Produção de Proteínas Recombinantes

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Produção de Proteínas Recombinantes
UNIG
Profª: Lívia Lobo
Disciplina: Tecnologia enzimática
Curso: Farmácia 6ºPeríodo, noite.
Alunos: Ana Flávia Pedras
Marcos Vinicius Pinto de Mesquita
Mônica Bezerra Magalhães
Nicole Rodrigues Naves Masis
Raiana Leite de Pinho
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O que são proteínas recombinantes?
 São proteínas produzidas artificialmente a partir de genes clonados. Isto é, advêm da técnica de DNA recombinante.
 FONTE:http://www.abyntek.com/factores-clave-en-la-expresion-de-proteinas-recombinantes/00
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Para que servem? 
 A produção de proteínas recombinantes permite obter benefícios em várias áreas:
Saúde
Biologia
Bioquímica
Microbiologia
Genética
Biotecnologia
Agricultura
Entre outras...
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Algumas aplicações
Terapia genética
Criação de modelos animais
Melhoramento animal e vegetal 
FONTE: .dqb.fc.ul.pt
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Técnica de produção de proteínas 
Isolar e preparar o DNA;
Escolher o vetor apropriado;
O fragmento do DNA a clonar é introduzido em vetores de clonagem, formando o DNA recombinante;
O DNA recombinante é inserido na célula hospedeira, onde ocorre a transformação; que possui mecanismos enzimáticos para a replicação do DNA e para a síntese proteica;
Seleção e identificação de células que incorporam o DNA recombinante;
Verificar se a proteína foi expressa;
Remoção e purificação das proteínas.
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 FONTE: http://ingeniousnws.blogspot.com.br/2013/04/a-tecnologia-do-dna-recombinante-base.html
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Algumas enzimas envolvidas no processo
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Enzimas de restrição - Endonuclease
Os fragmentos de DNA usados para criar moléculas recombinantes são normalmente gerados por digestão através de endonucleases de restrição. 
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Vetores de clonagem
Capaz de transportar uma sequência de DNA estranha dando origem a um DNA híbrido ou recombinante;
Capacidade de se auto-replicar;
Conter pelo menos um gene que confira resistência a antibióticos;
Possuir locais de restrição únicos;
Fácil de purificar.
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Tipos de vetores de clonagem
Plasmídeos;
Fasmídeos ou fagemídeos;
Cosmídeos;
Bacteriófagos.
FONTE: www.biologianaweb.com/ Livro2/C11/pbr322.html
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Vetores de expressão
Promotor;
Codão de iniciação 
seguido de polylinker;
Local de ligação ao ribossoma.
FONTE: www.icampus.ucl.ac.be/. ../expression.html 
FONTE: www.icampus.ucl.ac.be/. ../expression.html 
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Transformação
Ocorre quando uma célula incorpora e exprime um fragmento de material genético.
Para a introdução do DNA recombinante podem ser utilizados vários métodos:
Células competentes;
Electroporação;
Bombardeamento de DNA revestido de Tungsténio;
Micro-injecção;
Transfecção.
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Extração e purificação de proteínas
Extração Lise celular 
Purificação
Cromatografia
De afinidade 
FONTE: Lehningher Principles of Biochemistry
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Proteínas recombinantes
FONTE:http://www.abyntek.com/factores-clave-en-la-expresion-de-proteinas-recombinantes/
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Exemplos de proteínas recombinantes
 Hormona de crescimento humano;
Anticoagulantes;
Dismústase do superóxido;
Anticorpos monoclonais.
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Bibliografia e referências
 "The Cell. A Molecular approach."- 3nd ed. G.M. Cooper, AMS Press, U.S.A. 2004. 
"Molecular Biology of the Cell." - 4 nd ed., Alberts, Bray, Lewis, Raff, Roberts and Watson, Garland Publishing, Inc. New York, 2002. 
Nelson D.L., Cox M.M.: Lehningher Principles of Biochemistry (4th Ed.). W.H. Freeman and Company, New York. 2005.
http://www.fortunecity.com/campus/biology/752/dnarec.htm
http://www.novodordisk.pt/documents/article_page/document/insulina.asp
www.biotecnologia_na_escola.up.pt
www.terravista.pt/FerNoronha/5802/genetica.htm
www.institutovirtual.pt
www.dqb.fc.ul.pt
www.mces.pt
www.aidscongress.net
http://acl.com.sapo.pt/naodoping.htm
http://www.saudenainternet.pt/guia/?file=guia-artigo&cod=76
www.piercenet.com