Bacterioscoscopias microbiologia clinica

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Características Morfotintoriais
BACTERIOSCOPIAS DIRETAS
• Exame a Fresco
• Coloração de Gram
• Coloração de Ziehl-Neelsen
• Outras – Ex.: Tinta da China
Bacterioscopias diretas
• Vantagens
– Rápidos – podem atender a urgência de casos;
– Baixo Custo
– não requerem equipamentos ou reagentes sofisticados/caros 
– Fácil execução
– Mas com a devida obediência à técnica, capacitação profissional 
e interesse 
– Podem ser bastante preditivos quando positivos
– Podem auxiliar cultura dos agentes microbianos
Exame a fresco bacteriano
• Observa-se
• composição celular da amostra;
• presença de microrganismos;
• atividade biológica. Ex.: motilidade. 
• Procedimento de preparo das lâminas varia de acordo com a 
amostra e a forma de coleta.
• Urina e Secreção vaginal – Exame a fresco:
– Trichomonas ; leveduras ??
• As amostras diluídas ou não, dependendo da consistência 
apresentada.
• Observação da morfologia é prejudicada uma vez que as bactérias 
são incolores - pouco contraste com o caldo de diluição.
• Amostras recebidas em swabs
Normalmente, solicitação conjunta; Bact. Direta + cult (Antib.);
Sempre que possível, solicitar a coleta de um swab exclusivo para a os 
esfregaços e outro para a inoculação em cultura;
– Swab único (bact + cult.) implica, necessariamente, em primeiro 
procedimento de preparo do inóculo nos meios de cultura e, posterior, 
preparo da bact.
– Ou...
• adicionar salina estéril (pequena quantidade) ao tubo com o swab:
• homogeneizar e apertar o swab contra a parede do tubo;
• escorrer o excesso de material e proceder ao esfregaço;
• Usar outro swab estéril, utilizar o restante do material para processar o inóculo
• Obs.: Sempre que possível encaminhar o maior volume de amostra em recipiente estéril. 
Utilizar swabs em situações onde não seja possível a coleta de um volume mínimo 
necessário.
PREPARO DE ESFREGAÇOS
Bacteriscopias.
fixação do material para coloração
• Procedimento: Rolar o swab sobre a lâmina, espalhar a 
amostra de forma contínua a fim de formar uma fina camada.
– Procedimento Importante para:
» preservar a morfologia;
» separar os aglomerados celulares;
» manter a relação proporcional entre microrganismos e 
elementos celulares presentes.
Cuidados gerais
• Ressecamento do Swab;
– Transporte 
– Tempo em coleta e envio ao laboratório.
• Local da coleta com o swab;
– Presença ou ausência de secreções;
– De pústulas ou feridas abertas;
– etc
• Qualidade do Swab;
• Swab para anaeróbios;
Dr. Carlos Levy – FCM/UNICAMP
Materiais mais ricos – Maior quantidade
• ASPIRADOS, EXSUDATOS, ESCARRO e FEZES.
– Amostras em seringas devem ser transferidas para tubo estéril e
homogeneizadas antes dos procedimentos.
• Amostras purulentas ou demasiadamente espessas podem ser diluídas (uma
gota de salina estéril), para confecção do esfregaço.
• Espalhar a amostra sobre a lâmina
– Área de observação suficiente
– Camada do esfregaço fino.
FLUIDOS ORGÂNICOS QUE REQUEREM CENTRIFUGAÇÃO.
• Centrifugação (3.000 a 5.000rpm/15minutos).
• Maior concentração de possíveis microrganismos 
presentes;
• Maior chance e clareza na visualização de estruturas.
• Após centrifugação, retirar o sobrenadante (ponteira 
estéril);
– homogeneizar o sedimento
– transferir para lâmina.
– Obs.: pode ser gota a gota até quantidade adequada 
– Amostras turvas devem ser espalhadas (esfregaço fino)
– Secar ao ar ambiente (estufa, se urgência);
– Preparar mais de uma lâmina do material
Preparo do esfregaço
• Marcar o local do esfregaço/sedimento
• Facilitar a fase da microscopia
• usar, no verso, lápis adequado na região do esfregaço. 
• Uso de citocentríuga (centrífuga citospin) 
– Esfregaços de amostras fluidas e não viscosas (LCR e BAL);
– Aumenta a sensibilidade da coloração e diminui o tempo para 
confecção do esfregaço;
– Uso de menor quantidade de amostras. 
Bacterioscopia Direta de Urina – BDI
Coloração de Gram
– Usar urina não centrifugada
– Tipo bacteriano
– Células epiteliais
– Leucócitos
Urina
• URINA Urina de jato médio
– Homogeneizar a amostra.
