CONTROLE MICROBIOLÓGICO. AMOSTRAGEM E PREPARAÇÃO DE AMOSTRAS

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CONTROLE MICROBIOLÓGICO. AMOSTRAGEM E PREPARAÇÃO DE AMOSTRAS 
 
 
CONTROLE MICROBIOLÓGICO. AMOSTRAGEM E PREPARAÇÃO DE AMOSTRAS 
AMOSTRA DE REFERÊNCIA: Amostra de produto acabado, conservado pelo fabricante 
no mínimo até 12 (doze) meses após a data de vencimento, devidamente identificada. A 
quantidade de amostra deve ter o dobro das unidades requeridas para efetuar todas as análises 
prescritas. 
AMOSTRA REPRESENTATIVA: Amostra formada por um número de unidades calculadas 
com base em critérios racionais, visando garantir que a amostra representa o universo do 
material amostrado. 
BIOCARGA (BIOBURDEN): Número de microrganismos presentes no produto. 
TIPOS DE AMOSTRAS: 
- Estéreis: Medicamentos e Correlatos em recipientes hermeticamente fechados: 
- Não Estéreis: Água Potável 
 Medicamentos: Administrados por Via Ora, Tópicas, etc; 
 Cosméticos 
LOCAL: Adequado para não causar a contaminação física, química e microbiológica. 
CUIDADOS:Seguir POP aprovado - Paramentação adequada - Utilizar recipientes e materiais 
estéreis - Conservar as amostras sob refrigeração, etc. 
QUANTIDADE DE AMOSTRAS: Ver Tabela completa FB 5ª Ed. 
Produtos não estéreis: 
Lotes maiores que 1.000 unidades: Coletar 10 unidades 
Lotes com 200 a 1.000 unidades: Coletar 1% do lote 
Lotes menores que 200 unidades: Coletar 2 unidades 
Lotes menores que 100 unidades: Coletar 1 unidade 
Controle de processo: coletar 3 amostras do início, 4 do meio e 3 do fim do processo 
Produtos estéreis 
Número mínimo de unidades a serem testadas em função do tamanho do lote. 
Varia conforme o produto: Parenterais, Antibióticos, Produtos Oftálmicos, etc. 
Exemplo: Preparações Parenterais (Teste de Esterilidade): 
Número de unidades do lote ............ Número mínimo de unidades a serem testadas. 
Até 100 ............................................ 10% ou 4 unidades (o que for maior) 
Acima de 100 até 500....................... 10 unidades 
Acima de 500 ..................................... 2% ou 20 unidades (o que for menor) 
Parenterais de grande volume............. 2% ou 10 unidades (o que for menor) 
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Classificação das Bactérias conforme temperatura ótima de crescimento: 
01 - Mesófilas aeróbias: Crescimento ótimo em temperaturas entre 20ºC e 40ºC. 
02 - Termófilas: Crescimento ótimo em temperaturas entre 45ºC e 55ºC. 
03 - Psicrófilas Crescimento ótimo em temperaturas entre 0ºC e 15ºC. 
PREPARO DAS AMOSTRAS NÃO ESTÉREIS: 
Inativar os conservantes: Inativar os conservantes antes dos testes. 
Ex: Conservante/Inativante (Ver tabela completa FB 5ª Ed) 
Cloro/Tiossulfato de Sódio (0,5%p/v); Formaldeído/Histidina (0,1%p/v no diluente ) 
Fenóis e derivados/Polissorbato 80 (1,0%p/v no diluente). 
Amostra Hidrossolúvel: Transferir 10 g ou 10 mL da mistura de amostra para 90 mL de 
solução tampão cloreto de sódio-peptona - pH 7,0 ou solução tampão fosfato - pH 7,2, Caldo 
Caseína-soja ou outro diluente adequado. 
Amostra Insolúvel (Natureza não lipídica): Preparar uma suspensão de 10 g ou 10 mL da 
mistura de amostra em solução tampão cloreto de sódio-peptona, pH 7,0 ou caldo de caseína-
soja ou um outro diluente adequado. 
Produtos de natureza lipídica: 
 Método de filtração por membrana - Dissolver 1 g ou 1mL da mistura de amostra em 100 
mL de miristato de isopropila esterilizado por filtração em membrana 
Método de contagem em placa – Transferir 10 g ou 10 mL da mistura de amostra para frasco 
contendo não mais que 5 g de polissorbato 20 ou 80 estéril ou outro agente tensoativo não 
inibitório. Acrescentar diluente para 100 mL 
 
.Diluições seriadas decimais das amostras: 
 Diluições decimais seriadas: São diluições decimais preparadas em série.Exemplo: 
Preparar diluições decimais de uma amostra até 10-3: 
a) Preparar uma diluição 1:10 da amostra em solução salina peptonada, isto é, misturar 1 mL 
da cultura em fase estacionária com 9 mL de solução salina peptonada (10-1). 
b) A partir da diluição 1:10 preparada conforme item a , após homogeneização em agitador 
de tubos, tomar 1 mL e misturar com 9 mL de solução salina peptonada, obtém a diluição 
1:100 da amostra (10-2). 
c) A partir da diluição 1:100 preparada conforme item b, após homogeneização em agitador de 
tubos, tomar 1 mL e misturar com 9 mL de solução salina peptonada, obtém-se a diluição 
1:1000 da amostra(10-3). 
Ex: Foi semeado 1,0 mL da amostra diluída 10-3 . O resultado obtido foi 200 UFC na 
amostra diluída. O resultado na amostra não diluída é: 200 x 1.000 = 200.000 UFC/mL 
 
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Amostra não diluída: ≥ 300 UFC/mL p/ bactérias ou 100 UFC/mL p/ fungos 
 (Diluir1/10: Fator de diluição: F = 10). 
Amostra diluída 1/10: condição acima (Diluir novamente 1/10: diluição final 1/100) 
Amostra diluída. 1/100: Nº UFC x F = UFC/mL de bactérias na amostra não diluída. 
 Ex: 60 UFC/mL x 100 = 6.000 UFC/mL 
Amostras semi-sólidas: Diluir 1g da amostra/100 mL diluente 
Condições Favoráveis à Multiplicação dos Microrganismos: 
- Nutrientes (meio de cultura adequado) 
- Temperatura (adequada) 
- Umidade (adequada) 
Condições Desfavoráveis à Multiplicação dos Microrganismos: 
- Elevada concentração (Hiperosmolares) 
- Presença de preservantes 
- Nutrientes (meio de cultura inadequado) 
- Temperatura (inadequada) 
- Umidade (ausência) 
Danos Causados ao produto pela presença de Microrganismos. 
- Ao Produto: 
- Destruição dos componentes do produto (Inativação, decorrente do metabolismo dos 
 microrganismos. 
- Alteração do pH (inativação do PA, separação de fases de emulsões, precipitação, etc) 
- Alteração do pH, cor, odor, sabor. 
- Alteração da viscosidade de géis, cremes, suspensões, etc. 
- Ao Usuário: 
- Possibilidade de infecção. Ex: Diarréia (VO), Conjuntivite (Colírio), etc. 
- Possibilidade de Septicemia (Injetáveis) 
- Ausência de efeito terapêutico (Inativação do PA) 
Produtos que necessitam o controle microbiológico: 
- Produtos Estéreis: Teste de esterilidade. 
- Produtos não estéreis: 
 - Matérias-primas: Água, Princípios Ativos, adjuvantes Farmacotécnicos 
 - Produtos acabados.