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TRANSFERÊNCIA DA INFORMAÇÃO GENÉTICA TRANSCRIÇÃO E TRADUÇÃO Prof. Tercilio Disciplina: Genética Humana I TRANSFERÊNCIA DA INFORMAÇÃO GENÉTICA TRANSCRIÇÃO E TRADUÇÃO Prof. Tercilio Disciplina: Genética Humana I A GENÉTICA E O ORGANISMO - A informação genética da maioria dos organismos está estocada em moléculas de ácido desoxirribonucleico ou DNA; - A genética é o estudo dos genes e sua implicações. O gene é uma seção de uma molécula de DNA; - As características de uma espécie (fenótipo) são codificadas por seus genes (genótipo); Localização do DNA Procariontes Eucariontes DNA presente no nucleóide DNA localizado no núcleo Localização do DNA Procariontes Eucariontes O cromossomo dos procariontes é circular Cromossomo humano ESTRUTURA PRIMÁRIA DO DNA As bases nitrogenadas podem ser divididas em dois grupos de acordo com sua estrutura DOGMA CENTRAL DA BIOLOGIA MOLECULAR Watson e Crick (1953) DNA RNA PROTEÍNA REPLICAÇÃO TRANSCRIÇÃO TRADUÇÃO TRANSCRIÇÃO REVERSA REPLICAÇÃO DE RNA Regiões Codificadoras e Não-Codificadoras do DNA - O DNA é formado por 2 regiões: Região Gênica É a porção que codifica para um RNA ou proteína Gênicas Intergênicas Região Intergênica É a porção regulatória, sinaliza a localização de um gene, influencia na replicação e transcrição gênica ... Intergênicas Gênicas Regiões de um gene de eucarionte Íntron Éxon Íntron Éxon Íntron Éxon Introns ou regiões não-codificadoras Exons ou regiões codificadoras Éxon ASPECTOS IMPORTANTES DE UM GENE HUMANO TÍPICO Éxons: são sequências dentro do gene que são conservadas durante o processamento do RNA primariamente transcrito (hnRNA) e estão presentes no mRNA final. Além de codificar informações, os éxons contém outras sequências necessárias ao funcionamento do mRNA (UTRs); Íntrons: são sequências dentro de um gene que são removidas do hnRNA e não estão presentes no mRNA final; Sequências promotoras: determinam o sítio onde o início da transcrição começa na molécula de DNA. Íntron Éxon Íntron Éxon Éxon Promotor 5’ 3’ 3’ 5’ Gene Humano DNA DIAGRAMA DE UM GENE HUMANO TÍPICO Íntron Éxon Íntron Éxon Éxon Promotor 5’ 3’ 3’ 5’ RNA 5’ 3’ Transcrição Gene Humano DNA Íntron Éxon 2 Íntron Éxon 3 Éxon 1 5’ UTR 3’ UTR 5’ - - 3’ RNA transcrito Processamento (Cap, adição de poli A, remoção de íntrons) Éxon 2 Éxon 3 Éxon 1 - AAAAAAAAAn Cap - Tradução 5’ UTR 3’ UTR mRNA final NH2 COOH Proteína 1 2 3 RNA - Responsável pela transferência de informações do DNA para proteínas; - É uma cadeia polinucleotídica unifilamentar; - Contém Uracila (U) em lugar de Timina (T) e ribose em lugar de desoxirribose; - U tem a capacidade de se parear do mesmo modo que T com A. CLASSES DE MOLÉCULAS DE RNA RNA mensageiro (mRNA): leva a informação do DNA para a maquinaria de síntese de proteínas. Contém a informação genética para a sequência de aminoácidos das proteínas; RNA transportador (tRNA): reconhece e transporta os aminoácidos até os ribossomos; RNA ribossômico (rRNA): está associado a proteínas em estruturas chamadas ribossomos. Os ribossomos humanos contém rRNA 28s, 18s, 5,8s e 5s; RNA heterogêneo nuclear (hnRNA): é o produto imediato da transcrição, precursor do mRNA antes de ser processado por recomposição (SPLICING); RNA pequeno nuclear (snRNA): está associado a proteínas específicas envolvidas no processamento do hnRNA em mRNA. TRANSCRIÇÃO: PRODUÇÃO DE RNA DE UM MOLDE DE DNA A transcrição é o processo pelo qual a RNA polimerase sintetiza RNA diretamente de um molde de DNA. Em eucariontes existem três RNAs polimerases; - RNA polimerase I transcreve os genes que codificam três dos quatro RNAs ribossomais (28s, 18s e 5,8s); - RNA polimerase II transcreve o mRNA e alguns dos snRNAs; - RNA polimerase III transcreve os genes que codificam os tRNAs, snRNAs e o RNAs ribossomais 5s; Procarioto VS Eucarioto A transcrição possui três estágios distintos: início, alongamento e término; A transcrição utiliza apenas um filamento de DNA e o RNA é sintetizado no sentido 5’ 3’. TRANSCRIÇÃO: PRODUÇÃO DE RNA A PARTIR DE UM MOLDE DE DNA Tata Binding Protein Complexo