Diluição de sêmen

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Diluição de sêmen 
→ Diluição: Aumentar o volume e fracionar 
- Aumentando o volume para poder inseminar uma maior quantidade de animais.
• Pq? 
- Diluir – Fracionar – Inseminar na hora 
- Diluir – Fracionar – Resfriar – 6-12h – Necessário conservantes
- Diluir – Fracionar – Congelar – Anos – Necessário conservantes 
→ A inseminação artificial pode ser feita de três maneiras: 
a) Sêmen fresco – Básico, in natura 
b) Sêmen resfriado – Temperaturas acima de 0°C para reduzir o metabolismo celular. Utilizado para o transporte de material. 
c) Sêmen congelado – Temperaturas abaixo de 0°C. É feita a desidratação celular para evitar a formação de cristais de gelo e choques térmicos. 
Diluidores
I. Requisitos dos diluidores: 
- Ausência de toxidez 
- Mesma osmolaridade do plasma seminal 
- Ph próximo ao do sêmen – Entre 7,0
- Baixo custo e preparo simples 
II. Tipos de diluidores: 
a) Líquidos orgânicos 
- Leite desnatado – Leite esterilizado 
- Clara de ovo
OBS: Temperatura requerida de 37°C
b) Soluções preparadas 
- Soro fisiológico (NaCl 8g/L) 
Proporção de diluição: 
- Ruminantes: 1:30
- Equinos e suínos: 1:4
Conservantes – Utilizados para sêmen congelado ou refrigerado
I. Requisitos dos conservantes: 
- Ausência de toxidez
- Ph próximo ao do sêmen – Entre 7,0
- Mesma osmolaridade do plasma seminal 
- Baixo custo e preparo simples 
- Conter nutrientes – Nutridores para células em ambientes extracorpóreos, exemplo são os glicídios 
- Conter protetores de membrana para evitar o choque térmico – Utilizado em temperaturas acima e abaixo de 0°C 
- Temperaturas baixas para diminuir o metabolismo do espermatozoide:
a. 15°C – 24h de vida 
b. 5°C – 36h de vida 
c. -196°C – Não tem validade 
II. Tipos de conservantes 
a) Gema de ovo: nutrição (glicose), proteção de membrana (lectina, acima de 0°C)
b) Leite: Proteção de membrana acima de 0°C
c) Citrato de Sódio: Tampão eletrolítico, mantem o Ph do sêmen resfriado. E equilíbrio osmótico para sêmen congelado (evita o rompimento de células e age desidratando as células aos poucos). 
d) Glicerol: Desidratante, protege as membranas 
e) Fosfatos: Tampão eletrolítico, mantem o Ph do sêmen neutro.
f) Glicídeos: 
f.1) Sacarose, lactose e rafinose, fazem equilíbrio osmótico, impedem o ingresso do glicerol pela membrana. 
f.2) Glicose e frutose: Nutrição 
g) Antioxidantes: Por exemplo vitamina C e E, Trolox, Catalase, Equex. Retardam o envelhecimento das células eliminando radicais livres. 
g.1) OEP: É um surfactante e antioxidante chamado, Orvus es paste – laurel sulfato de sódio. 
h) Antibióticos: Impedem, inibem o crescimento bacteriano. Penicilina + Estreptomicina ou Polimixina B, entre outros. 
i) TRIS: Abreviação de um composto orgânico, tris(hidroximetil)aminometano, com a fórmula (HOCH2)3CNH2. Utilizado como solução tampão não eletrolítica.
j) TES: Abreviação de um composto orgânico, N-tris[hidroximetil]metil-2-aminoetano sulfonato. Utilizado como solução tampão não eletrolítica. 
k) EDTA: Abreviação de um composto orgânico, ácido etilenodiamino tetra-acético. Evita a aglutinação, é um anticoagulante, um agente quelante, quando ocorre a presença de sujidades este aglutina-se. 
l) DMSO: Abreviação de um composto chamado, Dimetilsulfóxido ou sulfóxido de dimetilo. Semelhante ao glicerol, é um agente crioprotetor desidratante. 
