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Resumo 1° Prova de Bacteriologia – Leticia Wzorek Enterobactérias: bacilos gram -, caralase +, oxidase -. Cresce em ágar sangue, chocolate, mcconkey. O que é micobactéria? Cite exemplos A micobactéria é um bacilo gram-positivo, delgado, acidorresistente, geralmente de crescimento lento e de que existem várias espécies micobactéria As micobactérias são ácido-álcool resistentes (BAAR), o que significa que durante os procedimentos de coloração pela fucsina, não se deixam descorar por uma mistura de álcool e ácido clorídrico. Esta propriedade parece decorrer da firme fixação da fucsina a certos lipídeos da parede. O método para se verificar se uma bactéria é BAAR, é o de Ziehl-Neelsen. A álcool-ácido resistência é unia propriedade do organismo intacto, como também de sua estrutura química, particularmente de seu conteúdo em ácido micólico. Algumas micobactérias, tais como o bacilo da tuberculose, contêm mais ácido micólico do que as espécies saprofíticas e isso pode justificar o fato de eles serem mais fortemente ácido resistentes. Micobacterium tuberculosis e leprae Explique os locais de inibição dos antimicrobianos e cite exemplos Inibição da função da parede celular: A parede celular de bactérias gram positivo e negativo possuem peptídeoglicano, os antimicrobianos irão inibir através de B-lactâmicos a síntese de peptídeoglicano causando morte do microrganismo. Entretanto algumas bactérias que possuam B-lactamase conseguem quebrar o anel B-lactâmico inviabilizando assim o antibicrobiano. Exemplos: amoxicilina, oxaciclina Inibição da função da membrana celular: A função da membrana celular é transportar ativos, permeabilidade seletiva e comportar metabólitos, o antimicrobiano irá alterar a integridade da membrana permitindo a saída de macromoléculas e íons. Causando sua morte. Exemplos: Polimixinas, anfotericina B Inibição da síntese de proteínas: O aminoglicosídeo vai interagir com uma proteína na subunidade 30S do ribossomo da bactéria e irá adicionar um aminoácido errado no peptídeo. Deixando a proteína não funcional e causando sua morte. Exemplo: Aminoglicosídeo Inibição da síntese de ácido nucleico: Rifamicina - Inibe a RNA polimerase e impede a síntese de RNA. Quilonas - Inibe a DNA girasse e impede a síntese de DNA. Sulfas – Entram no lugar do PABA, na reação do ácido fólico e impedem o crescimento de novas células. Qual o mecanismo do teste de nitrocefim? O disco Cefinase está impregnado com a cefalosporina cromogénea, nitrocefin. Este composto exibe uma mudança de cor muito rápida de amarelo para vermelho, à medida que a ligação amido no anel beta-lactâmico é hidrolisada por uma β-lactamase. Quando uma bactéria produz esta enzima em quantidades significativas, o disco corado de amarelo muda para vermelho na área onde foi efetuado um esfregaço do isolado. Apesar de outras penicilinas e cefalosporinas poderem ser utilizadas como substratos para enzimas específicas, o nitrocefin possui o maior espectro de susceptibilidade e sensibilidade de todos os β-lactâmicos disponíveis no mercado. Não é conhecida nenhuma reação com outras enzimas microbianas. Descreva todas as partes da um procarionte Flagelo: motilidade Cápsula: virulência, determinação do subtipo bacteriano Fímbrias: aderência Pili: Conjugação Ribossomos: síntese de proteínas Grânulos: fonte de energia Membrana citoplasmática: transporte de moléculas, padrão e armazenamento de energia Parede celular: identificação bacteriana Genes essenciais: fundamentais para a vida bacteriana Plasmídeo: cromossomos Explique as formas de mudança genética de uma bactéria Mutação: Alteração na estrutura química ou física do DNA Conjugação: Transferência mediada por plasmídeo Transformação: DNA livre pe tomado pela célula Transdução: DNA bacteriano é transferido mediada por um vírus O que é Operon Lac? Por interações com o meio o promotor é ligado ou inativo. Se não há lactose o promotor fica inibido. No caso de surgir lactose ela só poderá ser metabolizada se a proteína inibitória (Lac i) for removida do promotor. Isso acontece pela presença de halolactose que se liga a inibitória que muda sua conformação e se desliga do promotor. Como se faz o controle de qualidade em meios de cultura para urina? Utiliza-se o teste de esterilidade para avaliar se o meio realmente não está contaminado. Uma bactéria com concentração conhecida é inoculada em meios de cultura, se ela crescer o meio esta desempenhando sua função. Se o meio mudar de coloração e não crescer nenhum microrganismo, o meio não está estéril. Como devem ser as colônias e as cores dos meios para cultura de urina? CLED: meio diferencial que seleciona