Técnicas+Hematológicas+Básicas

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Técnicas Hematológicas 
Básicas
Hematologia
Sistema 
Imunológico
Hemostasia
CÉLULAS SANGÜÍNEAS
Oxigenação 
dos tecidos
Papa de
hemácias
PLASMA
“Buffy coat”
Nutrientes e catabólitos
Fatores da coagulação
Leucócitos e plaquetas
COLETA DE SANGUE
Sangue anticoagulado
COMPOSIÇÃO DO PLASMA
90% DE H2O
1% DE SAIS INORGÂNICOS NaCl Na 2CO3
KCl Na2SO4
CaCl2
2% DE METABÓLITOS ORGÂNICOS E PRODUTOS
DE EXCREÇÃO: Glicose, Aminoácidos, Lactatos,
Piruvato, Corpos Cetônicos, Uréia, Ác.Úrico
7% PROTEÍNAS PLASMÁTICAS: Albumina,
Imunoglobulinas, Lipoproteínas, Proteínas da
Coagulação, Hormônios, Vitaminas, Enzimas
Hemograma Completo
l ERITROGRAMA
l Contagem e avaliação morfológica dos eritrócitos
l LEUCOGRAMA
l Contagem total e diferencial de leucócitos
l PLAQUETAS
l Contagem e avaliação morfológica 
HEMOGRAMA
• Baixo custo
• Precisão
• Depende da habilidade 
técnica
• Demorado
Automatizado
MÉTODOS ANALÍTICOS
Manual
Semi-
automatizado
• Custo elevado dos equipamentos
• Precisão
• Depende da manutenção / calibração
do equipamento
• Rapidez
HEMOGRAMA
Micro 
Hematócrito
Contagem de eritrócitos Dosagem de hemoglobina
Os índices hematimétricos VCM, HCM e CHCM são
obtidos dos resultados referentes à contagem de eritrócitos,
dosagem de hemoglobina e porcentagem de hematócrito.
AVALIAÇÃO DAS CÉLULAS DO SANGUE EM HEMATOLOGIA 
LABORATORIAL POR PROCEDIMENTOS 
NÃO AUTOMATIZADOS
TÉCNICA DE PUNÇÃO: 
1. Tricotomizar a região (se necessário), fazer a antissepsia com algodão
embebido em álcool iodado.
2. Fazer o garrote e introduzir a agulha na pele até atingir a veia.
3. Aspirar lentamente até a quantidade de sangue exigida. Aliviar o torniquete.
4. Retirar a agulha e comprimir a região com algodão.
5. Retirar a agulha da seringa e colocar o sangue no frasco (pelas paredes) com
anticoagulante e inverter o frasco várias vezes a fim de que o anticoagulante se
distribua homogeneamente no sangue.
CAUSAS DE HEMÓLISE: 
- descarga violenta da seringa
- agitação violenta com anticoagulante
- calor excessivo
- contaminação bacteriana
Contagem de células em 
CÂMARA DE NEUBAUER
Métodos Manuais
Métodos manuais - Esfregaço Sangüíneo
Colocar gota de sangue total na extremidade de uma lâmina de vidro (A).
Posicionar a borda de uma segunda lâmina (mantida a um ângulo de 45 graus) sobre a gota de sangue até que
essa disperse (B).
Posicionar a primeira lâmina em uma superfície plana e tracionar a segunda lâmina rápida e uniformemente
para a outra extremidade da primeira (C).
O esfregaço deve ter uma borda fina e irregular, como mostra a ilustração (D).
Características
Métodos manuais - Esfregaço Sangüíneo
Eosina
Azul de Metileno
Azures de Metileno
Coloração:
 Mistura Romanowsky • Corantes 
– Leishmann
– Wright
– May Grünwald Giemsa 
(MGG)
– Rosenfeld
Métodos manuais - Esfregaço Sangüíneo
MÉTODOS DE COLORAÇÃO DE LEISHMAN E ROSENFELD
1. Fazer o esfregaço e secar;
2. Colocar 15 gotas do corante (Leishman ou Rosenfeld)
sobre a lâmina durante 3 minutos.
3. Em seguida adicionar 15 gotas de H2O destilada.
4. Deixar por 15 minutos
5. Escorrer o corante e lavar em água corrente, secar e
examinar ao microscópio com objetiva de imersão.