Processar amostras NÃO centrifugadas.
Com a alça de platina ou pipeta estéril transferir 10 ul (0,01 
ml) para a lâmina e não espalhar.
Deixar secar ao ar ambiente.
Procedimento (sugerido)
• Urina Não Centrifugada
– 10ml em lâmina estéril
– Coloração de Gram
– Observação em imersão de 05 campos
– POSITIVO: Qualquer número de bactérias 
encontrado/Campo de imersão
– Testes falsos-negativos: Portanto não excluiriam a realização 
de culturas destas amostras
» Sensibilidade do teste??
• Estudo de co-relação com esterases leucociárias, nitrito, contagem de leucócitos e 
bacterioscopia...Se concluye que, aunque ninguna prueba urinaria puede sustituir al 
urocultivo, el test de la cinta reactiva aunado al sedimento urinario son una 
alternativa razonable para el manejo inicial del paciente(AU).
– Salus militiae;23(1):27-31, ene.-jul. 1998. tab - Giraldez, María; Perozo, Malile; González, Félix; Rodríguez, Manuel.
• Título: Correlaçäo entre bacterioscopia de urina e urocultura / Correlation between urine 
bacterioscopy and urine culture.
– Estudo da sensibilidade da bacterioscopia pelo método Gram, como "screening" para 
bacteriúria, comparando seus resultados positivos com os obtidos pelo método 
convencional de urocultura. 1.070 amostras. 
• Presença de 1 ou mais bactérias por campo de imersäo (x 1.000) em 192 bacterioscopias e 
crescimento bacteriano maior ou igual a 105 col/ml, em 213 uroculturas.
• Mostrando, assim, sua alta sensibilidade (90,14%) e especificidade (96,39%) (AU).
– Rev. IMIP;1(2):127-9, jul.-dez. 1987. Tab. Alves, Joäo Guilherme Bezerra; Melo, Francisco; Ferreira, Nadjla; Silva, Isabel 
Regalado da; Cunha, Sophie Euckmann
– Alguns Laboratórios reconhecidos listam este exame como disponível.
– SUSBSTITUIR URINOCULTURA POR BACTERIOSCOPIAS ????
MATERIAIS SECOS OU PEQUENA QUANTIDADE DE 
AMOSTRA
• Adicionar 0,5 ml de salina estéril e
homogeneizar em agitador (vortex).
– Com pipeta estéril transferir uma gota do material
para a lâmina.
– Espalhar o material – esfregaço fino
Biopsias e coleta e tecidos
• Macerar o material
– Usar instrumentos estéreis;
– Preparar esfregaço em lâmina.
– Impossibilidade de maceração – Pressionar 
vigorosamente em lâmina (imprint).
Cuidados gerais com o preparo da lâmina
• Cuidados na Identificação
– Extremidade fosca da lâmina;
– Lápis adequado (vermelho);
– Fixar escrita ao fogo
– Não usar etiquetas (borram)
• Usar suficiente área da lâmina
• Colônias To < 24 horas
• Fixar o Material em b. Bunsen
– Pode gerar fator de 
interferências
• fa
MÉTODOS DE COLORAÇÃO
BACTERIOSCOPIAS DIRETAS
• Coloração de Gram
• Coloração de Ziehl-Neelsen
• Outras – Ex.: Tinta da China
C.Neoformans - Sangue
• GRAM POSITIVOS
• Cocos em cachos - estafilococos
• Cocos cadeias longas
– Estreptococos aeróbios e anaeróbios
• Tétrades, cachos – Micrococcus
• Coco-bacilo (ou cadeias curtas)
– Pares: Enterococcus
– Chama de vela: S. pneumoniae;
– Gram variável: Gardnerella
• Bacilos retos e curvos
– Lactobacillus, Listeria
• Bacilos Ramificados – Nocardia, 
Actinomyces, Propionibacterium
• Bacilo Esporulado: Clostridium sp
• GRAM NEGATIVOS
• Cocos (pares): Neisseria sp, Moraxella sp, 
veillonella (aneróbio)
• Coco-Bacilo: Haemophillus (Pleomórf.),
Enterobactérias, Bordetella.
• Bacilos:
Curvos: Helicobacter, Vibrio; 
Helicoidais: Leptospira, Treponema;
Retos: Enterobactérias;
Afilados – Fusobacterium (anaeróbio)
Bifurcados – Bifidobacterium (anaeróbio)
Bacterioscopias 
diretas
Recuperou na 
cultura?
Qual omaterial?
BAL?
Escarro?
