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Aula 4 Fontes de transmissão e metabolismo bacteriano Prof. Fabrício Campos Março 2016 Universidade de Brasília Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária Disciplina de Microbiologia Veterinária - Código: 161837 1 • Demonstrar as fontes de transmissão e noções básicas sobre divisão bacteriana Fontes de transmissão Metabolismo bacteriano Elementos genéticos Objetivo da aula 2 • Fontes de transmissão • Metabolismo bacteriano • Divisão bacteriana • Elementos genéticos Escopo da aula 3 • Fontes de transmissão • Metabolismo bacteriano • Divisão bacteriana • Elementos genéticos Escopo da aula 4 Fontes de transmissão de agentes infecciosos • Fontes Inanimadas (solo, água) Baía de Guanabara - RJ 5 • Fontes Animadas (microbioma) 6 Fontes de transmissão de agentes infecciosos • Trato respiratório, trato digestivo, inoculação, trato genital, transplacentária, umbilical, nosocomiais (meio hospitalar) 7 Vias de transmissão de agentes infecciosos • Microbiota com patógenos oportunistas • Boca e nasofaringe: Micrococcus, Staphylococcus, Streptococcus, Bacteroides, Lactobacillus, Actinomyces, Coliformes, Proteus, Mycoplasmas, Pasteurella, Candida albicans • Intestino grosso: Enterobactérias, Pseudomonas, Lactobacillus, Staphylococcus 8 Fontes de origem animal • Microbiota com patógenos oportunistas • Traquéia, brônquios e pulmões: bactérias e fungos • Órgãos sexuais externos: Difteroides, Micrococcus, Enterococcus, Proteus, Leveduras • Pele: Staphylococcus, Propionibactérias, Pityrosporum • Leite: Micrococcus, Staphylococcus, Corynebacterium bovis 9 Fontes de origem animal • Períodos de uma doença infecciosa: incubação, prodrômico, específico, convalescência • Animais incubando doença • Animais convalescentes • Infecção subclínica 10 Fontes de origem animal Mecanismos de resistência • Pele • Membranas mucosas • Pêlos • Muco • Fagocitose • Inflamação 11 • Invasibilidade • Cápsula • Parasitismo intracelular obrigatório • Parasitismo intracelular facultativo • Parasitos extracelulares • Enzimas extracelulares • Aderência • Exotoxinas • Endotoxinas 12 Propriedades patogênicas de bactérias 13 PCR para Mycoplasma Células positivas para Mycoplasma 293A P.1 MDBK P.80 Hiran 14/10/11 CRIB P.180 Willian 19/03 VERO P.34 JC MRC-5 P 06 Jamile 27/11/13 A549 P.15 XXX CER P. 116 Thalita 13/03/12 BHK P.36 Luciana 11/08/10 PK15 P.45 Thalita 29/03/12 BAS P.10 Thalita 02/08/13 H460 P.13 Thalita 02/08/13 Relação parasito hospedeiro • Saprofitismo: se alimenta de restos • Parasitismo: o microrganismo vive a custa do outro • Comensalismo: é uma das relações entre organismos de espécies diferentes que se caracteriza por ser benéfica para uma espécie não causando prejuízo para outra • Simbiose: relação de beneficio mutuo • Patógeno oportunista: microrganismo normalmente não patogênico que somente produz uma infecção quando as defesas do hospedeiro estão suprimidas • Patógeno obrigatório: necessita de um microambiente para replicação / reservatório (M. bovis, D. nodosus) 14 Relação parasito hospedeiro • Patogenicidade: é a capacidade do agente invasor em causar doença com suas manifestações clínicas entre os hospedeiros suscetíveis • Virulência: é a capacidade infecciosa de um microrganismo, medida pela mortalidade que ele produz e/ou por seu poder de invadir tecidos do hospedeiro • Infectividade: é o nome que se dá à capacidade que tem certos organismos de penetrar e de se desenvolver ou de se