DOC 20170606 WA0001

Prévia do material em texto

CULTURA DO SNC
A meningite e uma das infecções mais comuns do sistema nervoso central (snc). As meningites agudas são causadas por Bactérias ( meningite bacteriana aguda ) ou por vírus ( meningites agudas virais ou assépticas ) . 
 
 
MICRORGANISMOS MAIS COMUMENTE ENVOLVIDOS 
 
 
MATERIAL CLINICO E COLETA 
 
ü A amostra deve ser colhida em tubo estéril e encaminhada ao laboratório a temperatura ambiente ( 20 a 25°C ).
ü O volume mínimo recomendável para o isolamento de bactérias e de 2 ml , e para fungos e micobacterias e 7ml , porem volumes menores podem ser aceitos . 
ü Se mais de um tubo for coletado , encaminhar para o laboratório de microbiologia a segunda porção coletada , evitar a primeira porção , que deve ser utilizada para dosagens bioquímicas . 
 ANTES DE REALIZAR A COLETA DA AMOSTRA :
v Deve ser feita antissepsia da pele primeiro com álcool a 70% e depois clorexidina alcoólica a 5% . 
v O liquor pode ser obtido de diferentes formas , ou colhido por punção lombar entre a 3ª e a 4ª ou entre a 4ª e a 5ª vértebra lombar, e são retirado três frascos estéreis sem anticoagulante. ou obtido de derivações ventriculares . A informação de como esta amostra foi obtida e importante para a melhor interpretação do resultado .
 
Esse exame vai analisar as células , as características bioquímicas e a presença de bactérias através da bacterioscopia e cultura , para descartar ou confirmar o diagnostico de meningite . 
 
A realização deste exame é composto pelas três etapas, a pré analítica, analítica e pós analítica.
 
v A pré-analitica : verifica o percentual de amostras com volume inadequado ou enviado em condições inadequadas , monitora a qualidade da coleta .
v Analitica : controla o observador , o método e os meios de cultura empregados .
 
v Pós analítica : é a análise dos resultados e a emissão dos laudos.
 
PROCEDIMENTO LABORATORIAL 
Parâmetros que auxiliam na interpretação da cultura de LCR( liquido cefalorraquidiano).
v Contagem de leucócitos 
v Células predominantes 
v Dosagem de proteína 
v Dosagem de glicose 
v Dosagem de lactato
 
LACTATO 
ü normal em meningites de etiologia viral
ü aumentado nas de etiologia bacteriana 
PESQUISA DE ANTIGENOS 
 
ü Em casos de infecção aguda , pode ser solicitado a pesquisa de antígenos diretamente no LCR ; 
ü Essa pesquisa pode ser realizada utilizando –se kits comerciais pela metodologia de aglutinação em látex;
ü Os antígenos mais comumente pesquisados são os de : Nisseria meningitidis A,B,C,Y, W 135 e E. Coli K1, S. pneumoniae , Haemophilus influenzae tipo B , Streptococcus agalatiae e Croyptococus neoformans.
 
A sensibilidade do método e variável dependendo do kit empregado :
 
Ø oscila em torno de 59 a 100% S. pneumoniae
Ø 78 a 100% para Haemophilus influenzae
Ø 97% para Streptococcus agalatiae
Ø 22 a 93% para Nisseria meningitidis
 
OBS : resultado negativo da pesquisa não e um diagnostico definitivo e alguns autores não recomendam a pesquisa direta de antígenos no liquor como método diagnostico único , mas sim a realizar o gram e a cultura .
 
METODO DE GRAM ( bacterioscopia) 
 
Ø Microscopia direta 
· Coloração pelo método de gram ;
· Coloração pelo método de ziehl- neelsen;
A técnica de coloração Gram em análises clínicas é usada principalmente para identificar preliminarmente a morfologia das bactérias ou para estabelecer se há um número significativo de bactérias nas amostras clínicas.
MEIOS DE CULTURA 
· Agar chocolate : Ágar Chocolate (CHOC)
 Utilidades: para o crescimento de micro-organismos exigentes. Exemplos: Haemophilus spp., Neisseria spp.
 Interpretação: Cor original: castanho escuro (chocolate). Colônias de pequeno a médio, com pigmento amarelo: sugestivo de Neisseria spp, Branhamella catarrhalis ou Moraxella spp. Colônias pequenas e delicadas, pigmento creme claro: sugestivo de Haemophilus spp.
· Agar sangue : - Ágar Sangue (AS)
 Utilidades: isolamento de micro-organismos não fastidiosos, verificar hemólise dos Streptococcus spp. e Staphylococcus spp., etc.
 