Alternativa: pode-se usar os corantes rápidos, tipo panótico,
com coloração sequencialrápida em 3 soluções.
Área de Análise
Cabeça Corpo Cauda
Métodos manuais - Esfregaço Sangüíneo
ERITROGRAMA
• Eritrócitos: milhões/mm3
• Hemoglobina: g/dL
• Hematócrito: %
• Indices hematimétricos
VCM: Volume corpuscular médio (fL)
HCM: Hemoglobina corpuscular média (pg)
CHCM: Concentração Hemoglobina corpuscular média (%)
RDW: Coeficiente de variação do VCM (%)
• Avaliação Morfológica
Tamanho Forma Coloração
HEMOGRAMA
DETERMINAÇÃO DA HEMOGLOBINA
 Método da Cianometahemoglobina:
 TÉCNICA: 
◦ Colocar num tubo 5 mL de solução de Drabkin (200mg de
ferrocianeto de potássio, 50mg de cianeto de potássio, 1g
de bicarbonato de sódio e completar para 1.000 mL de
água destilada);
◦ Adicionar 20 μl de sangue;
◦ Agitar, deixar por 5 minutos e fazer a leitura colorimétrica
com comprimento de onda de 540 nm, usando a solução
de Drabkin como branco;
◦ Anotar a leitura e compará-la com uma solução padrão.
Hematócrito Método Manual
Microcentrifugação
centrifugação
11.000 rpm
3 a 5 minutos
Tubo capilar
Comp: 75mm 
Diâmetro: 1mm 
Retenção de plasma entre os eritrócitos
HEMOGRAMA- Eritrograma
Microcentrifuga
Método do Micro-Hematócrito
1. Encher dois terços de um capilar com
sangue mais anticoagulante;
2. Limpar a extremidade com pano ou papel
filtro;
3. Fechar a extremidade do tubo na chama,
protegendo o sangue com o dedo e
rotacionando lentamente o tubo;
4. Centrifugar na centrífuga para
microhematócrito por 5 minutos a 11.500 rpm;
5. Fazer a leitura em um cartão especial, cujo
resultado é dado em porcentagem;
OBS: Pode-se usar um tubo heparinizado
colhendo-se o sangue diretamente do paciente.
HEMATÓCRITO OU VOLUME GLOBULAR 
Hematócrito
HEMOGRAMA- Eritrograma
Contagem de células em 
CÂMARA DE NEUBAUER
Métodos Manuais
Métodos Manuais – Câmara de Neubauer
Cálculo do Fator de Multiplicação
 Área de contagem = 5 da área central
 Unidade do resultado
 Diluição da amostra
0,02 mm3
mm3
1:200
no de céls 1mm3
céls contadas 0,02mm3
Céls /mm3 = (céls contadas x 1 / 0,02) x 200
• Fator de multiplicação 10.000
Métodos Manuais – Câmara de Neubauer
Critérios para Contagem das Células
Célula contada
Célula não contada
Métodos Manuais – Câmara de Neubauer
Contagem de Hemácias 
Método Manual
 Príncipio: diluição em solução isotônica e 
contagem em hemocitômetro.
 Diluentes
◦ Líquido de Dacie : citrato trissódico
◦ Líquido de Gower : sulfato de sódio
◦ Líquido de Hayen : bicloreto de mercúrio
 Fator de diluição: 1:200
HEMOGRAMA- Eritrograma
Contagem de Hemácias
 Área de contagem : 1/5 do quadrado central
 Aumento : 400x
HEMOGRAMA- Eritrograma
CONTAGEM GLOBAL DE ERITRÓCITOS: 
 Proceder da mesma maneira, porém utilizar a pipeta de Thoma para glóbulos
vermelhos e utilizar como diluente a solução de Hayen;
 Alternativamente pode-se relizar a macrodiluição em tubo de ensaio,
respeitando-se a proporção de 1:200;
 Contar as hemácias de 5 quadrados médios centrais.
 Somar o resultado de cada um dos 5 quadrados médios e multiplicar por
10.000.
CÁLCULO DA CONTAGEM GLOBAL DE ERITRÓCITOS: 
 Área do quadrado central maior: 1mm2
 Profundidade: 1/10mm
 Diluição: 1:200.