Material: LCR
Líquido Peritoneal 
Klebsiella sp
BAL
BGN
Lavado Brônquico
BGN – P. aeruginosa
Escarro
cocobacilo
PMN
Hemocultura: S. Bovis
Hemocultura: diplococo
Abscesso pélvico
Observação de Microbiota normal
Microbiota vaginal normal Microbiota vaginal anormal
Microbiota vaginal anormal:VAGINOSE
Amostras analisadas
• SANGUE (Hemoculturas) – Não indicado
• Líquido Céfalo-Raquidiano (LCR)
– Preparo e leitura de, pelo menos, duas lâminas.
– Preferencialmente lâminas novas, evitam dúvidas diagóstics e falso 
positivos.
– Centrifugada (3.000 a 5.000rpm/15minutos) ou em citocentrífuga 
(ideal).
– Gota do Sedimento sobre a lâmina como e secagem espontânea. 
– Nunca espalhar o sedimento (maior possibilidade de falso negativos).
– Tratar como amostras de urgência
• Estabelecer rotina de comunicação verbal com o profissional requisitante.
Casuística
Grupo por Idade Organismos que causam meningite aguda
Neonatos Escherichia coli, Streptococcus agalactiae (Grupo B), Listeria 
monocytogenes.
Até dois meses Streptooccus agalactiae, Listeria monocytogenes, Escherichia coli
De 2 m a 10 anos Haemophylus influenzae, Streptococcus pneumoniae, Neisseria 
meningitidis
De 11 a 18 anos Neisseria meningitidis
De 19 a 70 anos Streptococcus pneumoniae, Neisseria meningitidis
Com mais de 70 anos Streptococcus pneumoniae, Bacilos Gram negativos, Listeria 
monocytogenes
Pacientes aidéticos Cryptococcus neoformans
TRATO RESPIRATÓRIO SUPERIOR 
SECREÇÃO DE OROFARINGE
• Nestes casos, o Gram será apenas exame auxiliar 
demonstrativo da flora presente.
– Não diferencia microrganismos patógenos dos colonizantes.
• Possível diagnóstico de infecção fúngica
• Possível diagnóstico da angina de Vicent
– Tonsilite ulcerativa necrotizante aguda
– Pode ser causada por Fusobacterium spp., Borrelia vincentii e outros 
anaeróbios. 
– Observação da presença de bactérias fusiformes e espiroquetas -
associação fuso-espiralar.
Observar próximo slide...
Secreção de Orofaringe
Fungo
.
Trato Respiratório Inferior
Escarro, BAL, Aspirado Trans-Traqueal
• Material com alta possibilidade de contaminação durante a 
coleta.
– Tanto para Bacterioscopia direta quanto para cultura
• Importante papel do Gram em caracterizar qualidade das 
amostras:
– Quantidades de células epiteliais e leucócitos
• Selecionar áreas mais alteradas das amostras para Análise
Escarro
• Qualificação da amostra : Critério apenas para este tipo de 
amostra.
– Rejeitar amostras com mais de 10 células epiteliais/campo 
• Contaminação com biota oro-faríngea - não recomendadas para cultura. 
– O número de leucócitos (Excluir critério para imunossuprimidos).
– Pacientes Imunocompetentes: amostras com >25 leucócitos e < 10 células 
epiteliais por campo (aumento de 10x) implicam em uma amostra 
qualificada para realização da cultura.
Escarro
Alguns Possíveis problemas
• Pode haver coloração mista no esfregaço (Positiva e Negativa), e até 
troca na coloração do Gram (bactérias Gram positivas coradas como 
Gram negativas):
– Super aquecimento no processo de fixação; 
– Excesso de descoloração com álcool/acetona;
• Erro na diluição e preparo da mistura, qualidade dos reagentes. 
– excesso de lavagem com água entre as etapas; 
• Uso de força desproporcional do jato de água;
– Vigência de antibioticoterapia (anti-parede, principalmente). 
– Idade da Cultura: Culturas com mais de 24 horas.
Controle de qualidade
• Estar atento a qualidade dos corantes
• Cepas:
– Escherichia coli ATCC 25922
– Staphylococus aureus ATCC 25923
– Ou Staphylococcus epidermidis ATCC 12228. 
Qual a interpretação destes esfregaços?
Laudos
• Microorganismos não visualizados: 
• Ausência de microrganismos ou Não foram observados bactérias e 
fungos ou Negativa.
• Raros:
• Observação de menos do que um microrg./campo de imersão 
• Vários/Moderados: 
• Um a dez microrg./campo de imersão
• Numerosos: 
• Mais de 10 microrg./campo de imersão
Descrever estruturas celulares