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EXAME ANDROLÓGICO E TÉCNICAS DE COLHEITA DE SÊMEN Rodrigo F. Bittencourt Avaliação da aptidão reprodutiva de um macho destinado a reprodução fundamenta-se na observação da SAÚDE GERAL, SAÚDE HEREDITÁRIA, SAÚDE GENITAL, POTENTIA COEUNDI e POTENTIA GENERANDI. INDICAÇÕES: - seleção e comercialização de reprodutores; - avaliação do potencial reprodutivo pré-estação de monta; - diagnóstico de sub ou infertilidade; - diagnóstico de ocorrência da puberdade; - preservação de sêmen. Introdução • 1.3. TÓPICOS E ROTEIRO • 1.3.1 -IDENTIFICAÇAO DETALHADA: • . do animal • . do proprietário e propriedade • 1.3.2 - EXAME CLÍNICO : • . anamnese • . geral • . do sistema genital (prepúcio, penis, glandulas anexas, partes tubulares, testiculos, epididimos e escroto) • . do comportamento: sexual (libido) e indole • 1.3.3 - ESPERMOGRAMA : • . método de colheita do ejaculado • . características físicas do ejaculado • . caracteristicas morfológicas dos espermatozóides • . outros elementos • 1.3.4 - DIAGNÓSTICO E/OU CONCLUSÃO • 2.2 - EXAME CLÍNICO • 2.2.1. ANAMNESE OU HISTÓRIA CLÍNICA • OBJETIVO DO EXAME • a) regime de atividade sexual (monta natural / doador de semen); • b) frequência de ejaculação; • c) número de fêmeas cobertas pelo reprodutor; • d) número de fêmeas gestantes, índice de retorno ao cio; • e) condições de manejo e alimentação; • f) tempo de aparecimento das alterações; • g) evolução do processo em curso; • h) tratamentos executados e resposta clínica; • i) situações sanitária e reprodutiva do rebanho; • j) data e condições da aquisição e procedência do reprodutor; • 2.2.2. EXAME CLÍNICO GERAL • Animal em estação e em movimento: Sistemas nervoso, respiratório, circulatório, digestivo, locomotor 2.2.2. EXAME CLINICO GERAL Avaliação dos sistemas nervoso, respiratório, circulatório, digestivo, “locomotor”. Cortejo e Monta Patologias de sistema locomotor que influenciam na capacidade de monta • 2.2.3. EXAME DO SISTEMA GENITAL • Inspeção e palpação: Dimensões, consistência, simetria, mobilidade das partes do sistema genital, além da compatibilidade das mesmas com o desenvolvimento corporal e a idade. • ANATOMIA DO SISTEMA GENITAL MASCULINO • Glândulas anexas • ANATOMIA DO SISTEMA GENITAL a)Escroto, b) Testículos, c) Epidídimos e d) Cordões espermáticos (Animal contido em estação) ANATOMIA DO SISTEMA GENITAL a)Escroto, b) Testículos, c) Epidídimos e d) Cordões espermáticos (Animal contido em estação) • a) ESCROTO • Animal em estação • Existência de lesões (ectoparasitas, verrugas, ferimentos, cicatrizes, abcessos), mobilidade, sensibilidade, espessura, temperatura e aderências. • b) TESTÍCULOS • - forma: oval, alongada. • - simetria: devem ser simétricos quanta ao tamanho e a forma. • - consistência: deve ser tensa-elástica, com variações desde flácida até firme • - mobilidade: túnica vaginal visceral e parietal • - sensibilidade: Há dor? • - temperatura: inferior a temperatura corporal. • - posição, tamanho e biometria testicular: • c) EPIDÍDIMOS • Constituídos por cabeça, corpo e cauda. Exame semelhante ao testículo. • d) CORDÕES ESPERMÁTICOS • Cistos, varicocele ou processos inflamatorios, posiçao testicular (termoregulação). Contenção e Avaliação Exame do Testículo Mensuração da CE •Antero posterior •Latero medial •Altura Eixos: Exame do Testículo Biometria Testiular Granuloma Espermático • e) PREPÚCIO • Deve ser examinado lateralmente. Pele e tecido subcutâneo com aumentos de volume, de temperatura, existência de ferimentos ou cicatrizes, abertura do óstio prepucial com passagem livre do pênis e examinar a mucosa. • f) PÊNIS • Em repouso (retraído) e exposto (após excitação sexual). Verifica-se tamanho, mobilidade, mucosa, secreções e presença de anormalidades. EXAME DO SISTEMA GENITAL Prepúcio – Lesões, cicatrizes, aderências, patologias. Exame do pênis • g) Exame da Genitália Interna • Glândulas anexas O exame deverá ser feito por Ultrassonografia trans-retal Avaliação da saúde do sistema genital do macho baseada US como ferramenta complementar ↑ Acurácia do Exame Clínico Acurácia? Glândulas anexas caprinos e ovinos? Exame Clínico Introdução Exame Ultrassonográfico: Animal em estação contido Transdutor Setorial Frequência de 5 a 7,5 MHz Genitália Externa Parênquima Testicular Forma Homogênea com padrão moderado de ecogenicidade; Mediastino Testicular Estrutura Linear Central hiperecóica (variável); Observado 87% dos animais e 77% dos testículos Cauda do Epidídimo Claramente visível (plano utilizado); Ecogenicidade heterogênea e inferior ao parênquima testicular Corpo do Edipídimo Geralmente não visualizado Cabeça Epidídimo Bem visualizado; ecogenicidade semelhante a cauda Não visualizado em toda extensão (plexo pampiniforme) Genitália Externa Plexo Pampiniforme Facilmente distinguido do parênquima testicular Ecogenicidade inferior Contém regiões circulares anecoicas (vasos) Genitália Externa 2.2.4. Estudo do comportamento: libido e indole: última etapa ex. clínico Espermograma: Colheita e Avaliação do Sêmen • Colheita do sêmen • Vagina artificial ou eletroejaculador • Avaliação do sêmen in natura: • Banho maria a 30-37oC • Avaliação volume, cor e aspecto. • Avaliação motilidade, vigor e turbilhonamento (MO 20X) • Alíquotas para patologia, concentração e exames complementares. Arranque final e ejaculação Padrão de ejaculação em ruminantes Condições adequadas? ELETROEJACULAÇÃO Nove tipos de eletroestimulação com os seguintes parâmetros estudados: Sêmen com melhor qual. e maior quant. e menor estresse do animal foi com: estímulos a cada 7s por 3s, iniciando com 1volt e acrescendo 1volt a cada estímulo. Ejac. com max. de 5,1volts (CAMERON, 1977). Protocolo: ELETROEJACULADOR Eletro: Ejaculado com < conc/mL porém, > volume => Número total de sptz por ejac. semelhante a VA. % de defeitos, MP e MT. * Maior variação individual MARCO-JIMÉNEZ et al. (2005) Eletro: Menor eficiência (80%) – Falta de resposta ao eletroestímulo e contam. com urina. Qualidade e quant. de sptz semelhantes. * < (P<0,05) % de células vivas com lesão acrossomal e de células vivas capacitadas. Espermograma: Colheita e Avaliação do Sêmen • Colheita do sêmen • Vagina artificial ou eletroejaculador • Avaliação do sêmen in natura: • Banho maria a 30-37oC • Avaliação volume, cor e aspecto. • Avaliação motilidade, vigor e turbilhonamento (MO 20X) • Alíquotas para patologia, concentração e exames complementares. Motilidade - Movimento progressivo, circular, oscilatório, retrógrado; - Porcentagem de células; - lâmina e lamínula (pré-aquecidas 37ºC); - microscópio (100 a 200 X); - diluição (citrato de sódio 2,9% ou solução fisiológica, Ringer, diluidores). Exame espermático Microscopia óptica com aumento de 20 ou 10X Motilidade espermática Diferentes padrões de motilidade espermática: “Sofrimento espermático” – Vigor baixo Diferentes padrões de motilidade espermática: Movimento circular-fechadoDiferentes padrões de motilidade espermática: Movimento circular-fechado-retrógrado Análise computadorizada IVOS 12 – Hamilton Thorn - CLASSIFICAÇÃO DE WALTON Todos ou quase todos os movimentos exibem movimentos progressivos 5 75% dos espermatozóides tem movimentos progressivos 4 Metade dos espermatozóides com movimento progressivo e oscilatório e metade de imóveis 3 Só existem espermatozóides com movimentos