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Parâmetros e Controle de Qualidade
em Imunoensaios
CONHECIMENTO SOBRE OS PARÂMETROS DE VALIDAÇÃO DE TESTES SOROLÓGICOS.
AUTOR(A): PROF. WALTER KINDRO ANDREOLI
AUTOR(A): PROF. WALTER KINDRO ANDREOLI
Os imunoensaios são caracterizados pela detecção da presença ou não de antígeno ou anticorpo e trata-se
de uma ferramenta importante na prática clinica. Abaixo vemos situações em que recorremos aos
imunoensaios:
Definição da etiologia da doença.
Diagnóstico de doença congênita.
Diagnóstico diferencial de doenças infecciosas.
Diferenciação de fases da doença.
Prognóstico da doença.
Seleção de doadores de sangue.
Seleção de doadores e receptores de órgãos.
Dosagens hormonais.
Monitoramento da eficácia terapêutica.
Critérios de cura.
Estabelecimento da prevalência da doença.
Verificação de reintrodução de novos casos em áreas consolidadas.
Avaliação da imunidade específica após vacinação.
Pesquisa de antígenos em células ou tecidos
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Teste de referência /Gold Standard Test: refere-se ao teste ou procedimento que é
utilizado para definir o verdadeiro estado do paciente. São chamados também de padrão-
ouro.
O resultado de um teste de laboratório reflete a situação clinica do paciente no momento da coleta da
amostra e quando bem avaliado, representa uma importante ferramenta de auxílio para o diagnóstico.
Os exames laboratoriais são realizados por solicitação médica, com o objetivo de diagnosticar, monitorar ou
acompanhar o tratamento de uma doença.
Todos os testes de diagnóstico têm seus limites, pois há situações em que a intensidade do que está se
buscando é tão diminuída que não é detectável. Sabendo disso, todo resultado deve ser avaliado junto com
dados clínicos, epidemiológicos e laboratoriais.
O resultado de todo exame laboratorial deve ter qualidade e isso só será possível se houver padronização
dos processos e controle de qualidade, desde a aquisição dos insumos e reagentes até a emissão do
resultado.
O diagnóstico laboratorial envolve três etapas: a pré-analítica, a analítica e a pós-analítica. Qualquer falha
nessas etapas afetará o resultado dos testes.
Agora vamos estudar alguns aspectos importantes de validação da etapa analítica, que consiste na etapa em
que o ensaio é realizado.
O teste ideal deveria sempre fornecer o resultado correto, ou seja, negativo para quem não tem a doença e
positivo para quem possui a doença. Como não existe um teste com 100% de acerto, sempre que obtemos
um resultado:
POSITIVO pode ser verdadeiro positivo (VP) ou falso positivo (FP).
NEGATIVO este pode ser verdadeiro negativo (VN) ou falso negativo (FN).
Diante da possibilidade de falso resultado, como podemos validar um imunoensaio?
Na validação de um teste sorológico vários parâmetros devem ser analisados para definir em termos
quantitativos ou qualitativos se este é útil para o fim que se destina.
Um teste diagnóstico é considerado útil quando ele identifica bem a presença da doença. Antes de ser
adotado o teste deve ser avaliado para verificar sua capacidade de acerto. Esta avaliação é feita aplicando-se
o teste a dois grupos de pessoas: um grupo sabidamente doente o outro sabidamente não doente. Nesta
fase, o diagnóstico é feito por outro teste chamado padrão ouro.
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A amostragem a ser utilizada é muito importante na definição dos parâmetros intrínsecos. Devemos
selecionar populações de indivíduos sabidamente doentes e não-doentes para a finalidade diagnóstica que
se destina.
Na validade intrínseca são avaliados parâmetros como:
sensibilidade, especificidade e eficiência que referem-se a análises específicas do teste e fornecem
resultados consistentes independentes da prevalência da doença.
valor preditivo positivo e valor preditivo negativo que são parâmetros influenciados pela prevalência da
doença.
Validade extrínseca de um teste: refere-se a capacidade do teste em detectar a real situação da população
em relação a uma doença além do desempenho do mesmo nesta detecção. Para essa análise são avaliados
parâmetros como:
reprodutibilidade
precisão
Vamos conhecer e aprender como são obtidos os
parâmetros de validação intrínseca.
Sensibilidade (S) - é a capacidade que o teste diagnóstico/triagem apresenta de detectar os indivíduos
verdadeiramente positivos, ou seja, de diagnosticar corretamente os doentes.
S= VP x 100/(VP+FN)
 
