a coloração azulada e as gram negativas com a coloração avermelhada, tivemos os seguintes resultados com as seguintes bactérias: Estafilococos – Gram positiva (+) Estreptobacilos – Gram positiva (+) Salmonella – Gram negativa (-) DISCUSSÃO Comparando com outros experimentos que utilizaram as mesmas técnicas, podemos observar que ela foi bem sucedida, sem erros, e tivemos os resultados esperados. Levando em conta alguns outros experimentos relatados, que não conseguiram identificar a bactéria, possivelmente por cometer erros na coloração, não seguindo a ordem correta, não respeitando os tempos necessários para a ação dos corantes e reagentes, e etc. CONCLUSÃO A partir desta prática experimental, foi possível identificar a parede celular dos microrganismos utilizados no experimento. As bactérias que deram resultado de Gram positiva são bactérias que tem a parede celular composta somente de peptidioglicano ficando assim com a cor azulada. As bactérias que deram resultado de Gram negativo são as bactérias que tem a parede celular composta por uma fina camada de peptidioglicano, com uma membrana plasmática externa, ficando então com a coloração avermelhada. 8 REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS TORTORA, G. J.; FUNKE, B. R.; CASE, A. L. Microbiologia. 8ª edição, 1ª reimpressão, Artmed, Porto Alegre, 2006 STAINIER, R.Y.; DOUDOROFF, M. & ADELBERG, E, Metodos de coloraciones, In: Microbiologia. 2º ed.Madrid,1977, Aguilar S. de ediciones. MICHAEL J. PELCZAR JR. & E.C.S. CHAN & NOEL R. KRIEG. Microbiologia: Conceitos eAplicações - vol. 1. 2ª Ed. MOURA RA. Meios de cultura. In: Moura, R.A., coord. Técnicas de Laboratório. 3 ed. São Paulo: Atheneu; 2002. SUMARIO INTRODUÇÃO ----------------------------------------------------------------4 OBJETIVOS --------------------------------------------------------------------5 MATERIAL---------------------------------------------------------------------6 MÉTODOS----------------------------------------------------------------------6 RESULTADO-------------------------------------------------------------------7 DISCUSSÃO--------------------------------------------------------------------7 CONCLUSÃO------------------------------------------------------------------7 REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS---------------------------------------8
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