 Número total de hemácias = No de células contadas x 10 (altura) x 200
(diluição) x 5 (5 de 25 quadrados médios)
 Número total de hemácias = no de hemácias contadas x 10.000 = no total de
hemácias/μL) de sangue.
Hemácias Ht Hb
(milhões/mm3) (%) (g/dL)
 Homens : 4,5 a 6,0 40 a 54 13,0 a 18,0
 Mulheres : 4,0 a 5,2 36 a 47 11,6 a 16,0
 RN : 5,0 a 6,0 60 a 62 >17,0
Valores Referenciais e Interpretação
Hemoconcentração
Poliglobulias
Hemodiluição
Anemias
HEMOGRAMA- Eritrograma
VCM (fL) = Ht x 10
Hem (milhões/mm3)
 Valores de Referência: Adultos : 80 a 100 Fl
 Interpretação
< 80 fL Microcitose
> 100 fL Macrocitose
Índices Hematimétricos
HEMOGRAMA- Eritrograma
HCM (pg) = Hb x 10
Hm (milhões/mm3)
 Valores de Referência: 28 a 32 pg
 Interpretação
AumentoAnemias macrocíticas
Diminuição Anemias hipocrômicas
Índices Hematimétricos
HEMOGRAMA- Eritrograma
CHCM (%) = Hb x 100
Ht
 Valores de Referência:32 a 36 %
 Interpretação
Aumento Esferocitose Hereditária
Diminuição Anemias hipocrômicas
Índices Hematimétricos
HEMOGRAMA- Eritrograma
Morfologia Eritrocitária
 Tamanho
◦ Normocítica
◦ Anisocitose
◦ Microcitose
◦ Macrocitose
 Coloração
◦ Normocrômica
◦ Hipocromia
◦ Policromasia
 Forma
◦ Poiquilocitose
◦ Eliptócitos, Esquisócitos, Esferócitos, Dacriócitos,
Drepanócitos, Hem em alvo...
 Inclusões
◦ Ponteado basófilo, Corpúsculos de Howell-Jolly, Anel de
Cabot.
HEMOGRAMA- Eritrograma
• Leucócitos totais: /mm3
• Contagem diferencial
• Relativa: %
• Absoluta: /mm3
HEMOGRAMA
LEUCOGRAMA
Contagem de Leucócitos Totais
Método Manual
 Princípio: Lise de células anucleadas e 
contagem em hemocitômetro;
 Reagente : Diluente de Turk
 Fator de diluição : 1/20
◦ Leucopenia (>2.500): 1/10
◦ Leucocitose (< 50.000): 1/50 ; 1/100 ; 1:200
HEMOGRAMA- Leucograma
Contagem de Leucócitos Totais
 Área de contagem 
4 quadrado laterais
 Aumento 
100 x
 Cálculo 
Leuco/ mm3 = Leuc. contados x 50
HEMOGRAMA- Leucograma
CÁLCULO DA CONTAGEM GLOBAL DE LEUCÓCITOS: 
 Área de cada quadrado maior: 1mm2
 Profundidade: 1/10mm
 Diluição: 1:20.
 Número total de leucócitos = Número de células contadas x
10 (altura) x 20 (diluição) / 4 (número de quadrados)
 no total de leucócitos x 50 = no total de leucócitos/mm3
(ou microlitro – μL) de sangue.
Contagem de Leucócitos Totais
 Valores de Referência
Idade
◦ Adultos : 4.000 a 11.000 / mm3
◦ RN : 10.000 a 25.000 / mm3
Raça
◦ Negros e orientais
HEMOGRAMA- Leucograma
Contagem de Leucócitos Totais
Interpretação
 Leucocitose
◦ Fisiológica : Gravidez, Parto, Digestão,
Repouso, Exercícios físicos.
