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BIOQUÍMICA 2018 AULA 4 – IDENTIFICAÇÃO DE CARBOIDRATOS INTRODUÇÃO Os carboidratos podem ser identificados por meio de várias reações. Algumas dessas reações envolvem a formação de complexos corados, e a especificidade da identificação depende da estrutura dos carboidratos. Assim, há reações gerais e outras para estruturas mais específicas, como aquelas, para aldoses, cetoses, mono e dissacarídeos redutores, etc. REAGENTES • Solução de Fehling A (dissolução de 34,65 g de CuSO4.5H2O em água e diluição a 500 mL) • Solução de Fehling B (dissolução de 125 g de KOH e 173 g de NaKC4H4O6.4H2O – tartarato duplo de sódio e potássio, sal de Rochelle – em água e diluição a 500 mL) • Reagente de Benedict (dissolução de 173 g de Na3C6H5O7.2H2O – citrato de sódio – e 100 g de carbonato de sódio anidro em água e diluição a cerca de 850 ml, adição a esta solução de uma outra solução preparada por dissolução de 17,4 g de CuSO4.5H2O em 100 ml de água e diluição a 1 L) OBJETIVOS Executar testes qualitativos para reconhecimento de carboidratos. ENSAIOS I- TESTE DE FEHLING BIOQUÍMICA 2018 É um teste para açúcares redutores. O grupo carbonila é oxidado a carboxila. O íon metálico é reduzido. Os glicídios que contenham um grupo aldeído ou cetona potencialmente livre existem em solução aquosa em equilíbrio com uma forma enodiol, que é um agente redutor ativo. Em meio ligeiramente alcalino esta forma é favorecida e a sua presença assegura a redução de íons cobre (II) a cobre (I) com a formação de hidróxido cuproso que, por aquecimento, se converte em óxido cuproso, um composto insolúvel de cor vermelha que precipita. Para manter os íons cobre (II) em solução em meio alcalino o reagente de Fehling contém um agente complexante, o íon tartarato. Experimento: 1) Misturar 1 mL da solução de Fehling A com 1 mL da solução de Fehling B num tubo de ensaio. 2) Adicionar 0,5 mL da solução amostra e agitar. 3) Aquecer à fervura num banho de água durante 5 minutos. 4) Tomar nota do eventual aparecimento de um precipitado avermelhado. POSITIVO: Formação de um precipitado avermelhado. II – TESTE DE BENEDICT É um teste semelhante ao teste de Fehling. Para manter os íons cobre (II) em solução em meio alcalino o reagente de Benedict contém um agente complexante, o íon citrato. É uma solução que não se deteriora com tanta facilidade como as de Fehling. Experimento: BIOQUÍMICA 2018 1) Colocar 3 mL do reagente de Benedict num tubo de ensaio. 2) Adicionar 0,5 mL da solução amostra e agitar. 3) Aquecer à fervura num banho de água durante 5 minutos. 5) Tomar nota do eventual aparecimento de um precipitado avermelhado. POSITIVO: Formação de um precipitado avermelhado. III- PESQUISA DE POLISSACARÍDEOS (TESTE DO IODO) 1) Adicionar em diferentes tubos de ensaio 2,0 mL de cada amostra (mel, sacarose, amido de milho) e 2,0 mL de água como branco. 2) Adicionar em cada tubo 5 gotas de solução de lugol (tintura de iodo). 3) Por fim, adicione 5 gotas de NaOH aproximadamente 1 mol L-1 4) Anotar a cor desenvolvida em cada tubo. POSITIVO: Formação de cor azul roxeada. Pense, discuta em grupo e responda: Porque o mel de abelha e a sacarose não apresentam coloração roxa no teste enquanto o amido apresenta uma cor azul ou roxa intensa? Qual a principal diferença estrutural desses açúcares?
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