Exercício- Controle de Qualidade Microbiológico

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Controle de qualidade Microbiológico 
Exercício de Fixação
Defina Biossegurança.
A biossegurança é o conjunto de ações voltadas para a prevenção, minimização ou eliminação de riscos inerentes às atividades de pesquisa, produção, ensino, desenvolvimento tecnológico e prestação de serviços, visando à saúde do homem, dos animais, a preservação do meio ambiente e a qualidade dos resultados.
O que determina a lei 8.974/1995 e o decreto 1.752/1995?
A lei 8.974/1995 estabelece regras para o trabalho com DNA recombinante no Brasil, incluindo pesquisa, produção e comercialização de OGMs de modo a proteger a saúde do homem, animais e meio ambiente. O decreto 1.752/1995 formaliza a Comissão Técnica Nacional de Biossegurança- CTNBio e define suas competências no âmbito do Ministério da ciência e tecnologia.
Determine os parâmetros semelhantes usados na análise microbiológica de alimentos/cosméticos/ medicamentos.
Água livre; pH; osmolaridade; halofilismo; luminosidade; controle dos equipamentos; matérias primas; pessoal.
Disserte sobre microrganismos de referência.
Cepas bacterianas: Isto deriva dos fenômenos espontâneas ou induzidos da natureza ou mesmo artificialmente, chamado: Mutação Genética; Cepas padrão: São cepas destinadas ao controle de qualidade bacteriológico. Apresentam resposta conhecida a uma série de provas laboratoriais, entre as quais bioquimismo, reação tintorial ao Gram, morfologia e resposta a antibióticos.
Caracterize amostragem, qual a quantidade em mL ou g de amostragem devem ser separadas para análise microbiológica.
Nos processos contínuos, a segmentação como início, meio e fim do processo deve estar contemplada na amostragem; Considerando o produto terminado, toma-se via de regra duplicata ou triplicata da amostra, representando início, meio e fim do processo de enchimento, admitindo que após o fechamento do material de acondicionamento a introdução de contaminantes não mais existirá; O transporte deve ser em condições adequadas de temperatura; A recomendação das principais farmacopéias, para enriquecimento na pesquisa de patogênicos é, geralmente, de 10 g(mL), além da contagem total em igual quantidade; No caso do volume total da amostra ser de 10 g(mL), ou inferior, este total deve ser analisado. A tomada de ensaio pode ser reduzida para 1 g(mL) em amostras de produtos de alto valor agregado.
Escreva a sequência de preparo da amostra de pós, líquidos, aerossol, sabonete, supositório, pomadas, óleos bifásicos e monofásicos.
A homogeneização da amostra é fundamental no sentido de conduzir a transferência para etapas subsequentes de forma representativa, ainda que a mesma tenha sido diluída por exemplo em solução salina peptonada (0,1 %), solução tamponada (pH 7,0) ou caldo lactose; (pó e líquidos). Assim, no caso de produtos em aerossol, em que a tomada de amostra pode considerar o peso da embalagem antes e após expelir alíquotas do produto e propelente, este será naturalmente eliminado; Forma de manuseio operacional trabalhosa é o sabonete, que exige fragmentação criteriosa, seguida de leve aquecimento, recurso também aplicável no caso de supositórios e pomadas; Produtos com fase oleosa exigem a adição de agente tensoativo, cuja concentração deve ser cuidadosamente definida para evitar efeito inibidor sobre possíveis microrganismos contaminantes.
Explique os métodos de contagem dos microrganismos que podemos fazer no laboratório para o controle microbiológico de água ou produtos ou medicamentos.
