RELATÓRIO COLORAÇÃO SIMPLES

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UNIVERSIDADE JOSÉ DO ROSÁRIO VELLANO – UNIFENAS
CURSO DE NUTRIÇÃO
MICROBIOLOGIA PRÁTICA
AMANDA DE CASSIA ALVES
LUANA MARIA DUARTE PINTO
WEVERTON SANTOS TERRA
COLORAÇÃO SIMPLES 
Alfenas – MG
Março de 2018
AMANDA DE CASSIA ALVES
LUANA MARIA DUARTE PINTO
WEVERTON SANTOS TERRA
COLORAÇÃO SIMPLES 
Relatório apresentado ao Curso de Nutrição - UNIFENAS, como parte das exigências da disciplina de Microbiologia de Alimentos. 
Orientador(a): Profª. Nelma de Mello Silva Oliveira
 
Alfenas – MG
Março de 2018
SUMÁRIO
1 INTRODUÇÃO	3
2 OBJETIVOS	5
3 MATERIAL E MÉTODOS	6
4 RESULTADOS E DISCUSSÃO	8
5 CONCLUSÕES	9
REFERÊNCIAS	10
1 INTRODUÇÃO
Corantes ou pigmentos são substância que possuem a propriedade de se ligar a uma estrutura e conferir cor à mesma. Preparações coradas são comumente no exame microscópico de bactérias e outros microrganismos em microbiologia, nas quais esfregaços do material são submetidos à ação de um ou mais corantes após fixação. 
A coloração simples tem a proposta de tornar a estrutura básica das células mais visíveis. Nela, usamos apenas um tipo de corante. 
Grande parte dos microrganismos presente em nosso cotidiano, e os estudados em laboratórios são microrganismos e quase sempre invisíveis. Por isso há necessidade do uso do microscópio eletrônico e principalmente dos métodos de coloração específicos.
Coloração significa corar os microrganismos com um corante que enfatiza certas estruturas. Essas técnicas de coloração servem para mostrar as varias estruturas dos microrganismos, identificar suas estruturas internas e externas (como flagelos, membranas, cápsulas, entre outros) e ajudar a identificar e separar microrganismos similares. As colorações podem ser feitas com um ou mais corantes. Para colorar um microrganismo é necessário que esteja fixado à lâmina para visualização no microscópio.
O método de Coloração Simples consiste em uma solução aquosa ou alcoólica de um único corante básico. O objetivo básico desse método é mostrar toda a estrutura do microrganismo incluindo a forma e as estruturas básicas.
As colorações simples são aquelas em que se usa apenas um corante. A maioria dos corantes são sais, compostos por um ânion e um cátion. O azul de metileno é um sal designado de cloreto de azul de metileno, que se dissocia do seguinte modo:
CAM (cloreto de azul de metileno) —> azul de metileno + + cloreto- 
A cor azul é dada pelo cátion.
As bactérias possuem uma pequena carga elétrica negativa, quando o pH do meio é aproximadamente neutro.
Assim, as células bacterianas combinam-se com o cátion azul de metileno, obtendo-se a coloração azul das células.
São muito usados outros corantes, como o violeta de cristal e a carbol-fucsina.
Estes corantes diferem na sua taxa e grau de coloração. O azul de metileno reage com as células bacterianas à taxa mais lenta, de 30-60 segundos, o violeta de cristal é mais reativo, usualmente requer só 10 segundos, a carbol-fucsina é um corante ainda mais rápido e atua em apenas 5 segundos. 
Antes da coloração tem de se fazer um esfregaço, e fixá-lo pelo calor. Um esfregaço faz-se espalhando uma suspensão de bactérias numa lâmina limpa e deixando-a secar ao ar. O esfregaço é então levado à chama de um bico de bunsen, para fixar as bactérias pelo calor. Este passo desnatura as enzimas bacterianas, evitando que digiram partes das células, provocando a sua autólise. O calor também promove a aderência das células à lamina
2 OBJETIVOS
Aprender a confeccionar preparações coradas de bactérias para visualização de microscopia.
Aprender a fazer esfregaço.
Aprender a utilizar o método de coloração simples.
Visualizar as bactérias, submetidas à coloração simples, em microscópios. 
3 MATERIAL E MÉTODOS
3.1 Coloração simples
No experimento para observar em microscopia a estrutura básica de bactérias, foi utilizado:
Lâmina de vidro
Alça de platina
Bico de Bunsen
Tubo de cultura (que continha cultura de bactérias)
Solução salina
Corante azul de metileno
Água
Papel toalha
Microscópio
Primeiramente foi ligado o Bico de Bunsen, pego a alça de platina e flambada no fogo até ficar laranja, visto que o fogo deixaria a alça esterilizada neste ponto. Então, foi deixada de lado para esfriar, pois se colocássemos ela quente dentro do tubo de cultura para coleta de bactérias o calor poderia mata-las. Também foi flambada a boca do tubo de cultura, passando ela pelo fogo três vezes, tomando o cuidado para o calor não estourar o tubo. Após ambos materiais esfriados, foi colocada a alça de platina dentro do tubo de cultura para a coleta de bactérias, e assim realizar o esfregaço na lâmina de vidro que já havia sido pega pela outra integrante do experimento. 
Foi feita na lâmina o esfregaço em movimentos rotacionais, formando um esfregaço em forma oval e uniforme. Foi passada a lâmina, com o lado em que havia se colocado as bactérias contrária à chama do bico de Bunsen, para ela secar e não haver presença de água, e assim fixar o esfregaço na lâmina. 
Após o esfregaço, a lâmina foi levada até próximo a pia para, primeiramente, cobrir o esfregaço com o corante azul de metileno, esperado passar três minutos para ocorrer sua ação e depois lavado rapidamente em água corrente. Foi feito a secagem da lâmina com papel toalha, com o cuidado de não passar sobre o esfregaço e retirá-lo. 
Após a secagem, foi colocada a lâmina no microscópio e feita sua visualização, com objetivo de imersão e reconhecida sua estrutura morfológica. 
4 RESULTADOS E DISCUSSÃO
A visualização do esfregaço foi feita em microscopia, com objetivo de imersão, com a intenção de analisar sua estrutura morfológica. Em nossa lâmina, foi visualizada duas estruturas diferentes, estafilococos, um formato de bactérias em forma de cacho de uva, e alguns cocos espalhados. Abaixo, uma representação do que foi visto no microscópio: 
Figura 1 – Representação das bactérias visualizadas em microscópio eletrônicoCocos
Estafilococos
5 CONCLUSÃO
Por meio desse experimento de coloração simples, foi aprendido a confeccionar preparações coradas para observação ao microscópio, realizar o esfregaço e identificar as estruturas morfológicas presentes na preparação, que no caso foram os cocos e os estafilococos. 
REFERÊNCIAS
<https://www.passeidireto.com/arquivo/16534267/coloracao-simples-e-diferenciada>. Acesso em 19/03/2018. 
JORGE, O.C. Microbiologia: Atividades práticas . 2. Ed. São Paulo: Santos, 
2008