Especificidade (E) - é a capacidade que o teste diagnóstico/triagem tem de detectar os verdadeiros
negativos, isto é, de diagnosticar corretamente os indivíduos sadios.
E= VN x 100/(VN+FP)
Eficiência de um teste é a proporção de testes verdadeiramente positivos e verdadeiramente negativos em
relação à totalidade dos resultados. Refere-se ao desempenho ou validade do teste.
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Prevalência corresponde ao numero total de casos de uma doença ou infecção numa
determinada população num período de tempo.
Eficiência = (VP+VN)/N total
Valor preditivo positivo (VPP)
Quando fazemos um teste e temos um resultado positivo, qual a probabilidade de realmente termos aquela
doença testada?
O Valor Preditivo Positivo (VPP) responde.  VPP= VP x 100/(VP+FP)
Refere-se a probabilidade de uma pessoa com teste positivo possuir realmente a doença, baseada na
prevalência da doença na população estudada.
Valor preditivo negativo (VPN)
Quando fazemos um teste e temos um resultado negativo, qual a probabilidade de que efetivamente o
paciente não possua aquela doença testada?
O Valor Preditivo Negativo (VPN) responde. VPN= VN x 100/(VN+FN)
Refere-se a probabilidade de uma pessoa com teste negativo NÃO possuir a doença, baseada na prevalência
da doença na população estudada.
 
Valor preditivo do teste é determinado pela interação de três variáveis: a sensibilidade, a especificidade do
teste e a prevalência da doença no grupo de estudo.
 
Agora vamos conhecer mais a respeito dos parâmetros
de validação extrínseca.
Reprodutibilidade
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Capacidade de obter resultados com valores muito próximos entre si, quando analisadas uma mesma
amostra no mesmo ou em diferentes ensaios realizado por diferentes técnicos em diferentes locais.
Altamente influenciada por erros humanos, pipetas descalibradas, armazenamento inadequado de
reagentes entre outros. Quando o técnico realiza procedimentos que estão em desacordo com o descrito
pelo fabricante ou o procedimento operacional padrão (POP) do laboratório a reprodutibilidade passa a ser
também bastante comprometida.
Precisão
Concordância dos resultados obtidos após várias repetições. Quanto maior a precisão do teste, menor a
influência que sofre das condições de execução (temperatura, pH, manuseio, tempo, etc)
 
Limiar de reatividade ou cut-off
Valor que se refere ao ponto de corte (cut-off) do teste sorológico.
Este valor serve como referencia para definição do resultado ..Para cada teste diagnóstico existe um valor
de referência (limiar de reatividade ou cut-off) que determina a classificação do resultado do teste como
negativo ou positivo.
Curva da distribuição de frequência de título observada
na população
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Se você trabalha em um banco de sangue e quer selecionar um teste, deve escolher um
que apresente o menor número possível de resultados falso negativos. Este teste deverá
ter máxima... SENSIBILIDADE
Legenda: A - GRUPO NãO DOENTE B- GRUPO DOENTE LR - LIMIAR DE REATIVIDADE
O teste ideal, com 100% de sensibilidade e especificidade não existe na prática, pois a tentativa de melhorar
a sensibilidade frequentemente tem o efeito de diminuir a especificidade.
É possível verificar no gráfico acima que possuem indivíduos não doentes e doentes na faixa de título de 20
a 80. Onde definir o limiar de reatividade deste teste?
Para a definição do ponto de corte é preciso considerar a importância relativa da sensibilidade e
especificidade do teste diagnóstico, ponderando sobre as implicações dos dois possíveis erros. Portanto o
ponto de corte deve ser definido em função da aplicação que este teste se destina.
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Por outro lado, se você trabalhar em um laboratório de analises clinicas e deseja
confirmar um diagnóstico deve escolher um teste que apresente o menor número possível
de resultados falso positivos. Este teste deverá ter máxima...ESPECIFICIDADE
O teste que apresenta máxima sensibilidade é aquele que possui o ponto de corte em LR1.  Neste caso há
menor chace de obter falso negativo.
Neste caso você deve escolher kits que possuem o ponto de corte em LR2 pois há menor chance de obter
falso positivo.
ATIVIDADE FINAL
Na padronização de um teste sorológico, foi realizado o ensaio em 5000
amostras. Destas 2000 do grupo doente e 3000 sabidamente não
doentes. No grupo doente 10 amostras não apesentaram reatividade e
no grupo não-doente 10 amostras foram reagentes. A respeito deste
teste podemos afirmar:
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A. Sensibilidade é maior que a especificidade.
B. A proporção de falso-positivo é igual a de falso-negativo.
C. A proporção de falso-positivo é maior que a de falso-negativo.
D. Apresenta especificidade maior que sensibilidade.
REFERÊNCIA
VAZ, Adelaide J.; TAKEI, Kioko; BUENO, Ednéia Casagranda.  Imunoensaios: fundamentos e aplicações. Rio
de Janeiro: Guanabara-Koogan, 2007.
FERREIRA, A. Walter; ÁVILA, Sandra L.M. Diagnóstico Laboratorial das principais doenças infecciosas
 auto-imunes. Rio de Janeiro: Guanabara-Koogan, 2001.
BRASIL. Ministério da Saúde.  Secretaria de Vigilância em Saúde.  Departamento de DST, Aids e Hepatites
Virais. Coordenação Geral de Sangue e Hemoderivados. Coleta de sangue: diagnóstico e monitoramento das
DST, AIDS e hepatites virais. 2010.  Disponível em: www.aids.gov.br/telelab. Acesso em: 20/08/2014.
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