Contagem de células totais: Este método baseia-se no preenchimento com uma suspensão de células a contar, de uma cavidade situada entre uma lâmina e uma lamela. Esta cavidade, localizada no centro da lâmina, encontra-se dividida em quadrados de dimensões bem definidas e, assim, de volume conhecido. Filtração por membrana: É a técnica mais indicada para crescimento de heterotróficos em placas, além de permitir avaliar uma ampla faixa de volume (por exemplo – de menos que 1mL a 10 L). No entanto é uma técnica mais dispendiosa, se comparada à semeadura por superfície ou por profundidade, além de exigir equipamentos apropriados. É geralmente empregado para amostras líquidas. Força-se a passagem da amostra por uma membrana de nitrato ou acetato de celulose com poros de 0,45µm. As membranas são, posteriormente, transferidas para superfície do meio de cultura que propicie o crescimento de bactérias (ágar caseína) e de bolores e leveduras (ágar sabouraud). Método do Número Mais Provável (NMP): É reservado para as determinações bacterianas que não possam ser realizadas por um dos outros métodos e quando se espera que o produto apresente baixa densidade bacteriana. Consiste em proceder três diluições seriadas, em caldo caseína soja, de 1:10, incubar os tubos por 3 a 5 dias, realizar a leitura observando a turvação dos tubos e verificar a interpretação conforme tabela elaborada para o método disponível nos compêndios oficiais. Pesquisa de E. coli: O princípio da técnica para pesquisa de todos os patógenos é a transferência da amostra para um meio de enriquecimento, seguido da incubação na temperatura ótima do patógeno a ser pesquisado e posterior transferência de uma alíquota do meio enriquecido para um meio seletivo. Caso ocorra crescimento com formação de colônias características, procede-se a identificação da espécie. Semeadura em profundidade (Pour plate): Consiste na adição de um mililitro da amostra no fundo de uma placa de petri, posteriormente verte-se o meio específico contendo ágar à 45°C sobre a amostra, procede-se a homogeneização e incubação na temperatura ideal. Esta técnica é simples, de baixo custo e pode ser utilizada tanto com meios de cultura não seletivos para contagem de micro-organismos mesófilicos em placa, como com meios de cultura seletivos, para pesquisa de micro-organismos específicos. Semeadura em superfície (spread plate): Consiste no espalhamento da amostra na superfície de um meio ágar solidificado. Este espalhamento pode ser feito com auxílio de uma alça bacteriológica, produzindo estrias no meio, ou mesmo espalhando-se uma quantidade com auxílio de uma pipeta estéril e posterior incubação das placas em temperaturas adequada.
Descreva os limites microbianos aceitos em cosméticos tipo I e tipo II, preparações de uso parenteral, colírios, pomadas para queimaduras.
As fontes de contaminação microbiana podem ser agrupadas em fontes diretas, tais como matérias-primas, água, materiais de embalagem; e indiretas, como os equipamentos, ambiente e operadores. As preparações estéreis, as formas líquidas e semissólidas compreendem a maioria das preparações parenterais e oftálmicas, respectivamente, cujo conservante tem a finalidade de manter a condição de esterilidade dos produtos. No que diz respeito as formulações cosméticas, estas em sua maioria são preparações semissólidas com base aquosa, necessitando de sistema conservante adequado.
Tipo I Produtos de uso infantil
Micro-organismos mesófilos aeróbios totais: preferencialmente < 100 UFC/g ou mL de produto, máximo de 500 UFC/g ou mL de produto; Produtos para a área dos olhos ou mucosas-Ausência de Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, coliformes totais e fecais em 1 g ou mL de produto; No caso de talcos, ausência de Clostrídios sulfito-redutores
Tipo II Demais cosméticos Micro-organismos mesófilos aeróbios totais: preferencialmente < 1000 UFC/g ou mL de produto, máximo de 5000 UFC/g ou mL de produto; Ausência de Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, coliformes totais e fecais em 1g ou mL de produto; No caso de talcos, ausência de Clostrídios sulfito-redutores.
Indique quais fatores afetam a sobrevivência e o crescimento de microrganismos em produtos.
Fatores Intrínsecos:
Atividade de água.
pH.
Potencial de Oxirredução.
Composição.
Presença de fatores antimicrobianos naturais.
Estruturas biológicas.
Interações entre os microrganismos.
Fatores Extrínsecos:
Temperatura.
Atmosfera.
Umidade relativa do ambiente.
Cite algumas substâncias que podem ser produzidas pelos microrganismos que podem deterioraros produtos.
Staphylococus Aureus
Enzimas produzidas:
Coagulase
Catalase
Hialuronidase
Fibrinolisina
Lipases
Nucleases
Penicilinase
A produção de a-amilase é particularmente relevante em Bacillus spp.; Estes micro-organismos, juntamente com Aspergillus e Penicilium spp., são as fontes mais comuns de: Proteinase e Peptidase. A produção de lipase é largamente distribuída e ocorre mais comumente entre os fungos; Por isso, se dá a associação da deterioração à presença de fungos em cremes e emulsões.
Caracterize carga microbiana efetiva.
Quantidade mínima de microorganismos capazes de causar infecções, que podem ser agrupadas em fontes diretas, tais como matérias-primas, água, materiais de embalagem; e indiretas, como os equipamentos, ambiente e operadores. A qualidade microbiana do produto final pode depender amplamente da qualidade das matérias-primas (fármacos e excipientes).
Quais legislações envolvidas no controle microbiológico da água.
