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CULTIVO DE MICRO-ORGANISMOS “IN VITRO” MEIOS DE CULTURA MEIOS DE CULTURA Conceito: associação qualitativa e quantitativa de substâncias que fornecem os nutrientes necessários ao desenvolvimento (cultivo) de micro-organismos fora do seu meio natural Além dos nutrientes é preciso fornecer condições ambientais favoráveis ao desenvolvimento dos micro-organismos, tais como pH, pressão osmótica, umidade, temperatura, atmosfera (aeróbia, microaeróbia ou anaeróbia), entre outras Classificação dos meios de cultura Sólidos: quando contém agar (cerca de 1 a 2%); permitindo a obtenção de colônias isoladas Líquidos: sem agentes solidificantes, apresentando-se como um caldo. Utilizados para ativação das culturas, repiques de micro-organismos e provas bioquímicas Quanto ao estado físico Líquido sólido Crescimento de fungos em meios de cultura sólido \\ Líquido Classificação dos meios de cultura Naturais ou complexos: utiliza ingredientes com composição química não definida, tais como extratos de vegetais (malte, tomate, amido de tubérculos, peptona de soja, etc.) de animais (carne, cérebro, fígado, caseína, etc.) e de micro-organismos (levedura). Artificiais, sintéticos ou quimicamente definidos: quando a composição química é conhecida (usados para trabalhos de pesquisa) Quanto a procedência dos constituintes Classificação dos meios de cultura Simples: permitem o crescimento bacteriano, sem satisfazer contudo nenhuma exigência em especial (Ex. caldo e agar simples nutriente). Especiais: cumprem com as exigências vitais de determinados mo. Ex: meio BHI, agar sangue, etc. São os mesmos classificados como complexos Classificam-se em: Quanto a composição química Classificação dos meios especiais Meios de pré-enriquecimento: permitem a dessensibilização de micro-organismos injuriados. Ex: Água peptonada, caldo lactosado Meios de Enriquecimento: proporcionam nutrientes adequados ao crescimento de mo presentes em baixos números ou de crescimento lento, bem como mo exigentes e fastidiosos. Ex. Caldo Tetrationato e Selenito-Cistina (Salmonelas) Diferenciais: contém substâncias que permitem estabelecer diferenças entre micro-organismos. Ex: agar MacConkey (enterobactérias), agar sangue, etc. Classificação dos meios especiais Seletivos: contém substâncias que inibem o desenvolvimento de determinados mo, permitindo o crescimento de outros. Ex: agar Salmonella-Shigella (SS) e agar MacConkey. São também diferenciais. Agar Chapman Agar Mac Conkey Identificação: empregados para provas bioquímicas e funções fisiológicas (meios de oxidação/fermentação, agar Citrato, Caldo nitrato, etc. prova de citrato prova de urease prova de fermentação de acúcares Contagem: determinação quantitativa da população microbiana (agar padrão de contagem de mesófilos) Tipos de crescimento das bactérias em meios de cultura Formação de colônias: quando cultivadas em agar • Turbidez do meio de cultura: quando cultivadas em caldo • Formação de biofilme: quando o crescimento ocorre sobre uma superfície inerte. 1 2 Como preparar o meio de cultura? TÉCNICAS DE SEMEADURA PARA CULTIVO DE MICRO- ORGANISMOS TÉCNICAS DE SEMEADURA Semeadura em estrias ou zigue-zague Semeadura por esgotamento TÉCNICAS DE SEMEADURA Semeadura por dispersão (caldo) TÉCNICAS DE SEMEADURA
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