Imunologia Clínica: Introdução Imunodiagnóstico

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IMUNOLOGIA CLÍNICA – Introdução 
Imunodiagnóstico 
PROFº MS. ANA LÚCIA HANEMANN 
Conceitos Básicos de imunodiagnóstico 
Progresso tecnológico – Ag e Ac; 
Diagnóstico direto – Diagnóstico indireto; 
Imunodiagnóstico; 
Presença de Ag e Ac no organismo. 
 
ANTÍGENOS 
 Toda estrutura capaz de interagir com o sistema 
imune; 
 Imunogenicidade; 
 Self and non-self; 
 Antigenicidade; 
 Haptenos – Moleculas carreadoras, grupo 
haptenico; 
 Determinantes antigênicos- epítopo. 
O antígeno monovalente ou multivalente 
 hapteno com um 
único epítopo 
microrganismo com diferentes epítopos 
Hapteno: é incapaz de induzir uma resposta imune; 
O hapteno conjugado a um carreador pode induzir uma resposta imune. 
ANTICORPOS 
 São imunoglobulinas sintetizadas por linfócitos B; 
 5 classes de imunoglobulinas; 
 Principais funções – Neutralização, opsonização, 
destruição e fagocitose; 
 
 Representada duas cadeias polipeptídicas leves e 
duas cadeias polipetídicas pesadas. 
 O anticorpo é constituído por quatro cadeias 
 polipeptídicas, possuindo dois sítios 
 de ligação ao antígeno. 
 
Antígeno 
cadeias 
sítios de ligação 
anticorpo = imunoglobulina 
RECEPTOR DE Fc 
Fab 
Fc 
Patógeno 1 – Liga-se ao anticorpo 
LIGAÇÃO DO Fc AO 
FAGÓCITO 
LIGAÇÃO DO Fc AO 
COMPLEMENTO 
ANTICORPOS 
 Altamente específicos para a conformação 
tridimensional do epítopo. 
EPÍTOPO 
Epítopo ou determinante antigênico: região do antígeno que se liga no anticorpo. 
ANTICORPOS 
Interações Ag e AC 
Reação entre um Ac e um Ag - natureza química. 
 
ESPECIFICIDADE - Estimulante antigênico; 
 AFINIDADE - Medida força de ligação entre o determinante 
antigênico e o sítio de combinação do anticorpo 
 afinidade > número de interações 
Pontes de hidrogênio 
O 
N 
O 
N 
Eletrostática 
- 
- 
Van der Waals 
- + 
+ - + 
- 
 - + 
Hidrofóbica 
Exclusão 
da água 
ANTICORPO ANTÍGENO 
 Forças de atração intermoleculares 
 A ligação Ag-Ac - Múltiplas ligações não-covalentes do local de união. 
 Forças de atração envolvidas nestas uniões são individualmente fracas 
 A multiplicidade das ligações - energia de ligação suficientemente forte. 
+ 
+ 
As forças hidrofóbicas 
repelem moléculas de água 
Anticorpo e as forças de interações 
AVIDEZ DO ANTICORPO 
AVIDEZ – Medida de estabilidade dos 
imunocomplexos. 
Epítopo 
Epítopo 
Uma boa adaptação entre o determinante antigênico e o sítio combinatório 
do anticorpo fornecerá o surgimento de forças atrativas intermoleculares. 
Boa adaptação Adaptação precária 
Epítopo não compartilhado. 
X’ Y 
Epítopo Y compartilhado 
 
Reatividade Cruzada 
Antígeno imunizante 
X Y Z 
Anti X Anti Y Anti Z 
Epítopos de um antígeno A são compartilhados por um outro antígeno B, 
uma parte dos anticorpos dirigidos para A também reagirá com B. 
Reação específica Reação cruzada Ausência de reação 
Anticorpos policlonais e monoclonais 
Anticorpos Policlonais 
 Anticorpo Policlonal 
Resposta a um único antígeno complexo e são heterogêneos. 
Vários clones diferentes de células B – plasmócitos 
Capaz de reagir com diferentes epítopos. 
linfócitos/plasmócitos 
anticorpos 
antígeno 
 Anticorpo monoclonal 
 Surgem a partir de um único clone de Células –homogêneos 
 Hibridomas – Célula hibridas, imortalizadas e produtoras de AC. 
 
 
 
Plasmócitos derivados de 
 um único linfócito B - Idênticos entre si. 
 
O método envolve fusão celular - linfócito B; 
 Linhagem de mieloma; 
A seleção de células. 
 
Células do baço isoladas de camundongo 
imunizado com antígeno X. 
 Anticorpo monoclonal 
Antígeno X 
Os monoclonais têm sido 
produzidos principalmente em 
camundongos. 
Mistura de células do baço incluindo algumas 
produtoras de anticorpos anti -X 
Linhagem tumoral de mieloma mutante -não 
cresce em meio seletivo (HAT) – Defeito 
HGPRT (hipoxantina-guanina 
fosforribosiltransferase) ou TK 
(timidinacinase). 
Polietilnoglicol-
Fusão in vitro 
Mistura de células fusionais e não fusionais. 
Seleção in vitro em meio de cultivo – HAT (Hipoxantina aminopteina e timidina) 
Pesquisa de anticorpo anti- X nos sobrenadantes para posterior expansão dos clones positivos 
Hibridomas produzindo anti corpo anti- X (Ac monoclonal anti-X) 
. 
 
 
 
 
Preparada a diluição no cultivo de modo que em cada poço fique só uma célula mãe /clone 
Anticorpos monoclonais 
 ZONA DE EQUIVALÊNCIA 
EFEITO PRÓ - ZONA 
EFEITO PÓS - ZONA 
Interações AG e AC 
Interações AG e AC 
Zona de excesso 
de anticorpo Zona de Equivalência 
Zona de excesso 
 de antígeno 
+ - - 
+ 
- - 
Anticorpo livre 
Antígeno livre 
100%-- 
Percentual de 
Complexo imune 
precipitado 
Quantidade de antígeno adicionado 
APLICAÇÕES DOS ANTICORPOS 
* Diagnóstico 
* Tratamento 
* Transplantes 
* Tipagem sanguínea 
* Pesquisa