oscilatórios e um grande número de imóveis 2 Todos os espermatozóides são imóveis 1 Ausência de espermatozóides 0 Exame espermático: Vigor Avaliação computadorizada 5 = deslocamento intenso, ondas espessas; 4 = ondas com rápidos movimentos; 3 = ondas aparentes, movimentos moderados; 2 = ondas em movimentos pouco perceptíveis; 1 = não tem ondas, células imóveis. Turbilhonamento: - Ondas de espermatozóides formando verdadeiras cristas, que aparecem como linhas mais escuras nos pontos em que se encontram com as outras - relação entre concentração de espermatozóide e motilidade - gota em microscópio (10X) Exame espermático Concentração - Aspecto (cor); - Câmara de Neubauer-hemocitômetro; - Microhematrócrito; - Espectrofotômetro. Exame espermático Concentração: - Aspecto (cor); Cremoso-marmóreo: representa mais de 1 (um) bilhão de spz/ml; leitoso: de 500 milhões a 1 (um) bilhão de spz/ml; opaco, leite/aquoso: de 200 milhões a 500 millões spz/ml; aquoso-translúcido: menos de 200 milhões spz/ml. Exame espermático Concentração: - Câmara de Neubauer-hemocitômetro; - Amostra diluída (d) em formol salino, água; Exame espermático [sptz/ml]=n*5*10*d*1000 [sptz/ml]= 20*5*10*400*1000 [sptz/ml]= 20 x (20 x 106) Câmara de Neubauer [sptz/ml]=d* n*5*10*1000 Diluição de 100 vezes: exemplo: 1 amostra em 99 de formol 10 amostras em 990 de formol N: número de sptz contados 5: normalmente são cinco quadrados da câmara que são contados. 10: correção para a altura da câmara – distância entre o fundo da câmara e a lamínula (0,1 mm) 1000: correção de mm3 para ml Morfologia Espermática Microscopio óptico Microscópa com contraste de fase Morfologia espermática Análise das características morfológicas do sêmen Métodos: - Lâmina úmida; - Lâmina corada. - Lâmina úmida: formol salino ou glutaraldeído; microscópio de contrate de fase (1000 ou 1250X); 200 células; - Lâmina corada: esfregaço de sêmen fresco; Williams, Panótico rápido, Karras (acrossomo) 200 células; Exame espermático Panótico Rápido 1. Alcool absoluto 2. Solução cor de laranja 3. Corante: solução violeta Exame espermático Microscopio óptico Microscópa com contraste de fase Morfologia espermática e Concetração Análise das características morfológicas do sêmen Tipos de defeitos: - Defeitos Maiores: max 20% - Defeitos Menores: max 20% - Defeitos Totais: max 30% Exame espermático - Defeitos Primários; - Defeitos Secundários; - Defeitos Totais. - Subdesenvolvidos anormais; - Formas duplas; - Cauda enrolada na cabeça; - Cabeça solta anormal; - Defeitos de acrosomo; - Pouch formation (vacúolos); - Cabeça piriforme; - Cabeça estreita na base; - Cabeça de contorno anormal; - Defeito de peça intermediária; - Gota proximal; - Cauda fortemente dobrada com gota; - Cauda fortemente enrolada ou dobrada; Defeitos Maiores - Cabeça estreita; - Cabeça pequena normal; - Cabeça gigante, curta ou larga; - Cabeça solta normal; - Implantação abaxial; - Gota distal; - Cauda simplesmente dobrada ou enrolada; - Cauda enrolada na porção terminal. Defeitos Menores Alterações morfológicas do espermatozóide Exames complementares: Pesquisa de Leucócitos Viabilidade espermática: Supravital Sondas Fluorescentes Sêmen in natura: Diluído ou não, mas sem processo de conservação. Melhores resultados. Sêmen congelado: Passou pelo processo de cong-descongelação (-196oC para +37oC). Deposição intrauterina e o mais próximo da ovulação (bons resultados). Viab. 12 a 18h; Sêmen refrigerado x tempo de resfriamento (15 oC por até 8h, acima deve ser à 5oC. ( 48h): Fêmeas superovuladas! SÊMEN CONGELADO, RESFRIADO OU IN NATURA ARMAZENAMENTO – SÊMEN CONGELADO OBRIGADO
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