Reação de Precipitação e Aglutinação TRABALHO

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Reação de Precipitação e Aglutinação:
A importância da sorologia reside na possibilidade de pesquisa de Ac ou Ag específicos por testes rigorosamente padronizados é de grande valia na definição da suspeita clínica, na identificação da fase da infecção ( Ex: IgM {Imunoglobulina M}: processos agudos e IgG {Imunoglobulina G}: processos crônicos - imunoglobulina de memória), no diagnóstico de doenças congênitas, na seleção de doadores/receptores de sangue e de órgãos, na avaliação do prognóstico da doença, na avaliação da eficácia terapêutica, na avaliação da imunidade adquirida ou induzida e na verificação do agravamento do processo patológico (presença de imunocomplexos depositados em nível de glomérulos, identificados pela imunoflorescência indireta anticomplemento, indicativa de piora da patologia). Apresenta, ainda, importância epidemiológica estabelecendo a prevalência da doença, verificando a erradicação ou a reintrodução de uma doença em uma área/população.
Testes sorológicos ou Imunoensaios são técnicas para a detecção e/ou quantificação de antígenos e anticorpos, ou outras substâncias que desempenhem o papel de antígeno no ensaio, tais como drogas, hormônios, DNA, RNA, citosinas.
As reações de precipitação e de aglutinação decorrem, respectivamente da ligação entre o Ac e Ag solúveis ou particulados.
- Precipitação: É qualitativo. Baseada na presença de precipitados visíveis formados pela atração Ag-Ac (antígenos -anticorpos), Interações polivalentes de reações reversíveis. É geralmente um teste simples, de fácil execução e baixo custo, contudo apresenta falhas de sensibilidade e problemas com a reprodutibilidade.
Imunodifusão: Difusão de uma substância solúvel em um meio fluido. As técnicas de imunodifusão detectam a reação Ag-Ac por intermédio da formação de um precipitado.
Imunodifusão Radial: Dosagem de Ag ou Ac – HALO DE PRECIPITAÇÃO.
Imunodifusão Dupla: Detecção de Ac – BARREIRA IMUNOESPECÍFICA.
Imunoeletroforese: Avaliação de Ig – ELETROFORESE EM GEL (separação dos componentes) + IMUNODIFUSÃO (arco de precipitação).
- Aglutinação: É caracterizada pela formação de agregados visíveis como resultado da interação de anticorpos específicos e partículas insolúveis que contém determinantes antigênicos na superfície. Teste altamente sensível, utilizado no diagnóstico de vírus, bactérias, protozoários e fungos; doenças autoimunes; detecção de hormônios e tipagem de grupos sanguíneos. De fácil execução (leitura visual) e baixo custo, apresenta boa especificidade e reprodutibilidade. Tem baixa sensibilidade e pouca estabilidade Ag-Ac.
Teste De Aglutinação Direta: Ac + Ag = Complexo precipitado. Testes feitos em diluições crescentes, com antígenos na mesma concentração, onde os resultados são expresso em título anti-soro - a máxima diluição onde ocorre a reação. Ex.: Tipagem sanguínea, Toxoplasmose, Salmoneloses,Tripanossomíase.
Inibição Da Hemaglutinação Direta: Ac + Vírus = Ausência de Aglutinação (positivo para presença de Ac na amostra) Antígenos virais aglutinam hemácias. Anticorpos presentes na amostra inibem a aglutinação indicando presença de anticorpos. Ex.: Rubéola, Sarampo, Influenza.
Teste De Aglutinação Indireta: (Ag + Partícula Inerte) + Ac = Aglutinação Partículas inertes e hemácias podem ser sensibilizadas por adsorção passiva (contato direto com o antígeno solúvel), por adsorção via agente químico (ácido tânico e cloreto de cromo), por conjugação do Ag (ligações químicas covalentes).
Inibição Da Hemaglutinação Indireta: Baseia-se na competição, pelos sítios de combinação do Ac, entre o Ag fixado à hemácia e o Ag solúvel ou hapteno. O grau de inibição relaciona-se com a quantidade do Ag presente na amostra e com a afinidade pelos sítios de combinação do anticorpo. Ex.: Detecção de Ag na hepatite e na hemofilia.
Hemaglutinação Passiva: Proteínas podem ser adsorvidas a hemácias tratadas com ácido tânico e podem ser aglutinadas por Ac específicos. Geralmente é utilizado hemácias de carneiro ou humanas do grupo O. O teste considerado positivo: verifica formação de tapete cobrindo o fundo da cavidade da placa em “V” (título será a máxima diluição em que se observa a formação de tapete). Enquanto que o teste será considerado negativo quando hemácias sedimentam formando “botão” compacto. Ex.: Pesquisa de Ac para Trypanosoma cruzi, Treponema pallidum (sífilis), Toxoplasma gondii.
Teste De Combs: (Teste de Antiglobulina)
- Teste de Cooms Direto: Quando anticorpos se ligam a eritrócitos, eles nem sempre resultam em aglutinação. Isso pode se dever à relação antígeno/anticorpo, em que o antígeno em excesso, o anticorpo em excesso ou em alguns casos cargas elétricas nas células vermelhas sanguíneas prejudicam a eficiência da ligação cruzada entra as células. Esses anticorpos que ligam, mas não causam aglutinação das células vermelhas sanguíneas são às vezes referidos como anticorpos incompletos. Isso não quer dizer de forma nenhuma que os anticorpos sejam diferentes em sua estrutura, embora isso seja o que se pensava que fosse o caso. Pelo contrário, esta é uma definição apenas funcional. Para detectar a presença de anticorpos não-aglutinadores nas células vermelhas sanguíneas, simplesmente se adiciona um segundo anticorpo diretamente contra a imunoglobulina (anticorpo) que cobre as células vermelhas. Esta anti-imunoglobulina pode agora fazer reação cruzada com as células vermelhas sanguíneas e levar à aglutinação. 
- Teste de Coombs Indireto: Se for necessário saber se uma amostra de soro tem anticorpos dirigidos contra uma célula vermelha sanguínea em particular e você quer se assegurar de que também vai detectar anticorpos não-aglutinadores potenciais na amostra, é realizado um teste de Coombs Indireto (Figura 11). Este teste é feito incubando as células vermelhas sanguíneas com a amostra de soro, lavando-se para retirar quaisquer anticorpos não ligados e depois adicionando um segundo reagente anti-imunoglobulina para fazer ligação cruzada com as células.