bactérias Lac + e Lac – e também BGN e CGP. Para bactérias Lac + o meio fica ácido, dando coloração amarela as colônias de bactérias. Já Lac – o meio fica alcalino, dando colônias azul ou verde. MC CONKEY: meio diferencial e seletivo, ou seja apenas reconhece BGN, sendo assim reconhece Lac + e Lac -. Sendo Lac + colônias róseas e Lac – colônias incolores. Como é o controle de qualidade de uma alça bacteriológica? Deve ser realizado a cada mês e a cada novo lote recebido. Gravimétrico: o controle é feito pelo peso de um determinado numero de alçadas medido em balança analítica, utiliza-se para cada alça 0,01mL, e adiciona-se 20 vezes o conteúdo da alça cheia de agua a papeis de filtro no prato da balança. Realiza-se as pesagens, verificando a calibração. Calorimétrico: Um determinado numero de alçadas carregadas com solução de corante (Azul de Evan) é medido através de absorbância e conferido com a curva de calibração preparada com diluições sucessivas do corante. Como é o controle de autoclave? A autoclave deve ser inspecionada com um controle biológico que funciona da seguinte maneira: Um frasco contendo um caldo nutritivo, indicador de pH e espórulos deve ser adicionado junto a autoclave e outro do mesmo frasco deve ser adicionado fora a autoclave. O ideal para o controle é que o frasco de fora permaneça amarelo, ou seja houve crescimento bacteriano, já que o esporulo cresceu e consumiu o caldo e o de dentro da autoclave permaneça na cor original purpura/rosa, indicando que não houve crescimento do esporulo. Pode ser realizado também um método químico com fitas que marcam uma faixa preta na temperatura que 119,5°C, através da fusão do anidrido succinio. Diga como proceder com uma amostra de urina, desde a coleta até a aplicação em placa. A amostra deve ser colida em um frasco estéril, com boca larga e bem vedado e na primeira urina da manha, ou então com um intervalo de 5h sem urinar. Deve ser desprezado o jato inicial e o final, sendo importante para a análise apenas o jato intermediário. Deve ser realizada uma higiene apropriada para evitar contaminação. O transporte deve ser feito de maneira rápida, caso a amostra fique em temperatura ambiente durante o transporte deve ser realizado os testes em no máximo 1h após a coleta. Se a amostra está mantida em uma temperatura de 8 a 2°C o tempo de espera para os teste pode ser de até 24h. E em menores temperaturas pode ser de alguns dias. Para o processamento da amostra deve ser realizados anteriormente o controle de qualidade de alça, autoclave, câmara de fluxo, placas e os demais materiais utilizados. Após isso deve ser realizada uma análise microscópica e macroscópica, a seleção do meio, analisar as condições de crescimento, semeadura, gram, identificação com provas bioquímicas e antibiograma. Descreva os tipos de meios existentes, seletivo, diferencial,... Meio simples: são meios que crescem microrganismos que não possuem muitos requisitos. Apenas o caldo nutritivo já é suficiente para ele Meio seletivo: é um meio que seleciona microrganismos e inibe o crescimento de outros, nele crescem microrganismos exclusivos para aquele meio. Exemplo: Mc Conkey Meio diferencial: é um meio que permite a diferenciação de microrganismos semelhantes. Exemplo: Agar sangue, Cled Meio enriquecido: possuem nutrientes específicos para aqueletipo de bactéria, exemplo ágar ovo. Qual é a diferença de resistência adquirida e intrínseca? Resistência intrínseca é uma resistência natural do microrganismo, como por exemplo não ter parede celular, não sendo inibido por B-lactâmicos. Resistência adquirida é causada por transformações genéticas como mutação, translocação, transdução e transcrição. Não é adquirido pelo antimicrobiano e sim por condições que favoreçam essas transformações. Qual a diferença de antibicrobiano e antibiótico? Antimicrobiano é sintetizado Antibiótico é produzido pelos próprios microrganismos Descreva os testes possíveis para antibiograma Difusão em ágar = disco de fusão = Kirby Bauer: Utiliza-se ágar Muller Hilton. Pega várias colônias e as dilui em um caldo até ficar com turvação correta. Com o swab preenche completamente o agar, sem deixar espaço sem colônias. Após isso adiciona discos de fusão embebidos com antimicrobianos. A bactéria deve estar na fase log. Deixar incubado por 18h ou mais e verificar o halo que se forma envolta do disco, pode ser resistente, intermediário ou sensível, dependendo da classificação da tabela CLSI. Outro método utiliza o teste de concentração inibitória mínima. Onde colônias são selecionadas, adicionadas em uma diluição e lê a concentração mínima de turbidez.
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