Introdução de Citologia Clínica

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Métodos de estudo – Citoquímica/ Histoquímica
 Consiste na identificação e na localização dos diferentes compostos químicos dentro da célula.
 Para qualquer determinação citoquímica de uma substância, devem ser cumpridas algumas condições:
A substância original deve ser imobilizada e visualizada pelo microscópio em sua localização celular original;
A substância deve ser identificada por um procedimento que seja específico para ela ou para o grupo químico ao qual pertence.
Métodos de estudo – Citoquímica/ Histoquímica
Identificação das substâncias
Reações químicas similares às usadas em química analítica, adaptadas aos tecidos;
Reações específicas para certos tipos de substâncias;
Métodos físicos.
Métodos de estudo – Citoquímica/ Histoquímica
Detecção de lipídios
Para evitar a solubilização dos lipídios em solventes orgânicos utiliza-se cortes histológicos por congelação.
O ósmio é um fixador que insolubiliza os lipídios, sendo usado na microscopia eletrônica.
Corante: Sudan Black B; Sudan II,III,IV; Oil-red-O ( solúveis em lipídios e relativamente solúveis em álcool 70%).
Estruturas coradas: triglicerídeos, fosfolipídeos, mielina, lipofucsina.
Métodos de estudo – Citoquímica/ Histoquímica
 
Sudan Black B
Métodos de estudo – Citoquímica/ Histoquímica
 
Oil-red-O
Métodos de estudo – Citoquímica/ Histoquímica
Detecção de carboidratos
Reação do PAS (Ácido periódico-reativo de Schiff)
É preparado tratando-se a fucsina básica, que contém parafucsina com ácido sulfuroso, idealizado por McManus.
A parafucsina se transforma em um composto incolor que é novamente corado pelos grupos aldeído presentes em carboidratos, no DNA e em certos lipídios.
É positivo em células vegetais para o amido, celulose, hemicelulose e as pectinas. Nos animais para glicogênio, mucinas, mucoptns, quitina e ácido hialurônico.
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Esophageal candidiasis, PAS stain
 
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Detecção de ácidos nucléicos
Os métodos dependem das propriedades dos três componentes que constituem seus nucleotídeos.
Reação de Feugen
Depende da presença de desoxirribose.
Ocorre hidrólise ácida fraca com ácido clorídrico (extrai o RNA que desaparece) o mesmo não acontecendo com o DNA.
A reação extrai as purinas (AeG) do DNA e libera os grupos aldeído que reagem com o reativo de Schiff.
Métodos de estudo – Citoquímica/ Histoquímica
 
 
Em pH baixo cora preferencialmente DNA.
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Colonia de Epistylis. Macronucleos teñidos con verde metilo. Contraste de fases 
Métodos de estudo – Citoquímica/ Histoquímica
Detecção de proteínas
Atividade enzimática de enzimas (fosfatases, hidrolases, oxidases, desidrogenases) evidenciados microscopicamente.
No método de Gomori (fosfatase alcalina) são empregados como substratos ésteres fosfóricos de glicerol.
O íon fosfato liberado por hidrólise enzimática se converte em um sal metálico insolúvel, em presença de cálcio que é convertido em sulfeto de chumbo, prata metálica, sulfeto de cobalto.
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Túbulos renais mais corados em negro e corpúsculos renais que contêm glomérulos de Malpighi bem claros. Nos glomérulos de Malpighi ocorre a filtração do sangue.
Gomori (100x)
Métodos de estudo – Citoquímica/ Histoquímica
Cortes transversais dos túbulos renais onde se percebe os limites celulares, os núcleos das células e as áreas com fosfatase alcalina em negro.
A fosfatase alcalina aparece mais concentrada junto à luz dos túbulos renais
Gomori (400x)
Métodos de estudo – Citoquímica/ Histoquímica
- Células dos túbulos renais com limites celulares, núcleos e fosfatases alcalina, bem nítidos.
- Fosfatase alcalina fica localizada no interior de lisossomos.
- O rim foi utilizado para tais observações porque as células dos túbulos renais são ricas em lisossomos onde se situa a enzima fosfatase alcalina
Gomori (1000x)
Métodos de estudo – Citoquímica/ Histoquímica
Collagen and nerve cells have stained blue. Muscle, elastic fibers and blood stained red. Cytoplasm of cells stained red. Nuclei stained purple. The stain can be used to differentiate fibrous or nerve tissue from muscular tissue
Tricrômico Gomori (100x)
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Imunohistoquímica
Se baseia na detecção de substâncias teciduais por meio de anticorpos.
Faz-se uma solução com anticorpos, sobre um corte histológico. 
A preparação é lavada para eliminar os anticorpos não ligados. 
Empregar sistemas de visualização, geralmente do tipo enzimático, fluorescentes ou elétron-densas (ouro coloidal ou ferritina).
Métodos de estudo – Citoquímica/ Histoquímica
Aplicações diagnósticas
Fatores Prognósticos de Câncer de Mama (RE, RP, cerbB2/HER2, p53, PCNA...)
Perfil Hormonal em adenoma de hipófise 
Imunofenotipagem de linfomas e sarcomas 
Detecção de sítio primário de adenocarcinoma 
Caracterização de neoplasia indiferenciada 
Tumores de Células Germinativas 
Tumores de Pequenas Células 
Fatores prognósticos de câncer 
Detecção de agentes infecciosos 
GIST
Métodos de estudo – Citoquímica/ Histoquímica
Métodos de estudo – Citoquímica/ Histoquímica
Métodos de estudo – Citoquímica/ Histoquímica
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Calretinina em mesotelioma epitelióide
Métodos de estudo
 Citometria de fluxo: é uma técnica utilizada para contar, examinar e classificar partículas microscópicas suspensas em meio líquido em fluxo. Permite a análise de vários parâmetros simultaneamente, sendo conhecida também por citometria de fluxo multiparamétrica. Através de um aparelho de detecção óptico-eletrônico são possíveis análises de características físicas e/ou químicas de uma simples célula.
Métodos de estudo
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