Interpretação: Cor original: vermelho. Alfa hemólise: halo esverdeado ao redor das colônias semeadas (lise parcial dos eritrócitos). Beta hemólise: halo transparente (lise total). Gama hemólise (sem hemólise): ausência de halo (eritrócitos íntegros).
 OBS: Os meios de cultura permitem o crescimento de micro-organismos, possibilitando a sua identificação e análise.
A cultura do liquor e ( Padrão ouro )
 OBS:
Quando há requisição de coleta de liquor, seria ideal a coleta de pelo menos três tubos, a fim de que o liquor possa ser analisado pelo setor de bioquímica, hematologia e microbiologia. Quando não há indicação específica no pedido, o tubo 1 deve seguir para a bioquímica (não é o indicado para a cultura, pois é aquele que tem mais chance de contaminação); o tubo 2, para microbiologia e testes sorológicos; o tubo 3, para hematologia; e outros tubos, para demais procedimentos. Quando essa rotina não é seguida, é imperativo que um tubo seja enviado inicialmente à microbiologia, para que a amostra possa ser processada de forma estéril. De preferência, a amostra deve ser colhida antes da antibioticoterapia.
Processamento
 Amostras com volume superior a 1 mL devem ser centrifugadas (de preferência, com o uso de citocentrífuga) e o sedimento deve ser utilizado para realização de bacterioscopia e semeadura, enquanto o sobrenadante é destinado à realização das provas de detecção de antígenos bacterianos.
 trata-se de material que deve ser aceito até com volume inferior ao recomendado e, nesse caso, deve-se priorizar o número de testes que será realizado. Outro ponto importante é incluir obrigatoriamente uma nota no final do laudo documentando que a coleta de volume foi inferior ao preconizado.
Para cultura geral, utilizam-se ágar sangue e ágar chocolate incubados por até 48 horas em temperatura de 35 a 37°C, em atmosfera de 5 a 10% de CO2 , que permitem o isolamento de patógenos como Streptococcus pneumoniae, Neisseria meningitidis, Haemophilus influenzae (hoje mais dificilmente isolado) e enterobactérias, entre outros. Para Listeria monocytogenes, uma vez que a temperatura de incubação de 4°C é preferencial para seu crescimento, pelo menos em crianças abaixo de 1 ano, deve-se considerar incluir uma placa suplementar de ágar sangue.
A cultura do liquor deve ser acompanhada de bacterioscopia da amostra; esse procedimento tem especificidade acima de 97% e sensibilidade que varia de 25% (para concentrações de bactéria 103 UFC/mL) a 97% (para concentra- 107 ções de bactéria > 105 UFC/mL).
A probabilidade de visualizar bactérias pode ser aumentada com o uso de citocentrífuga .
Apesar de questionável, a cultura também pode ser acompanhada da pesquisa de antígenos bacterianos. Este teste não é superior à bacterioscopia e pode ter resultados falso-positivos que levam a terapêutica e hospitalização inadequadas, mas pode auxiliar como teste rápido de detecção de patógenos em meningite aguda bacteriana e na análise de consistência da cultura. Sua melhor indicação é para pacientes em uso de antibioticoterapia e com bacterioscopia negativa. Existem vários kits comerciais com essa finalidade e que têm como princípio a aglutinação com látex. As vantagens do teste incluem rapidez e facilidade de realização, além de não utilizar equipamento especial. A sensibilidade também é variável de acordo com o agente, sendo de 67 a 100% para S. pneumoniae, 50 a 93% para N. meningitidis e 69 a 100% para Streptococcus agalactiae. De qualquer maneira, um teste negativo não afasta infecção. Para cultura de micobactérias, a coleta de volume superior a 5 mL está associada a melhor sensibilidade do teste. Se a solicitação for exclusiva para esse grupo de micro-organismos, podem-se aceitar até 2 horas como prazo de recebimento da amostra .
Pode ainda ser feita a cultura para fungos, que visa a isolar principalmente Cryptococcus neoformans, Coccidioides immitis, Blastomyces dermatitidise Candida spp em pacientes hospitalizados. Os meios de cultura recomendados são o ágar Sabouraud e Mycosel com tubos incubados a temperatura ambiente e a temperatura entre 35 e 37°C. O período de incubação dessas culturas é de até 21 dias. Para o rápido diagnóstico de Cryptococcus neoformans, podem-se utilizar também a coloração de tinta da China e a detecção de antígenos por meio de partículas impregnadas com 108 látex. Esse teste no liquor é mais sensível do que no soro; tem sensibilidade e especificidade acima de 90%, porém pode ter resultados falso-positivos e falso- -negativos em pacientes HIV positivos, por exemplo.