multiplicar no novo hospedeiro, ocasionando infecção • Toxigenicidade: É a capacidade de uma bactéria produzir toxinas, podendo ser: exotoxinas ou endotoxinas 15 Condições predisponentes para doença • Estresse • Extremos de umidade e temperatura • Deficiência nutricional • Espécie, sexo, idade • Distúrbios circulatórios • Efeito genético • Fadiga • Desbalanceamento hormonal • Quimioterapia • Infecções crônicas 16 • Fontes de transmissão de agentes infecciosos • Metabolismo bacteriano • Divisão bacteriana • Elementos genéticos Escopo da aula 17 Saprófitas Metabolismo bacteriano Macro elementos: C H O N Micro elementos: Fe, Ca, Mo Microrganismos Fotossintéticos Não fotossintéticos Autótrofos Heterótrofos Parasitos Utilizam compostos orgânicos como sua principal fonte de carbono Utilizam matérias inorgânicas como fontes nutritivas 18 Adaptação ambiental • pH: Acidófilos, Alcalófilos e Neutrófilos • O2: Aeróbios (catalase, superóxido dismutase e peroxidase), Anaeróbios, Microaerófilos e Anaeróbios facultativos • Temperatura: Mesófilos (10 a 45ºC), Psicrófilos (0 a 15ºC), Termófilos (acima de 45 a 68ºC), Termodúricos • Osmofílicos (alta pressão osmótica), xerofílicos (baixa atividade de água) 19 Antioxidantes enzimáticos 20 Fonte: Nunez, 2015 Movimento através da membrana plasmática • Difusão passiva e facilitada: permeases Através da difusão moléculas hidrofóbicas podem atravessar a membrana • Transporte ativo: simporte, antiporte e translocação em grupo Dependem dos sistemas transportadores 21 Entrada e saída de nutrientes • Sistemas transportadores: a) envolvem 1 componente transmembrânico b) envolvem componentes periplasmáticos e transmembrânicos c) proteínas atuando em cooperação 22 • Transporte simples: promovida pela força próton motiva • Translocação em grupo: com modificação química promovida pelo fosfoenol piruvato (PEP) • Sistema ABC: proteínas plasmáticas de ligação envolvidas e ATP 23 Proteínas transportadoras Aquaporina AqpZ: exportador de água Translocases: Sec YEG (G -) Complexo integrado a membrana com 7 proteínas 24 Exemplos Proteínas transportadoras Fonte: http://www.nature.com/nrmicro/journal/v5/n11/fig_tab/nrmicro1771_F1.html Metabolismo bacteriano • Catabolismo: processamento da matéria orgânica para obter energia • Anabolismo: síntese de moléculas complexas a partir de moléculas mais simples • Estão acoplados, gerando energia (ATP) e moléculas para o crescimento bacteriano 25 Anabolismo e catabolismo 26 Metabolismo bacteriano • As vias metabólicas centrais (glicólise, via das pentoses e ciclo de Krebs) fornecem elétrons e o carbono para a biossíntese das macromoléculas • Vias anfibólicas: combinam reações de catabolismo e anabolismo para gerar moléculas para o crescimento 27 Metabolismo bacteriano • Reações anapleróticas: são reações nas quais compostos intermediários são utilizados no ciclo de Krebs para biossíntese de outras moléculas • Ex.: produção de oxaloacetato Piruvato + ATP + CO2 → Oxaloacetato + ADP + Pi (enzima piruvato carboxilase) 28 Ciclo do ácido tricarboxílico 29 Bactérias possuem mitocôndrias? • Respiração aeróbica: conjunto de reações bioquímicas em que o oxigênio é o receptor final de elétrons. Ao longo desse processo a energia de moléculas orgânicas é, em parte, transferida para moléculas de ATP • Mesossomos: invaginações ou dobras presentes na membrana plasmática Realizam o papel das mitocôndrias 30 Fermentação • Fermentação: microrganismossintetizam um composto orgânico produzido que é