Relatorio Determinação de coliformes em amostras de águas – Parte III

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Aula Prática 14 - Determinação de coliformes em amostras de águas – Parte III
Introdução
A determinação de coliformes totais inclui as bactérias na forma de bastonetes Gram negativos, não esporogênicos anaeróbios facultativos, capazes de fermentar a lactose com produção de gás, em 24 à 48 horas a 35ºC. Já a determinação de coliformes fecais é a mesma de coliformes totais, porém, restringindo-se aos membros capazes de fermentar a lactose com produção de gás, em 24 horas à 44,5-45,5ºC.
O Teste de diferenciação para coliformes fecais que consiste na transferência das culturas de todos os tubos positivos de Caldo lactosado incubados durante 24±48 horas a 35±0,5º C para tubos contendo E.C. Medium, que serão incubados durante 24±2 horas a 44,5±0,2º C em banho-maria com agitação e temperatura constantes. A confirmação bioquímica de E. coli é feita através de provas bioquímicas tradicionais, obtida em Caldo EC com produção de gás.  
Objetivos
- Avaliar os resultados da prova confirmativa de coliformes (coliformes totais e termotolerantes) e diferenciar coliformes no meio EMB.
Materiais Utilizados
- Tubos positivos de Caldo EC (3)
- 3 Placas de Petri com meio EMB 
- Alça de inoculação
Métodos
Primeiramente, foi rotulado cada uma das placas com os códigos da amostra e do grupo. Em seguida, com a alça de inoculação, foi inoculado uma amostra do caldo EC positivo no meio EMB, logo após realizamos estrias pela placa na técnica por esgotamento. Por fim, levamos as placas para incubação na estufa à 35ºC durante 24h.
Resultados
A partir dos tubos positivos na prova confirmativa (Caldo verde bile brilhante e EC), que resultaram 3-0-0 (CVBB) e 3-0-0 (EC), foi utilizado a Tabela de McCrady, usada para calcular o numero mais provável (NMP) de coliformes totais e termotolerantes, tendo como resultado o NMP de 23 coliformes (totais e termotolerantes) em 100mL. 
Após o prazo de incubação de 24h, as placas não apresentaram bactérias E. coli, indicando que a amostra de água coletada não estava contaminada com coliformes fecais.
Discussão
A partir dos resultados obtidos podemos concluir que amostras não estavam contaminadas com E. coli, tornando assim livre de coliformes fecais, contudo foi detectada a presença de bactérias termotolerantes podendo assim conter cepas nocivas a saúde, necessitando assim de mais analises para identificar qual o micro-organismo.
Referências 
ALCÂNTARA, F.; CUNHA, M. A.; ALMEIDA, M. A. Microbiologia: práticas laboratoriais. 2ª ed. Aveiro: Universidade de Aveiro, 2001. 297 p. 
BRASIL. Ministério da Saúde. Portaria no 518 de 25 de março de 2004. Dispõe sobre os procedimentos e responsabilidades relativos ao controle e vigilância da qualidade da água para consumo humano e seu padrão de potabilidade. Diário Oficial da República Federativa do Brasil, Brasília, DF, 2004 
PEPPER, I. L.; GERBA, C. P. Environmental microbiology: a laboratory manual. 2nd ed. Elsevier Press: Amsterdam, 2004. 209 p.