Aula 03 Processamento de Amostras

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FASE ANALÍTICA DO 
DIAGNÓSTICO CLÍNICO
Processamento de amostras
Universidade Federal do Piauí – UFPI
Campus Ministro Reis Veloso - CMRV 
Disc.:Microbiologia Médica 
 Selecionar o meio de cultura adequado para amostra;
 Determinar a temperatura e a atmosfera de incubação 
para o isolamento dos MO de potencial significado;
 Determinar quais microorganismos isolados no meio 
primário necessitam de uma melhor caracterização;
 Determinar se serão necessários testes de 
sensibilidade antimicrobiana
Procedimentos para processamento de amostras
As abordagens quanto a determinação dos testes devem 
atender laboratórios e clínicas em geral.
A escolha de um protocolos específicos adotados de 
acordo com necessidade local. Ex.: hospital rural 
certamente diferirá de uma clínica médica urbana.
A administração do LAB. deve eliminar muito do trabalho 
clínico se relevância do passado.
O dia da “pancultura” tenha acabado.
Nas ultimas décadas os microbiologistas tentam, segundo 
Bartlette, “ controle de processamento”.
Procedimentos para processamento de amostras
“Restringir o processamento de amostras de cultura a 
produção de informação relevante e útil”.
Procedimentos para processamento de amostras
1 - Seleção de Meios de Cultura Primários;
2 - Técnicas de Transferência e Cultura de Amostras Clínicas;
3 – Técnicas para Cultura de Amostras;
Processamento de amostras
Meios de Cultura
Conjunto de substâncias, formuladas de
maneira adequada, capazes de promover o
cresc. bacteriano, em condições de laboratório.
Diferentes espécies de bactérias, variam
extensivamente quanto as exigências mínimas
de substâncias nutrientes;
A maioria das bact. pode ser cultivada em
laboratório, utilizando-se meios nutrientes;
Processamento de amostras
Meios de Cultura - Características básicas
- Fonte de Carbono e Nitrogênio;
- Fonte de Energia;
- Sais Minerais;
- Fatores de Crescimento;
- Condições Físicas;
- Esterilização.
Processamento de amostras
Meios de Cultura - Classificação
-De acordo com seu conteúdo físico, os meios de cultura podem 
ser líquidos ou caldos, semi-sólidos e sólidos.
Líquidos ou caldos: crescimento indiscriminado com turvação do 
meio
Semi-sólido: adição de menor quantidade de ágar, mobilidade 
bacteriana
Sólidos: crescimento de colônias isoladas, muito uitilizado para 
culturas puras
-
- De acordo com seu conteúdo químico, os meios de cultura 
podem ser sintéticos ou complexos.
1. Meios Básicos: São os de uso geral podem ser usados 
como base no preparo de outros meios.
2. Meios de Enriquecimento: geralmente líquido, de 
composição química rica em nutrientes, com a finalidade 
de permitir que as bactérias contidas em uma amostra 
clínica aumentem em número.
Ex.: Caldo Brain Heart Infusion (BHI) e Caldo Tetrationato.
Processamento de amostras
Meios de Cultura
3. Meio Diferencial: possibilita a distinção entre vários gêneros e 
espécies de microrganismos, por possuir substâncias que 
permitem uma diferenciação presuntiva, evidenciada na 
mudança de coloração ou na morfologia das colônias.
Ex.: Agar EMB, Agar McConkey e Agar Hektoen.
4. Meio Seletivo: a finalidade deste tipo de meio é selecionar as 
espécies que se deseja isolar e impedir o desenvolvimento de 
outros germes (adição de corantes, antibióticos e outras 
substâncias com capacidade inibitória para alguns germes.
Ex.: Agar Manitol Salgado e Agar SS
Processamento de amostras
Meios de Cultura
Processamento de amostras
Meios de Cultura
5. Meio de Transporte: consiste em um meio isento de 
nutrientes, contendo um agente redutor (Tioglicolato ou cisteína). 
Geralmente mantém o pH favorável, previne a desidratação de 
secreções durante o transp. e evita a oxidação e auto-destruição
enzimática dos patógenos presentes.
Ex.: Meio de Stuart, Meio de Cary-Blair e Caldo Tioglicolato.
Desvios no valor do pH água não neutra; frasco mal fechado; 
superaquecimento durante a preparação; meio de cultura 
dessecado ou c/ validade vencida.
Turbidez e precipitação água insuficientemente deionizada; 
recipientes de preparo mal lavados; pH incorreto ou desajustado;
superaquecimento durante a preparação; substâncias empregadas 
c/ impurezas.
Meios de cultura contaminados esterilização insuficiente; 
contaminação acidental.
Possíveis Defeitos no Preparo dos Meios:
Processamento de amostras
Pouco crescimento de microrganismo presença de inibidores 
do crescimento; microrganismos já alterados no material 
investigado; pH incorreto; aditivos mal dosificados; 
superaquecimento na preparação.
Excessivo crescimento de microrganismos superaquecimento 
na preparação com destruição de substâncias inibidoras;
aditivos mal dosificados; inoculo excessivo de m.o.
Crescimento atípico meio de cultivo errado ou mal preparado; 
com prazo de validade vencido; condições de cultivo 
inadequadas.
Possíveis Defeitos no Preparo dos Meios:
Processamento de amostras
Técnicas de Inoculação
- Técnica de esgotamento por meio de estrias superficiais:
A amostra é semeada na superfície do meio solidificado com 
uma alça de semeadura para esgotar a população, assim em 
algumas regiões do meio, células individuais estarão 
presentes
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Técnicas para Cultura de Amostras
Processamento de amostras
Técnicas para Cultura de Amostras
- Técnica da placa derramada (pour-plate)
A amostra é diluída em tubos com meios liquefeitos (45 C). 
Após homogeneização são distribuídos em placas de Petri.
Após a solidificação dos meios as placas são incubadas. As 
colônias se desenvolverão tanto acima quanto abaixo da 
superfície (colônias internas).
Técnica da placa derramada (pour-plate)
Processamento de amostras
Técnicas para Cultura de Amostras
- Métodos de inoculação de tubos c/ meio líquido/sólido em 
tubo de ensaio.