A análise microbiológica de água mineral é um procedimento laboratorial que atesta a qualidade e a potabilidade da água, identificando a presença de agentes patológicos e substâncias químicas prejudiciais à saúde. O órgão que regulamenta padrões de qualidade para a análise microbiológica da água é a Anvisa. 
As regulamentações envolvidas no processo são:
-Resolução CONAMA nº 357/2005, que dispõe sobre a classificação dos corpos de água e diretrizes para o seu enquadramento, bem como estabelece as condições e padrões de lançamento de efluentes, e dá outras providências.
-Decreto n°79.367, de 09/03/1977, que dispõe sobre normas e o padrão de potabilidade de água
-Decreto n°5.440, de 04/05/2005, que estabelece definições e procedimentos sobre o controle de qualidade da água de sistemas de abastecimento e institui mecanismos e instrumentos para a divulgação de informação ao consumidor sobre a qualidade da água para o consumo humano.
Caracterize as bactérias do grupo dos coliformes.
Existem dois tipos de coliformes: totais e termotolerantes. O grupo coliformes totais é formado por enterobactérias capazes de fermentar a lactose, com produção de gás a 35°C. Essa capacidade de fermentar a lactose, com formação de gás em meios de cultura, é a base para os métodos tradicionais de detecção de coliformes totais. Esses microrganismos são comuns em ambientes de fabricação de alimentos, podendo se tornar parte da microbiota resistente. O grupo coliformes termotolerantes, é um subgrupo dos coliformes totais. Este grupo é restrito às bactérias capazes de fermentar a lactose a 44,5-45,5°C com produção de gás. A princípio, essa definição abrangia somente as enterobactérias de origem fecal (E. coli), porém, hoje se sabe que esse grupo inclui membros de origem não fecal (cepas de Klebsiella pneumoniae, Pantoea agglomerans, Enterobacter cloacae e Citrobacter freundii). Consequentemente, a presença de coliformes termotolerantes em alimentos não quer dizer necessariamente que exista contaminação de origem fecal.
Descreva o passo a passo para a coleta de água para análise microbiológica.
Para análise microbiológica de água os frascos devem ser esterilizados; Para coleta de água clorada utilizar frascos com tiossulfato de sódio; Para a coleta de água com teor alto de metais, deve-se coletar a água em frascos adicionados de EDTA (ácido etilenodiaminotetraacético).
Explique a importância de se adicionar tiossulfato de sódio a 10% em amostras cloradas.
O tiossulfato de sódio é utilizado para coleta de águas potáveis com o intuito de inibir a ação do cloro presente. Para análises microbiológicas, as amostras de águas cloradas devem ter o cloro residual neutralizado imediatamente após a coleta, para impedir a continuação do seu efeito bactericida sobre a microbiota presente.
Quais meios de cultura são usados para a pesquisa de microrganismos na água.
São utilizados os meios:
Caldo lactosado simples e concentrado;
Caldo lactosado verde brilhante Bile a 2%
Caldo Ec;
Plate count Agar
Descreva os diferentes tipos de água para uso farmacêuticos e seus parâmetros de qualidade.
Água potável: Limpeza em geral e fonte de alimentação de sistemas de tratamento. Água para injetáveis: Como veículo ou solvente de injetáveis, fabricação de princípios ativos de uso parenteral, lavagem final de equipamentos, tubulação e recipientes usados em preparações parenterais. Usada como diluente de preparações parenterais. Água purificada: Produção e medicamentos e cosméticos em geral farmácias lavagem de material, preparo de soluções reagentes, meios de cultura, tampões, diluições, microbiologia em geral, análises clínicas, técnicas por Elisa, radioimunoensaio, aplicações diversas na maioria dos laboratórios, principalmente em análises qualitativas ou quantitativas menos exigentes (em%). Em CLAE (em%). Água ultrapurificada: Dosagem de resíduos minerais ou orgânicos, endotoxinas, preparações de calibradores, controles, SQR, espectrometria de absorção atômica, ICP/IOS, ICP/MS, espectrometria de massa procedimentos enzimáticos, cromatografia a gás, CLAE (ppm ou ppb), biologia molecular e cultivo celular etc, Eventualmente em preparações farmacêuticas que requeiram água de alta pureza.
Quais meios foram usados na análise microbiológica da água em nossa aula prática? E quais os nomes dos testes usados na análise de água?
Caldo Lactosado de concentração dupla; caldo Lactosado de concentração simples; caldo Lactosado Verde Brilhante Bile a 2%. Teste presuntivo e teste confirmatório.