Tipos de diluidores para cada espécie 
I. Bovinos: 
a) SalisBury(1941): Diluidor gema citrato 
• Composição: 
- Citrato de sódio dihidratado – 2,94%
 - gema de ovo – 20% sobre solução 1 
- antibióticos – Penicilina – 500 a 1000 UI/ml ou Estreptomicina 500 a 1000µg/ml
- Água destilada – 100ml 
* Para congelar o sêmen adicionar 7% de glicerol 
b) Diluidor a base de TRIS
• Composição da solução mãe:
- Solução mãe – TRIS 36,05g 
- Ácido cítrico – 20,24g
- Frutose – 14,88g 
- Penicilina – 0,9g
- Estreptomicina – 1,5g
- Água destilada – 1L
• Composição do diluidor: 
- Solução mãe – 67,2 partes
- Glicerol – 12,8 partes
- Gema de ovo – 20ml
* Diluidores comerciais: Multiplique por 100ml – Botu-bov, Bovimix(Nutricell)
II. Bubalinos: 
- Diluidores a base de TRIS
- Diluidores a base de glicina 
- Diluidores a base de TES
III. Ovinos: 
- Diluidores a base de TRIS 
- Diluidores a base de lactose 
IV. Caprinos: 
- Diluidores a base de TRIS
- Diluidores a base de leite desnatado 
V. Cães:
- Diluidores a base de TRIS
- Diluidores a base de glicina 
- O sêmen deverá ser centrifugado antes de adicionar o diluidor 
* Vt = Vd
VI. Equinos: 
a) Sêmen resfriado
• Composição do diluidor: 
- Glicose – 4,9g
- Leite em pó desnatado - 
- Bicarbonato de sódio – 0,15g 
- Antibióticos: Sulfato de polimixina B – 100.000UI ou Penicilina 0,125g + Estreptomicina 300.000UI
• Composição do diluidor: 
- Lactose – 11% - 50ml
- Gema de ovo – 20ml
- Antibióticos: Estreptomicina – 0,125g + Penicilina – 300.000UI
• Diluidores comerciais: 
- Botusêmen para transporte(1 sachê) + 100ml de diluente 
- Equimix 
b) Sêmen congelado
• Meio de centrifugação: 
- Glicose 6g
- EDTA – 0,37g
- Citrato de sódio – 0,375g
- Bicarbonato de sódio – 0,12g
- Antibióticos 
- Água destilada – 100ml
• Composição do diluidor: 
- Lactose 11% - 50ml
- Meio de centrifugação – 25ml
- Gema de ovo – 20ml
- OEP – 1,0ml
- Glicerol – 5ml
* Sêmen congelado e resfriado é necessário fazer a centrifugação antes de adicionar o diluidor. 
* Vt = Vd
VII. Suínos:
* Apenas sêmen resfriado e fresco, nunca congelado
• Composição do diluidor:
* Sêmen refrigerado à 15°C, de curta estocagem (2 dias) 
Meio de Plisko ou Kiev:
- Glicose – 60g
- Citrato de sódio – 3,75g 
- Bicarbonato de sódio – 1,2g
- EDTA – 3,7g
- Antibióticos – Penicilina – 1000.000UI + Estreptomicina 0,5 a 1,0g 
- Água destilada – q.s.p. – 1L (Quantidade suficiente para) 
Meio BTS: 
- Glicose – 37g
- Citrato de sódio – 6g
- Bicarbonato de sódio – 1,25g
- EDTA – 1,25g
- Cloreto de potássio – 0,75g 
* Diluidores de longa estocagem – 6 dias – Zolesco, MR-A
* Diluidor à base de sêmen congelado – à base de lactose