Espectrometria de massa ionização

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Universidade Estadual do Rio Grande do Norte - UERN
Faculdade de Ciências Exatas e Naturais - FANAT
Departamento de Ciências Biológicas - DeCB
Licenciatura em Ciências Biológicas
Bioquímica Molecular
Docente: Francisca Marta Machado Casado de Araújo
Espectrometria de Massa
Discentes: 
Silvia Zilmara; 
Wagner Silva; 
Yandra Thais.
Mossoró – RN
Outubro de 2016
Sequenciamento de proteínas 
 A sequencia de aminoácidos de uma proteína pode ser a partir da determinação da ordem dos aminoácidos na cadeia peptídica, ou inferida a partir da sequencia de DNA do gene.
Como ocorre o sequenciamento de proteínas
Determinar o número e tipos de subunidades presentes na proteína
Clivar as pontes de enxofre (se houver) 
Purificar cada uma das subunidades
Determinar a composição de aminoácidos de cada subunidade 
Determinar o resíduo N-terminal
O QUE É ESPECTROMETRIA DE MASSAS? 
Espectrometria de massas é uma técnica analítica extremamente valiosa em que moléculas em uma amostra são convertidas em íons em fase gasosa, que são subsequentemente separados no espectrômetro de massas de acordo com sua razão massa (m) sobre a carga (z), m/z. 
Espectro de massa
Técnicas de ionização 
Electrosspray
Transferência de íons para fase gasosa 
ionização/dessorção a laser assistida por matriz 
Analise de biomoléculas 
As características fundamentais de um espectrômetro de massas são:
Produção de íons em fase gasosa;
Aceleração dos íons a velocidades específicas em um campo elétrico;
Separação dos íons por um analisador de massas; 
detecção de cada íon em um m/z específico. 
Componentes de um espectrômetro de massas
Espectrometria de massa:
Métodos de ionização:
 Depende da complexidade da amostra:
Por dessorção;
Por evaporação.
O alto campo elétrico criado na ponta do capilar causa a emissão de pequenas gotículas carregadas;
O solvente é evaporado durante o processo de spray 
Na próxima etapa ocorrerá a análise de massa.
Ionização por electrospray: 
Fonte: Google imagens.
Ionização/dessorção a laser assistida por matriz:
Fonte: Google imagens.
A matriz (composto orgânico) é misturada com a amostra;
A energia dos pulsos do laser são absorvidos pela matriz;
Ocorrendo excitação e evaporação da mistura, formando um gás que será analisado.
Fragmentação
Obtidas informações estruturais;
Como ocorre?
Selecionar um íon especifico;
Fragmentar a molécula através de colisão;
Analisar os fragmentos.
Utilizam-se instrumentos do tipo:
Triplo-quadrupolo 
Quadrupolo-TOF
Detectores de massa
Íons de trajetória estáveis são detectados de duas formas:
Copo de Faraday;
Multiplicador de elétrons.
Copo de Faraday
Mais simples;
Íons positivos saem do espectrômetro entram no copo metálico que está aterrado;
Íons neutralizados ao serem chocados;
Amperímetro entre o copo e a terra;
Todos os íons são detectados com a mesma eficiência de acordo com suas massas;
Limitado a baixas pressões.
Multiplicador de Elétrons
Baixas pressões;
Bastante preciso;
Tem formato de um cone, onde os íons entram na boca do cone;
Boca fortemente negativa, acelerando os íons positivos;
Atingem a superfície do cone, ejetando elétrons da superfície do cone.
Uma vez que as potenciais são rampeadas a uma razão constante, o gráfico da variação temporal produz um espectro de massas para as razões massa/carga
Cada pico obtido pode ser relacionado a uma correspondente razão massa/carga
Detectores de massa
Banco de dados
Identificação de proteínas pode ser feito usando ferramentas de buscas gratuitas:
Mascot da matrix science
Protein prospector
Uma vez identificada a proteína pode-se observar um resumo completo sobre ela.
Conclusão
A espectrometria de massa é utilizada em partículas, para a determinação das massas de partículas elementares e núcleos atômicos ou a detecção de partículas ainda desconhecidas.
Na bioquímica a espectrometria de massa é utilizada em proteoma e metaboloma, onde o uso corresponde, em grande parte em química. 
OBRIGADO!