◦ Patológica : Infecciosa, Pós-hemorrágica, Pós-
traumática, Intoxicação química,
Medicamentos,Desidratação, Hemólise
HEMOGRAMA- Leucograma
Interpretação
 Leucopenia
◦ Diminuição da produção
 Medicamentos
 Infecção
 Intoxicação
 Substituição da medula óssea
◦ Destruição aumentada
 Anticorpos
HEMOGRAMA- Leucograma
Contagem Diferencial de Leucócitos
Contagem Relativa
 Blastos.....................0%
 Prómielócitos............0%
 Mielócitos.................0%
 Metamielócitos..........0%
 Bastonetes..............0-5%
 Segmentados..........40-70%
 Eosinófilos...............1-7%
 Basófilos..................0-2%
 Linfócitos típicos.....20-40%
 Linfócitos atípicos......0-1%
 Monócitos................2-10%
Origem Corpo Cauda
Linfócitos Neutrófilos
Monócitos
HEMOGRAMA- Leucograma
Contagem Diferencial de Leucócitos
Contagem Absoluta
100 leucócitos -------- 65 neutrófilos (%)
Leuc. totais (mm3) -------- neutrófilos (mm3)
Neutrófilos (mm3) = % neutrófilos x Leucócitos totais
100
HEMOGRAMA- Leucograma
Correção de Leucócitos
HEMOGRAMA- Leucograma
Correção de Leucócitos
Eritroblastos > 10 / 100 leucócitos contados
Leucócitos corrigidos = Leucócitos totais x 100
100 + nº eritroblastos
HEMOGRAMA- Leucograma
HEMOGRAMA - Plaquetas
• Plaquetas: /mm3
• VPM: fL
• Plaquetócrito: %
• PDW: %
Equipamentos 
automatizados
HEMOGRAMA - Plaquetas
Contagem de Plaquetas
Método Manual
 Contagem direta em hemocitômetro
◦ Após lise dos eritrócitos
 Método de Brecher Conkite
◦ Diluição com Oxalato de amônio
◦ Sem lise dos eritrócitos
 Diluição com Citrato trissódico
(Líquido de Dacie usado para contagem de 
eritrócitos)
 Contagem indireta
◦ Método de Fônio
HEMOGRAMA - Plaquetas
Método de Brecher Conkite
 Reagente : Oxalato de amônio 1%
 Fator de diluição : 1/100
 Profundidade: 1/10mm
 Área de contagem : área central (mm2) (25 quadrados)
 Aumento : 400 x
 Cálculo : plaquetas contadas x 1.000 = mm3
HEMOGRAMA - Plaquetas
Método de Brecher Conkite
 Valores de Referência
◦ 150.000 a 400.000/mm3
 Interpretação
◦ Aumento : trombocitose
◦ Diminuição : trombocitopenia
HEMOGRAMA - Plaquetas
Comparação de Métodos
 Manual Automatizado 
Hemácias (milhões/mm
3
) Contagem direta em câmara de Neubauer Impedância elétrica 
Hemoglobina (g/dL) Dosagem colorimétrica 
Cianometahemoglobina 
Dosagem colorimétrica 
Cianometahemoglobina 
Hematócrito (%) Microcentrifugação Ht = (Hem x VCM)/10 
VCM (fL) VCM = Ht x 10 
 hem/mm
3
 
Impedância elétrica 
HCM (pg) HCM = Hb x 10 
 hem/mm
3
 
HCM = Hb x 10 
 hem/mm
3
 
CHCM (%) CHCM = Hb x 100 
 Ht 
CHCM = Hb x 100 
 Ht 
RDW (%) 
 
-------- Coeficiente de Variação do VCM 
Leucócitos totais Contagem direta em câmara de Neubauer Impedancia elétrica 
Contagem Diferencial Microscopia ótica (100 células) Citometria, Citoquimica e Laser 
(10.000 células) 
Plaquetas Contagem direta em câmara de Neubauer Impedância elétrica 
 
 
Referências Bibliográficas: 
 Dacie JV & Lewis SM.- Practical Haematology. 8ª Edition. 
Churchill Livingstone. 1995. 
 LORENZI, T.F. Atlas de Hematologia - Clínica Hematológica 
Ilustrada. 1ª. ed. Rio de Janeiro: Guanbara Koogan, 2006.
 CARVALHO, W. F. Técnica Hematologia e Imunohematologia. 
Belo Horizonte: Coopmed, 2002.
 LORENZI,T. Manual de Hematologia. Rio de Janeiro: Medsi, 
2002.
 www.ciencianews.com.br
 www.hemoglobinopatias.com.br
 a.c.t@terra.com.br
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