TFIID SÍTIOS PROMOTORES INÍCIO DA TRANSCRIÇÃO - A proteína de ligação a TATA (TBP) liga-se a sequência TATA no promotor e pela interação com fatores adicionais de transcrição (TFs), leva a RNA polimerase ao promotor. - Os fatores de transcrição interagem em sequências no promotor de genes humanos e regulam a transcrição; ALONGAMENTO TÉRMINO - O término da transcrição se dá através da formação do grampo de terminação (sinal de liberação da RNApol); PROCESSAMENTO DO RNA - Revestimento ou capping é a ligação à ponta 5’ do hnRNA (transcrito primário) do nucleotídio 7-metilguanosina através de uma guaniltransferase (ligação 5’ – 5’ fosfodiéster); - Na região 3‘ UTR do hnRNA está a sequência AAUAAA, conhecida como sinal de adição de poli A. Uma endonuclease reconhece e cliva de 11 a 30 nucleotídios. Após a clivagem a poli A polimerase adiciona de 50 a 200 adeninas (cauda poli A); - Recomposição ou Splicing é um processo pelo qual os íntrons são removidos do hnRNA, e os éxons são unidos (spliceossomos). - Estabilidade e transporte nuclear do RNA Etapas para geração do transcrito maduro (hnRNA) Transcrição e adição do 5´cap Clivagem, poliadenilação e splicing A d iç ã o d o 5 ´C A P (m o d if ic a ç ã o d a e x tr e m id a d e 5 ´d o h n R N A ) SPLICING - O splicing ocorre em corpúsculos ribonucleares (spliceossomos); - Os spliceossomos reconhecem as sequências doadora e aceptora que ocorrem no começo e no final de cada íntron; - A Adenina do ponto de ramificação se combina com Guanina do sítio doador formando uma alça (lariat). Sítio doador Sítio aceptor ramificação Íntron PROCESSAMENTO DO RNA CAP e PABP DOGMA CENTRAL DA BIOLOGIA MOLECULAR Watson e Crick (1953) DNA RNA PROTEÍNA REPLICAÇÃO TRANSCRIÇÃO TRADUÇÃO TRANSCRIÇÃO REVERSA REPLICAÇÃO DE RNA TRADUÇÃO: SÍNTESE DE PROTEÍNA A tradução é o processo pelo qual os ribossomos traduzem a informação do mRNA em proteína; - A síntese de proteína se inicia no primeiro códon AUG (códon iniciador) presente no primeiro éxon; - O código genético é composto de 64 códons, que codificam 61 aminoácidos e 3 sinais de término; - Um códon sem sentido, ou finalizador (UAA, UAG, UGA), não codifica um aminoácido e indica o término da síntese protéica. O CÓDIGO GENÉTICO Nirenberg (1961) O código genético é degenerado e universal. DIAGRAMA DE UM GENE HUMANO TÍPICO Íntron Éxon Íntron Éxon Éxon Promotor 5’ 3’ 3’ 5’ RNA 5’ 3’ Transcrição Gene Humano DNA Íntron Éxon 2 Íntron Éxon 3 Éxon 1 5’ UTR 3’ UTR 5’ - - 3’ RNA transcrito Processamento (Cap, adição de poli A, remoção de íntrons) Éxon 2 Éxon 3 Éxon 1 - AAAAAAAAAn Cap - Tradução 5’ UTR 3’ UTR mRNA final NH2 COOH Proteína 1 2 3 tRNA: TRADUTOR DOCÓDIGO GENÉTICO - A sequência do anticódon em uma molécula de tRNA reconhece códons específicos no mRNA durante a síntese de proteínas; - ACC na ponta 3’ representa o sítio onde o aminoácido se liga ao tRNA; - Contém pareamentos internos de bases formando estruturas haste-alça. - Alguns tRNAs reconhecem mais de um códon no mRNA (Oscilação - Wobble); CARREGAMENTO DE MOLÉCULAS DE tRNA - O carregamento das moléculas de tRNA é catalisado por enzimas conhecidas como aminoacil-tRNA sintetases; RIBOSSOMOS - Os ribossomos são feitos de rRNA e proteínas, e são o local de síntese protéica; - Fatores específicos de iniciação (IFs) estão envolvidos na síntese protéica; - Ligação do mRNA a subunidade 40s é estimulada pelo IF3; - IF2/GTP- fMet-tRNA liga-se ao sítio P do complexo de iniciação; - Complexo percorre RNA no sentido 5’ 3’ até encontrar AUG; - Hidrólise do GTP e ligação da subunidade 60s. INÍCIO DA SÍNTESE PROTÉICA - Fatores específicos de alongamento (EFs) estão envolvidos no processo de alongamento; - aminoacil-tRNA interage com o fator EF1 e GTP e liga-se ao códon no mRNA; - A peptidiltransferase forma uma ligação peptídica entre a metionina e novo aminoácido; - EF2 e a enzima translocase favorece a translocação do ribossomo ao longo do mRNA. ALONGAMENTO DA SÍNTESE PROTÉICA - O ribossomo atinge um códon finalizador (UAA, UGA, UAG); - O fator de liberação (RF) liga-se ao ribossomo; TÉRMINO DA SÍNTESE PROTÉICA