utilizado como aceptor final de elétrons • O ácido pirúvico e os elétrons transportados pelo NADH na glicólise são incorporados nos produtos finais da fermentação Ex.: Fermentação lática: bactérias produzem ácido lático Ex.: Fermentação alcoólica: mais comum com leveduras, produzem etanol 31 32 Respiração x fermentação 33 Subprodutos da fermentação Fonte: http://textbookofbacteriology.net/pyrupath.jpeg • Acido lático: Lactobacillus, Streptococcus • Álcool etílico: Saccharomyces cerevisiae e Zymomonas • Ácido butírico: Clostridium butyricum, Eubacterium e Neisseriae • Ácidos mistos: Escherichia, Proteus • Metano: microrganismos metanogênicos convertem o nitrogênio como fonte primária de energia e usam o CO2 como aceptor final de elétrons, produzindo CH4 34 Subprodutos da fermentação • Fontes de transmissão de agentes infecciosos • Metabolismo bacteriano • Divisão bacteriana • Elementos genéticos Escopo da aula 35 • Processo de reprodução assexuada dos micro- organismos que consiste na divisão de uma célula em duas idênticas 36 1. Aumento de volume celular 2. Replicação do DNA 3. Formação do septo de divisão 4. Separação das duas células filhas 37 • Ataque das auto- lisinas em pontos da parede celular • O cromossomo sofre replicação semi- conservativa 38 • Origem da replicação: proteínas de iniciação “abrem” a dupla hélice • Formação da forquilha de replicação • Ação das helicases que hidrolisam o DNA avançando na forquilha 39 • Proteínas SSB: proteínas ligantes de fita simples • Fita líder: é copiada no sentido 5´ => 3´ de modo continuo • Fita complementar: replicação iniciada por primers RNA, fragmen- tos de Okazaki 40 • Formação de RNA a partir de DNA • RNA mensageiro, RNA transportador, RNA ribossomal • As bactérias tem uma única RNA polimerase 41 • Molécula de mRNA pode codificar mais de uma proteína • Está sob controle de um único promotor • Operon: unidade completa de expressão gênica que possui 3 elementos: o promotor, o operador e os genes estruturais 42 • Promotor: sequência reconhecida pela RNA polimerase como delimitador do início da informação à ser transcrita • Operador: sequência adjacente ao promotor e que tem um papel na determinação da acessibilidade ao promotor • Genes estruturais: são as sequências codificadoras e podem variar em número de 2 a 20 43 44 45 • Fontes de transmissão de agentes infecciosos • Metabolismo bacteriano • Divisão bacteriana • Elementos genéticos Escopo da aula 46 Elementos genéticos • Plasmídeos • Bacteriófagos • Transposons 47 • Processo de transferência de genes que ocorrem geralmente por plasmídeos, podendo ocorrer com cromossomo bacteriano 48 Conjugação • Replicação por círculo rolante • Plasmidio F 49 Conjugação Conjugação 50 Fonte: http://microbiologiaja.blogspot.com.br/ Descrita em 1947 por Lederberg & Tatum Experimentos de transferência gênica entre bactérias 51 Lederberg & Tatum, 1947 Experimentos de transferência gênica entre bactérias 52 Lederberg & Tatum, 1947 • Transferência de material genético através dos bacteriófagos 53 Transdução Transdução 54 Bactéria Doadora Transdução Fago Ciclo lítico DNA bacteriano transferido via transdução Bactéria Receptora Transdução Descrita em 1915 por Frederick Twort • Existem dois diferentes ciclos de replicação viral – lítico e lisogênico • Lítico: Replicação viral 55 Bactéria Bacteriófago Os vírus se ligam a célula hospedeira Processo denominado adsorção Os vírus injetam seu DNA no interior das células Os vírus se apoderam da maquinaria celular Em seguida produzem os componentes virais DNA viral Proteína viral Origem a novas partículas virais Montagem de novos vírus Lise da célula e liberação dos vírus para infectar novas células • Lítico: Ciclo de replicação viral 56 • Lisogênico: Ciclo de replicação viral 57 Os vírus se ligam a célula hospedeira O DNA viral penetra na célula O DNA viral se insere no genoma bacteriano (prófago) O DNA viral entra no estágio de latência O vírus permanece latente aguardando o momento de ser ativado Quando o genoma bacteriano é replicado, ele replica também o DNA viral E as células se dividem por fissão binária Replicação passiva do vírus Alguns vírus saem do estado latente e iniciam um ciclo lítico • Lisogênico para lítico: Ciclo de replicação viral 58 O DNA viral é excisado do genoma do hospedeiro Novos componentes virais são produzidos Os vírus são montados Liberados para infectar novas células Ciclo de replicação viral 59 Ciclo lisogênico Ciclo lítico • Algumas vezes durante a saída da célula hospedeira Ciclo de replicação viral 60 Um fragmento do genoma bacteriano é removido com o DNA viral Ou um fragmento do DNA viral fica retido no genoma bacteriano • Processo pelo qual o DNA na forma livre é incorporado por célula receptora • Células competentes • Eletroporação e choque térmico • Experimento de Griffith, 1928 61 Transformação Transformação 62 Fonte: http://microbiologiaja.blogspot.com.br/ Descrita em 1928 por Frederick Griffith Experimento de Griffith, realizado em 1928 63 • Elementos genéticos móveis ou transponíveis • Sequências de DNA capazes de se movimentar de uma região para outra no genoma • Descobertos por Barbara McClintock em 1950 64 Transposons 65 Tipos de transposons Fonte: Pray, 2008 66 Estrutura dos transposons • Flanqueados por regiões terminais repetidas invertidas Fonte: Pray, 2008 • Quais são as fontes de transmissão de agentes infecciosos em animais? • Quais são as propriedades patogênicas das bactérias? • O que é um patógeno oportunista? • O que são endo e exotoxinas? • O que são microrganismos mesófilos? 67 Mensagens principais Mensagens principais • Quais são os principais subprodutos da fermentação? • Quais são as 4 etapas da divisão bacteriana? • O que é um mRNA policistronico? • Defina conjugação, transdução e transformação? • Qual a diferença entre o ciclo lítico e lisogênico? 68 69 Fonte: http://www.google.com/imghp Sugestões de leitura 70 • Livros: – MADIGAN, M.T.; MARTINKO, J.M.; PARKER, J. 2004. Microbiologia de Brook, 10a ed. São Paulo, Brasil: Prentice Hall, 608p. – NUNEZ, S., GARCEZ, A.S., RIBEIRO, M.S. 2015. Terapia Fotodinâmica Antimicrobiana na Odontologia, Elsevier Brasil, Medical, 312p. – ROSENTHAL, K.S., PFALLER, M.A., MURRAY, P.R. 2009. Microbiologia Médica - 6ª Ed Rio de Janeiro: Editora Elsevier, 960p. – TORTORA, G.J. FUNKE, B.R., CASE.C.L. Microbiologia, 10ºed. 2012. 967p. – VERMELHO, A.B.; BASTOS, M.C.F., BRANQUINHA DE SÁ, M.H. 2008. Bacteriologia Geral. Guanabara Koogan, 604p. • Artigos: – PAPANIKOU, E., KARAMANOU, S., ECONOMOU, A. 2007. Bacterial protein secretion through the translocase nanomachine. Nature Reviews Microbiology 5, 839-851.– PRAY, L.A. 2008. Transposons: The Jumping Genes. Nature Education 1(1):204. • Sites: – http://icb.ufmg.info/mic/diaadia/wp-content/uploads/2014/03/Metabolismo-Energ%C3%A9tico- Microbiano.pdf – http://www.microbiologybook.org Sugestões de leitura camposvet@unb.br Grato pela atenção!!! 71
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